观光木叶黄酮类物质纯化、化学成分及抗氧化活性研究

采用D101大孔树脂对观光木叶进行柱层析,提取黄酮类物质;先后用10%、30%、50%和70%乙醇/水进行梯度洗脱,得到4个洗脱组分,测定了各个组分的总黄酮含量;采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和2,2-连氮-2-(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)的清除实验评价了各组分黄酮的抗氧化活性;使用超高效液相色谱串联四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱仪联用(UPLC-Q-EXCTIVE-MS)技术对纯化后黄酮纯度最高的组分进行了成分鉴定。结果表明:观光木叶乙醇提取物经过D101大孔树脂分离后,黄酮类物质主要聚集在30%乙醇/水洗脱组分,黄酮纯度为28.40%,并且对DPPH和ABTS的清除能力最强,清除率分别达到87.22%和99.07%,半抑制浓度(IC_(50))分别为112.753和65.528 mg/L;从30%乙醇/水洗脱组分中初步鉴定了7个黄酮类化合物,分别为3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黄酮、酮洛芬、白麻苷、三叶豆苷、假荆芥属苷、射干苷、川陈皮素。     

超声波辅助高压法提取金针菇黄酮的纯化及活性测定

为了获知超声波辅助高压法所提取金针菇黄酮的抑菌和抗氧化活性以及D101型大孔吸附树脂纯化金针菇黄酮的最优条件,利用D101型大孔树脂对超声波辅助高压法所提取的金针菇黄酮进行纯化,并对纯化条件进行了优化研究,而后对纯化后黄酮抑制大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的能力进行了检测;又以抗坏血酸(VC)为对照,对黄酮清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)、超氧阴离子自由基(·O2-)、羟基自由基(·OH)和2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐自由基(ABTS·)的能力进行测定.结果表明,D101型大孔树脂纯化金针菇黄酮的最适条件为:采用浓度为1.2 mg/mL、pH值为5的上样液,在上样流速为0.75 mL/min的条件下进行吸附;吸附饱和后用70％的乙醇60mL以1 mL/min洗脱.在此条件下得到的黄酮纯度是纯化前的2.71倍.超声波辅助高压法所提取的金针菇黄酮对四种菌均有不同程度的抑制作用,其抑菌程度大小顺序为:大肠杆菌＞沙门氏菌＞金黄色葡萄球菌＞枯草芽孢杆菌.金针菇黄酮对DPPH·、·O2-、·OH和ABTS·均具有一定的清除能力,但弱于VC.可知超声波辅助高压法所提取的金针菇黄酮具有抑菌及抗氧化活性,D101型大孔吸附树脂纯化金针菇黄酮效果较好.     

山核桃壳中黄酮提取及其抗氧化活性测定

以生产山核桃仁产生的废弃物山核桃壳为原料,采用超声波辅助提取法得到粗提液,经大孔树脂柱层析,采用30%、50%、70%乙醇梯度洗脱,将洗脱物真空冷冻干燥,研究洗脱物黄酮纯度和抗氧化物质对ABTS自由基、DPPH自由基、羟自由基的清除能力及还原铁离子的能力。结果表明,黄酮纯度高低依次为:30%洗脱物50%洗脱物粗提物70%洗脱物;清除ABTS自由基的能力大小依次为:维生素C2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)30%洗脱物50%洗脱物70%洗脱物;清除DPPH自由基的能力大小依次为:维生素C30%洗脱物50%洗脱物70%洗脱物BHT;清除羟自由基的能力大小依次为:维生素C30%洗脱物50%洗脱物70%洗脱物;还原铁离子能力大小依次为:维生素CBHT30%洗脱物50%洗脱物70%洗脱物。30%洗脱物抗氧化性最强,与黄酮纯度呈正相关。     

大孔树脂分离纯化柞树叶总黄酮及其抗氧化活性研究

[目的]研究柞树叶总黄酮的纯化工艺及抗氧化活性.[方法]采用静态吸附与解析的方法,通过比较6种大孔树脂的吸附和解析性能,优选适宜的大孔树脂,并优化适合分离柞树叶总黄酮的解析条件.以VC为对照,对其还原力、DPPH自由基(DPPH·)和超氧阴离子自由基(O2-·)的清除能力进行研究.[结果]D101型大孔树脂纯化柞树叶总黄酮吸附与洗脱效果最好,其纯化最佳工艺条件为粗提液浓度0.55 mg/mL、上样流速1.5 mL/min、洗脱剂40％乙醇(V/V)、洗脱流速1.5 mL/min,柞树叶总黄酮纯度可达65.5％;分离纯化后柞树叶总黄酮具有良好的总还原能力以及清除DPPH自由基和抗超氧阴离子自由基活性,其总还原力大于VC的还原力,当质量浓度为0.03 mg/mL时,对DPPH自由基和抗超氧阴离子自由基的清除率分别为85.9％和65.9％.[结论]D101大孔树脂可用于柞树叶总黄酮的分离纯化,柞树叶总黄酮具有较强的抗氧化活性.     

大孔树脂分离纯化荞麦壳黄酮及其体外抗氧化活性

优化荞麦壳黄酮的大孔树脂分离纯化工艺，并比较纯化前后抗氧化活性。采用D101大孔树脂吸附法研究荞麦壳黄酮的动态吸附和解吸条件，探究纯化前后荞麦壳黄酮的 DPPH，·OH,■清除能力和总抗氧化能力，并进一步评价荞麦壳黄酮对SV40MES13细胞氧化损伤的保护和修复作用。结果表明：D101大孔树脂分离纯化荞麦壳黄酮的最佳工艺参数为吸附流速 2 mL/min、样品浓度 6. 0 mg/mL、上样体积 2～3 BV、水洗体积3 BV、洗脱剂乙醇体积分数70%和洗脱流速2 mL/min，分离效果较佳，经纯化，荞麦壳黄酮含量由30.82%提高到 76.17%。纯化后荞麦壳黄酮的 DPPH,■清除能力和总抗氧化能力均高于纯化前。荞麦壳黄酮对高糖或H₂O₂诱导的 SV40MES13细胞氧化损伤具有很强的修复作用，纯化后的荞麦壳黄酮修复作用均高于纯化前，但未显示保护作用。研究结果为荞麦壳黄酮作为天然的抗氧化剂提供科学依据，为荞麦壳作为功能性食品原材料的开发提供了应用前景。     

大孔吸附树脂纯化甘草黄酮类化合物的研究

[目的]探讨大孔吸附树脂对甘草（RADIXRHIZOMAGLYCYRRHIZAE）黄酮的纯化条件。[方法]采用5种大孔吸附树脂ADS-7、D101、HPD-300、HPD-910和AB-8吸附甘草黄酮类化合物,并考察了样品浓度,洗脱剂乙醇浓度,洗脱剂乙醇体积等影响吸附性能的因素。[结果]ADS-7型大孔吸附树脂对甘草黄酮类化合物有较大的吸附率和洗脱率,其用于纯化甘草黄酮的最佳上样浓度是1.2 mg/ml,洗脱剂为5BV体积分数为0.70的乙醇,纯化后的黄酮粉黄酮含量47.1%,精制率211.2%。[结论]ADS-7树脂对黄酮类化合物有较好的吸附纯化作用,可为甘草黄酮的纯化提供参考依据。     

黑莓花色苷的分离纯化与抗氧化活性研究

研究大孔树脂分离纯化黑莓花色苷,并以维生素C为对照研究不同浓度黑莓花色苷的抗氧化活性.结果表明,大孔树脂AB-8对黑莓花色苷具有较好的吸附与解吸能力,在25℃条件下,树脂对黑莓花色苷的吸附平衡时间为4h,解吸平衡时间为3h.最佳的分离条件:上样速率1.6 mL/min,上样体积1100 mL粗提液,3倍柱床体积的75％乙醇,以1.0 mL/min洗脱速率洗脱,在此条件下产品的得率为1.22％,花色苷回收率75.45％,纯度86.50％.比较研究黑莓花色苷提取物清除DPPH自由基能力及抑制羟自由基能力,结果表明,黑莓花色苷清除DPPH自由基能力低于相同浓度的维生素C,而其抑制羟自由基能力高于维生素C,这可能与黑莓花色苷单体的分子结构有关.     

绿色溶剂提取玉米芯黄酮的纯化及活性测定

为优化低共熔溶剂提取的玉米芯总黄酮的纯化工艺和测定纯化黄酮的活性,本文首先对几种不同特性的大孔吸附树脂进行筛选,并优化了吸附纯化工艺,然后以对羟基自由基(·OH)、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH)和2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐自由基(ABTS)的清除性能为指标,评价玉米芯黄酮的抗氧化性;又通过体外抑制细菌生长实验来测定黄酮的抑菌性;最后通过体外抑制α-淀粉酶活性实验测定其降糖活性。结果表明,XAD-2树脂和D101树脂在纯化玉米芯黄酮时效果相当,浓度1 mg·mL^-1、pH 4.0的待吸附液以15 mL·h^-1的速度上样吸附,再用70 mL 70%乙醇洗脱液以60 mL·h^-1的速率对树脂进行洗脱,最终可将玉米芯黄酮分别纯化2.05和1.94倍。纯化后的玉米芯黄酮对自由基的清除能力虽弱于V_C,但较之纯化前有所增强;玉米芯黄酮对实验细菌均有抑制性,纯化后的玉米芯黄酮对大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用强于纯化前;玉米芯黄酮有降糖活性,较高浓度时其降糖能力接近阿卡波糖。可知低共熔溶剂提取的玉米芯黄酮有抗氧化、抑菌和降糖活性,XAD-2大孔树脂和D101大孔树脂皆可用于纯化玉米芯黄酮,纯化效果好。     

柳叶腊梅叶乙醇提取物成分分析及其体外抗氧化研究

[目的]柳叶腊梅是我国特有品种,在民间常被畲族人民用于治疗感冒及肠胃不适,曾被誉为江西四大著名药材之一.柳叶腊梅叶中富含多种生物活性成分,其中,黄酮类化合物是柳叶腊梅叶中含量较高且具有生物活性的成分之一.通过鉴定柳叶腊梅叶乙醇提取物中的黄酮类化合物的成分组成,测定其体外抗氧化活性,确定其中主要抗氧化活性物质等,为柳叶腊梅叶的功能作用提供依据.[方法]柳叶腊梅叶经超声提取、聚酰胺树脂纯化得到柳叶腊梅叶乙醇提取物.利用LC-MS对柳叶腊梅叶乙醇提取物的成分进行分析,推测出可能的成分后,采用HPLC比对标准品,并通过加标实验确定其具体成分.体外抗氧化实验测定柳叶腊梅叶乙醇提取物清除自由基能力和还原力.利用HPLC测定柳叶腊梅叶乙醇提取物清除ABTS和DPPH自由基的主要活性物质.[结果]利用LC-MS和HPLC共定性及定量测出9种黄酮类物质,包括芦丁(2.612±0.275)μg/mg、金丝桃苷(5.308±0.093)μg/mg、异槲皮苷(13.301±0.072)μg/mg、山奈酚-3-O-芸香糖苷(1.321±0.097)μg/mg、木犀草素-5-O-葡萄糖苷(13.479±0.041)μg/mg、紫云英苷(13.959±0.025)μg/mg、阿福豆苷(9.781±0.033)μg/mg、槲皮素(45.489±1.206)μg/mg、山奈酚(51.293±0.715)μg/mg等9种黄酮单体物质.其中,山奈酚-3-O-芸香糖苷和阿福豆苷在柳叶腊梅叶总黄酮中首次发现.柳叶腊梅叶乙醇提取物具有良好的抗氧化活性,其体外清除ABTS自由基和DPPH自由基的IC50值分别为(54.588±4.117)μg/mL和(28.053±1.778)μg/mL.柳叶腊梅叶总黄酮在20μg/mL至120μg/mL的选定范围内,铁还原能力呈剂量依赖性.利用HPLC测定出柳叶腊梅叶乙醇提取物清除ABTS和DPPH自由基的主要活性物质为槲皮素和山奈酚.另外,金丝桃苷、异槲皮苷和紫云英苷3种黄酮单体物质,也具有清除ABTS自由基和DPPH自由基的作用,但活性作用明显弱于槲皮素和山奈酚.[结论]利用LC-MS和HPLC鉴定出柳叶腊梅叶乙醇提取物9种成分.柳叶腊梅叶乙醇提取物具有良好的体外抗氧化活性,并且主要活性物质为槲皮素和山奈酚.     

D101大孔树脂纯化犁头草黄酮的研究

研究D101大孔吸附树脂吸附纯化犁头草黄酮的工艺条件。以总黄酮含量为指标,以UV为检测手段,用不同浓度的乙醇进行洗脱,首次考察D101大孔吸附树脂对犁头草黄酮的吸附和洗脱条件。D101大孔吸附树脂纯化犁头草黄酮的动态吸附容量为709μg/ml,使用3倍体积蒸馏水洗去杂质,使用浓度为50%乙醇,用量为5倍树脂体积时可以完全洗脱提取物中的总黄酮,洗脱物总黄酮含量可达58.3%,提取率为2.1%。D101大孔吸附树脂能有效纯化犁头草黄酮,该工艺简单,成本低,产物纯度高,产率高,可用于犁头草中有效成分的富集分离和大工业生产。