静置培养MDCK细胞的生长及代谢动力学研究

为研究MDCK细胞的生长及代谢动力学特征,试验采用低密度静置培养,每天测定细胞生长密度和活力,并利用多参数生化分析仪测定培养液中Gluc、Lac、Gln和NH4+的含量,计算细胞指数生长期的比代谢速率。结果表明:MDCK细胞生长曲线呈"S"型,最大增殖密度为53.8×104 upf·mL-1,倍增时间为24.2h;对数生长期Gluc和Gln的比代谢(消耗速率为-2.20 mg·(106cells·d)-1和-3.85μmol·(106cells·d)-1,Lac和NH4+的比生成)速率为2.25mg·(106cells·d)-1和2.22μmol·(106cells·d)-1。     

伪狂犬病毒在BHK-21悬浮细胞中的增殖特性

为考察BHK-21悬浮细胞增殖伪狂犬病毒（Pseudorabies virus, PRV）工艺参数及病毒增殖过程中代谢动力学，将PRV接种于BHK-21悬浮细胞，考察接毒时细胞密度、病毒感染复数（MOI）及收毒时间对病毒效价的影响，测定培养过程中葡萄糖（Gluc）、乳酸（Lac）和谷氨酰胺（Gln）浓度，计算病毒增殖过程中各参数代谢速率。结果显示，将MOI为0.01的PRV病毒接种BHK-21悬浮细胞，其病毒滴度在42 h达最高8.5 lgTCID₅₀/mL。代谢参数检测结果表明，BHK-21细胞在接毒36 h后细胞开始出现死亡。PRV在BHK-21悬浮细胞中的增殖特性为伪狂犬病毒的规模化培养及疫苗开发提供了技术基础。     

MDCK单细胞悬浮生长的驯化筛选及其在AIV增殖上的初步应用

采用逐步降低培养基中血清含量的方法获得可悬浮生长的MDCK-Sus细胞株,对其生长代谢情况、细胞膜表面病毒受体丰度,以及在生物反应器中悬浮培养该细胞对禽流感H9亚型病毒增殖进行了初步应用研究。结果表明,MDCK-Sus细胞株可完全适应无血清营养条件并呈单细胞悬浮生长状态,细胞生长旺盛,平均比生长速率达到0.556 d-1,最大活细胞密度达到2.42×106cells·m L-1,并可检测出其细胞膜表面具有正常丰度的唾液酸-α-2,3-半乳糖糖链受体。在MOI为0.05,TPCK处理的胰蛋白酶作用浓度为1μg·m L-1的条件下,AIV-H9亚型病毒JS03株可在MDCK-Sus细胞中获得较好的增殖HA效价,达到8log2·25μL-1。     

热带山地雨林不同结构与功能幼树的叶片特征比较

植物的生理生态特征决定了植物在生态系统中的分布模式和物种的丰度。在样地调查的基础上,应用Li-6400光合测定系统,研究了海南热带山地雨林3个层次的6个优势种与10个伴生种的光合作用参数,并测定了相应叶片的比叶面积。结果表明:16个树种的比叶面积为71.16~139.90 cm2·g~(-1)、单位面积最大光合速率(A-area)为2.95~13.27μmol·m~(-2)·s~(-1)、单位干质量最大光合速率(A-mass)为22.7~126.5μmol·kg~(-1)·s~(-1),单位面积暗呼吸速率(Rd-area)为0.02~1.15μmol·m~(-2)·s~(-1)、单位干质量暗呼吸速率(Rd-mass)为0.19~12.61μmol·kg~(-1)·s~(-1),光补偿点(LCP)为2.5~32.2μmol·m~(-2)·s~(-1),表观量子效率(Ф)为0.006 6~0.042 8μmol·μmol~(-1)。幼树的比叶面积随物种成树所在层次降低而减少(上层种中层种下层种),与单位干质量最大光合速率的次序一致,而与光补偿点的次序相反,但差异均不显著(P0.05)。中层种的幼树具有较高的暗呼吸速率和表观量子效率。优势种的单位面积最大光合速率显著大于伴生种(P0.05);优势种的单位质量最大光合速率、暗呼吸速率(Rd)和表观量子效率也大于伴生种,但差异不显著(P0.05);优势种的比叶面积和光补偿点低于伴生种,但差异不显著(P0.05)。优势种的暗呼吸速率和比叶面积显著正相关(P0.05);伴生种的暗呼吸速率和比叶面积不相关(P0.05)。不同类型幼树的叶片结构与功能的生态位分化,从功能性状的角度,为热带雨林维持高生物多样性以及保持物种长期共存提供了一个可能的解释。     

Fe~(3+)对赤潮异弯藻(Heterosigma akashiwo)生长的影响

为探索Fe3 与赤潮发生的关系,采用模拟生长方法研究了Fe3 对赤潮异弯藻(Heterosigmaakashiwo)生长的影响。Fe3 是赤潮异弯藻生长的限制因子,低于0.01μmol·L-1会抑制该藻的生长,在0.01￣0.05μmol·L-1时赤潮异弯藻的比生长速率与Fe3 浓度成正比关系;赤潮异弯藻的最大生长速率μm-Fe=0.2728,Ks-Fe=0.0169μmol·L-1。EDTA是赤潮异弯藻生长的限制因子,EDTA对于赤潮异弯藻生长的限制浓度是0.013μmol·L-1,EDTA浓度小于0.013μmol·L-1时,赤潮异弯藻的生长明显受到抑制;EDTA浓度大于0.013μmol·L-1时,赤潮异弯藻的比生长速率与EDTA浓度成正比关系(μ-EDTA=2.0742x-0.0114,r2=0.9248),浓度为0.13μmol·L-1时藻的生长速率接近最大值,赤潮异弯藻的最大生长速率μm-EDTA=0.3114,Ks-EDTA=0.1160μmol·L-1。探讨了不同Fe3 /EDTA比值对赤潮异弯藻生长的影响,Fe3 /EDTA比值为0.2时藻细胞生长速率达到最大,表明比值为0.2时最适合赤潮异弯藻的生长。因此,赤潮异弯藻适合在Fe3 、EDTA浓度分别大于0.05、0.13μmol·L-1、Fe3 /EDTA=0.2的条件下生长。     

碳源和乙醇调控雨生红球藻生长与虾青素积累

[目的]雨生红球藻(Haematococcus pluvialis)生长速率和虾青素积累量决定着雨生红球藻商业化生产的经济效益。本文旨在建立提高雨生红球藻生长和虾青素积累的新方法。[方法]以BG-11为基础培养基,分别以乙酸钠和二氧化碳为碳源,添加少量乙醇,探讨乙醇和碳源对雨生红球藻生长及虾青素积累的效应。[结果]添加乙醇显著提高了雨生红球藻生长及虾青素积累。(BG-11+乙酸钠)+乙醇培养的雨生红球藻生长迅速,在第4天细胞密度上升到1.587×106 cells·mL~(-1),而对照组(BG-11+乙酸钠)在第8天细胞密度才上升到1.187×106 cells·mL~(-1)。(BG-11+乙酸钠)+乙醇培养的雨生红球藻在第14天生物量和虾青素含量分别达2.74g·L-1和3.51%(干重),分别是对照组的2.98倍和1.71倍,显著高于对照组。同样,(BG-11+CO2)+乙醇培养的雨生红球藻在第6天细胞密度上升到1.236×106cells·mL~(-1),在第14天生物量和虾青素含量分别达2.59g·L-1和3.1%(干重),均高于对照组(BG-11+CO2)的生物量(0.7g·L-1)和虾青素含量(1.43%,干重)。[结论]研究结果为建立基于添加乙醇提高雨生红球藻生长速率和虾青素积累量的简单易行规模化技术体系提供了科学参考。     

补料及其策略对气升式光生物反应器中球等鞭金藻生长的影响

利用10 L封闭式光生物反应器对球等鞭金藻(Isochrysis galbana)进行了分批和分批补料高密度培养,补料使用了全营养和部分营养两种培养基。结果表明,补料策略对球等鞭金藻的生长有明显的影响,并发现全营养培养基和部分营养培养基交替补料是一种较好的补料方式。在10 L封闭式光生物反应器中分批培养的平均比生长速率为0.218 d-1,6 d时藻细胞密度达到最大,其值为3.57×106个/m L;分批补全营养培养基培养的平均比生长速率为0.388 d-1,培养6 d时的藻细胞密度为7.09×106个/m L,在10 d时藻细胞密度达到最大,其值为5.28×107个/m L,是分批培养的14.8倍;而全营养培养基和部分营养培养基交替补料分批培养至6 d时藻细胞密度达到1.69×107个/m L,平均比生长速率为0.663 d-1。     

沙棘光合速率与气象因子变化规律的研究

研究表明,无论是在迅速生长期还是在果实成熟期,沙棘的光合速率具有明显的日变化和季节变化,其在6月的月平均值为11.59μmol·m2·s-1,而9月的为9.13μmol·m2·s-1;沙棘光合速率与气温、光合有效辐射、相对湿度之间有显著的相关关系,6月的复相关系数分别为0.835、0.736、0.913,而9月的分别为0.809、0.702、0.901,6月的复相关系数高于9月,说明气象因子对沙棘光合速率的影响在迅速生长期比果实成熟期要大.     

安徽油茶不同品种光合生理生态特性的研究

选择安徽油茶品种大别山1号、2号、3号和4号作为试验材料,对其光合生理生态特性进行了比较研究。结果表明,不同品种日平均净光合速率差异显著,其变异范围是2.864~5.019μmol.m-2.s-1,不同品种的净光合速率大小依次为大别山1号>大别山3号>大别山4号>大别山2号。不同品种鲜叶养分含量的变异范围分别为N 10.26~10.76 mg·g-1,P 0.277~0.312 mg·g-1,K 15.90~21.93 mg·g-1;比叶重变化为234.41~273.35 g.m-2;叶绿素含量2.38~3.25 mg·g-1。油茶净光合速率受到叶片养分(N、P、K)、叶绿素含量及比叶重的影响,但不同品种表现出一定差异性。     

浒苔和条浒苔生长及其氨氮吸收动力学特征研究

研究了浒苔(Enteromorpha prolifera)和条浒苔(Enteromorpha clathrata)在室内条件下的生长及其氨氮吸收动力学特征。结果表明:浒苔和条浒苔藻体体重日生长率分别为17.30%和16.82%;浒苔和条浒苔藻体幼苗在温度25℃和光照140μmol/(m2.s)的条件下达到最大体长日生长率,分别为78.9%和82.1%。在1~10 g/L密度范围内,浒苔和条浒苔对NH4+-N的吸收速率随密度和时间的增加而增加,当藻体密度为10 g/L时,NH4+-N浓度分别下降了86.43%和84.13%。两种浒苔对NH4+-N吸收速率与介质中NH4+-N浓度呈显著的线性关系,在NH4+-N浓度为400μmol/L时,30 min后浒苔和条浒苔的吸收速率分别为421和409μmol/(gDW.h),说明两种浒苔吸收氨氮的方式以被动扩散为主。在400μmol/L的起始浓度下,浒苔和条浒苔对NH4+-N的吸收速率随时间变化呈现3个不同阶段:在75 min内呈快速吸收阶段,75~185 min为内部NH4+-N控制的吸收阶段,250 min后为外界NH4+-N浓度控制的吸收阶段;在700 min后,...     

一株嗜酸性氧化亚铁硫杆菌的分离及其氧化活性的研究

本研究从铜陵新桥矿区的高硫矿堆废水中分离一株嗜酸菌S t1,经生理生化特征及16S rDNA分子鉴定,确定其为嗜酸性氧化亚铁硫杆菌。该菌株分别在含有FeSO4·7H2O、S0、黄铁矿石颗粒（FeS2）的9K无机盐液体培养基中获得生长所需要的能量。结果嗜酸菌S t1对Fe2＋氧化速率最快,培养到36h时溶液中44.1g·L-1 FeSO4·7H2O有95%被氧化;S0为能量底物的培养体系中,培养到26d时培养液中SO42-浓度达到2.2412 mg· mL-1,pH值降至1.18;黄铁矿石颗粒（FeS2）为能量底物的培养体系中,SO42-平均生成速率为1.3602 mmol·L-1·d-1,黄铁矿石颗粒氧化速率达到0.068mmol·d-1·g-1。     

文心兰不定芽生根培养基配方的优化与移栽基质筛选

为了优化文心兰生根培养基,以文心兰不定芽为材料,1/2 MS为基本培养基,在(25±1)℃,30μmol·(m2·s)-1,10h·d-1光照时间的条件下优化文心兰生根配方,同时筛选移栽基质。结果表明:IBA是影响文心兰不定芽生根的主导因子,其次是蔗糖;1/2 MS+IBA 0.7mg·L-1+NAA 0.4mg·L-1+蔗糖40g·L-1有利于文心兰不定芽的生根,生根率98.49%、根数9.1条、根长1.24cm、茎高1.49cm、苗高5.08cm、茎粗0.30cm;刨花是文心兰较佳的移栽基质,整体效果高于其它基质,60d后苗高6.75cm,茎粗0.55cm,鲜重1.20g,根冠比0.44。     

小麦成熟胚离体培养研究

以美国小麦品种Overley成熟胚作为外植体进行离体培养,研究外源激素对小麦成熟胚诱导愈伤组织、分化出苗以及试管苗增殖的影响。试验结果表明,在MS培养基中添加2,4-D3mg·L-1愈伤组织诱导频率较高,成愈率为84.0%;在添加有KT2～3mg·L-1的MS分化培养基中愈伤组织分化率较高,可达85%以上;将试管苗转接至添加0.2mg·L-1的NAA和0.5～2.0mg·L-1的6-BA的培养基中,试管苗有一定的分化增殖,但最高分化率仅为33.3%,增殖系数2.05。     

重组人白介素-10对兔皮肤移植排斥反应及外周血T细胞亚群的影响

目的 观察重组人白介素-10（rhIL-10）对白兔皮肤移植排斥反应及外周血T细胞亚群的影响.方法 36只白兔随机等分为供体组和受体组,再将18只受体白兔随机分为rhIL-10组（5、10μg·kg-1·d-1）、环孢素（CsA）阳性对照组（5、10 mg· kg-1·d-1）、rhIL-10＋ CsA联合组（5μg·kg-1·d-1 hIL-10＋5 mg·kg-1·d-1 CsA）、生理盐水阴性对照组（1 mL/d）.在移植前1d至术后8d连续肌注药物,观察各组皮片移植排斥反应情况及外周血CD4＋和CD8＋细胞数、CD4/CD8细胞比值.结果 rhIL-10组排斥反应发生时间比阴性对照组延长（P＜0.05）,而rhIL-10＋ CsA组排斥反应发生时间比低剂量rhIL-10及CsA组延长（P＜0.05）.在发生急性排斥反应时,CD4＋细胞数及CD4/CD8细胞比值升高,在皮片坏死时达到峰值.结论 rhIL-10可抑制白兔皮肤移植排斥反应,CD4/CD8细胞比值有助于监测排斥反应发生.     

温度和盐度对近亲真宽水蚤耗氧率与窒息点的影响

在实验室条件下研究了不同温度、盐度下近亲真宽水蚤Emytemora affinis的耗氧率和窒息点。结果表明：温度和盐度对近亲真宽水蚤的个体耗氧量和耗氧率影响显著。当水温为5—25℃时,近亲真宽水蚤的个体耗氧量和耗氧率随温度的升高而呈缓慢上升,当水温为25～33℃时,个体耗氧量和耗氧率则骤然升高,其回归方程分别为y=0．1354e0.0574a（R2=0．9582）和y=0．7746e0.574a（R2=0．9584）;当温度为5—33℃时,窒息点为（0．96±0．04）～（3．94±0．17）mg／L。盐度为5～15时,蚤体的个体耗氧量和耗氧率随盐度的升高而升高,当盐度为15～35时,个体耗氧量和耗氧率呈明显下降趋势,其回归方程分别为Y=-0．0003x0＋O．0061x＋0．4549（R。=0．9047）和y=-0．002x2＋0．0352x＋2．6059（R2=0．9047）;盐度为5～40时,窒息点为（0．46±0．05）～（0．98＋0．03）mg／L。     

广西优良珍贵树种灰木莲的组织培养

【目的】探索灰木莲组培快繁体系,为灰木莲的进一步开发和利用提供参考依据。【方法】以灰木莲盆栽苗的带芽茎段为外植体,以MS为基本培养基,通过添加不同种类、不同浓度植物生长调节剂,研究不同培养基对腋芽萌发、芽增殖及生根的影响。【结果】1～5号培养基均可以诱导灰木莲腋芽萌发,其中3号培养基MS＋6-BA0.5mg/L＋NAA0.1mg/L腋芽萌发速度最快,芽的诱导率89.3%;添加KT（Kinetin,激动素）的10～13号培养基增殖系数为2.2～2.7,没有添加KT的6～9号培养基增殖系数为1.8～2.2,11号培养基MS＋6-BA0.3mg/L＋NAA0.05mg/L＋KT1.0mg/L芽的增殖系数可达2.7,为最适宜的增殖培养基;添加生长调节剂浓度在0.5mg/L以上的17～21号培养基能诱导灰木莲组培苗生根,其中NAA浓度为0.5、1.5、2.0mg/L生根率分别为33.3%、45.4%、58.3%,21号培养基1/2MS＋NAA2.0mg/L上生根率最高。【结论】初步建立灰木莲组织培养体系,组培苗的芽诱导率和增殖率较高,苗木长势良好。     

不同施肥处理对大花蕙兰超氧化物歧化酶活性的影响

以两年生大花蕙兰苗为试验材料,采用松树皮基质、不同肥料配比对大花蕙兰的3个品种进行处理,并以生产中常用的日本S333-100缓释肥为对照,研究测定不同肥料配比下植株生长过程中超氧化物歧化酶活性变化特征。结果表明,在整个生长过程中,不同施肥处理对大花蕙兰SOD酶活性变化趋势整体表现为"升—降—升",处理4的植株体内酶活性比其他处理高,品种‘YX52’的酶活性较其他两个品种高,具有较强的抗性。     

维生素C及植物生长调节物质对油茶花粉萌发率的影响

以油茶‘华硕’Camellia oleifera‘Huashuo’花粉为试材,运用琼脂培养基萌发法研究维生素C（AsA）及植物生长调节物质对油茶花粉萌发率的影响。结果表明：适宜质量浓度的维生素（CAsA）,吲哚乙酸（IAA）,萘乙酸（NAA）,2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）和赤霉素（GA₃）对油茶花粉萌发率具有显著促进作用,其中单因素处理AsA质量浓度为20 mg·L^-1时,花粉萌发率达到最高（65.86%）,比对照提高了23.80%;GA₃质量浓度为10 mg·L^-1时花粉萌发率最高,达74.22%;NAA和2,4-D处理花粉萌发率在质量浓度为1.0 mg·L^-1时最高,分别达到61.33%和60.09%,IAA在质量浓度为5.0 mg·L^-1时花粉萌发率达到最大（71.52%）;适宜质量浓度的IAA,GA₃和AsA配合使用能显著提高油茶花粉萌发率。根据适宜质量浓度设计3因素4水平正交实验,发现以5.0 mg·L^-1 IAA + 5.0 mg·L^-1GA₃ + 20.0 mg·L^-1AsA最优,油茶花粉萌发率达到82.91%。图3表3参13     

垂花蕙兰种子无菌播种和快速繁殖

以垂花蕙兰种子为试验材料,采用种子→原球茎→完整植株的途径,研究基本培养基、植物生长调节剂、有机添加物和活性炭等关键因素对垂花蕙兰种子萌发、原球茎增殖、分化和生根等各培养阶段的影响,探讨垂花蕙兰无菌播种和快速繁殖的关键技术。结果表明,种子在1/2MS ＋ 6-BA 1.0 mg·L-1 ＋ NAA 1.0 mg·L-1 ＋ AC 0.5 g·L-1 ＋蔗糖20 g·L-1 培养中培养60 d可形成原球茎,种子萌发数可达90粒;原球茎在1/2MS ＋ 6-BA 1.0 mg·L-1 ＋ NAA 0.5 mg·L-1 ＋ KT 1.0 mg·L-1 ＋ AC 0.5 g·L-1 ＋ 蔗糖20 g·L-1 培养基上增殖效果好,增殖系数为6.8;原球茎在1/2MS ＋ 6-BA 0.5 mg·L-1 ＋ NAA 0.1 mg·L-1 ＋ AC 0.5 g·L-1 ＋ 蔗糖20 g·L-1 上培养分化效果好,分化率高达89.2%;幼苗在1/2MS ＋ IBA 1.0 mg·L-1 ＋50 g·L-1 土豆泥＋蔗糖20 g·L-1 上培养30 d可生根,生根率为94.5%,苗高可达5.6 cm。     

白刺的原生质体制备与培养

以西伯利亚白刺幼苗子叶为材料,采用L(934)正交试验,比较酶组合、渗稳剂甘露醇浓度、酶解温度和酶解时间对其原生质体制备的影响。试验结果表明,适宜酶解条件为1%纤维素酶OnozukaR-10+0.2%果胶酶Y-23+0.8mol·L-1甘露醇,28℃下酶解3.5h。而且,经过预处理的子叶,其原生质体得率优于未处理的。在MS+2,4-D1mg·L-1+6-BA0.5mg·L-1+0.7mol·L-1甘露醇的固液双层培养基中,原生质体能形成细胞团。