铁皮石斛组织培养及快繁技术研究

为建立铁皮石斛快繁技术体系,给生产提供参考,研究了铁皮石斛组织培养过程中的灭菌方法、腋芽诱导、原球茎的诱导、增殖与分化的最佳培养基配方。以铁皮石斛成熟茎段为外植体,探讨1/2MS培养基或MS培养基中添加不同浓度的激素对铁皮石斛组织培养过程中各生长、分化阶段的影响。研究表明,腋芽诱导最适宜培养基的配方为MS+ 6-BA 2.0 mg/L+ NAA 0.5 mg/L,诱导率达91.28%,平均芽数达2.34;原球茎诱导的最适宜培养基为1/2MS+ 6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L,诱导率可达66.67%;原球茎增殖最佳培养基为1/2MS+ 6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L,原球茎分化最适宜培养基为1/2MS+ NAA 1.0 mg/L+ 6-BA 3.0 mg/L+ KT 1.0 mg/L,最适宜生根的培养基配方为1/2MS+NAA 2.0 mg/L+ AC 0.5 g/L。     

不同培养基成分对铁皮石斛组织培养的影响

以铁皮石斛无菌苗的茎段作为外植体,讨论MS培养基中添加不同浓度的激素对铁皮石斛的诱导、增殖、分化以及生根的影响。结果表明：最适合铁皮石斛原球茎诱导的培养基为MS+ 6-BA 0.5 mg/L+ NAA 1.5 mg/L,原球茎诱导率为95%;最适合原球茎增殖的培养基为MS+ 6-BA 1 mg/L+ NAA 1 mg/L;最适合原球茎分化的培养基为MS+ 6-BA 5 mg/L+ NAA 1 mg/L,其分化率达80%;最适合铁皮石斛根诱导的培养基为MS+IBA 1.5 mg/L+香蕉泥100 g/L,其生根率为100%。     

秋石斛原球茎途径再生体系的建立

为建立秋石斛原球茎途径的再生体系,本研究以秋石斛‘088’新生侧芽为外植体,探索不同BA和NAA浓度对原球茎诱导、原球茎增殖分化以及生根壮苗的影响。结果表明:秋石斛原球茎诱导的适宜培养基为1/2MS+2.0 mg/L BA+1.0 mg/L NAA,存活外植体的诱导率达到90%以上;原球茎增殖分化的适宜培养基为MS+3.0 mg/L BA+1.0 mg/L NAA,增殖系数达到13.15;生根壮苗的适宜培养基为1/2MS+0.5 mg/L NAA,生根率高,根系发达,植株健壮。本研究建立了秋石斛原球茎途径的再生体系,为种苗繁育和遗传转化提供了技术支持。     

玫瑰石斛原球茎的诱导与增殖研究

以玫瑰石斛植株茎段为材料,研究了不同的植物生长调节剂及配比、附加物等因子对玫瑰石斛原球茎的诱导和增殖的影响,以期通过组织培养诱导玫瑰石斛茎段获得原球茎,并对原球茎进行增殖,为进一步诱导玫瑰石斛丛生芽和培养玫瑰石斛小苗提供大量的原材料.结果表明:促进玫瑰石斛原球茎诱导的不同植物生长调节剂配比最优水平的组合为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L,该组合最有利于玫瑰石斛原球茎的诱导;促进玫瑰石斛原球茎增殖的植物生长调节剂配比最佳组合为6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5mg/L,该组合最有利于玫瑰石斛原球茎的增殖;添加椰汁和马铃薯有利于玫瑰石斛原球茎的增殖.     

泽林考兰薄层细胞的再生体系

为建立泽林考兰薄层细胞的再生体系,以其试管苗茎尖薄层细胞为外植体,研究了不同激素浓度配比对其类原球茎诱导、增殖、分化及生根的影响。结果表明,茎尖薄层细胞在1/2MS+6-BA 2.0 mg/L+TDZ2.0 mg/L+NAA 0.1mg/L培养基上的类原球茎的诱导率最高,达53.3%;类原球茎在1/2MS+6-BA 2.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L培养基上培养40 d后,增殖系数为9.6,类原球茎在1/2MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.15 mg/L培养基上培养40 d后分化出小苗,分化率为89.7%;小苗在1/2MS+NAA 0.2 mg/L+AC 0.5 g/L培养基上生根培养40 d后,生根率达94.2%;小苗驯化移栽成活率达90%以上,长势良好。本研究通过以泽林考兰试管苗茎尖薄层细胞为外植体诱导出类原球茎,建立了泽林考兰薄层细胞再生体系,为泽林考兰试管苗产业化生产提供了新的途径。     

铁皮石斛快繁优化及不同时期生物碱积累的研究

本研究以铁皮石斛无菌苗茎段为实验材料优化茎段培养的最适培养基,并对其愈伤组织形成后的10 d、15 d、20 d、25 d、30 d、35 d、40 d等不同时期的生物碱的含量进行测定。结果表明,以MS为基本培养基,原球茎诱导的最佳激素组合为NAA 1.5 mg/L+6-BA 0.5 mg/L,平均诱导率为95%;原球茎增殖的最佳激素组合为6-BA 1 mg/L+NAA 1 mg/L,原球茎分化的最佳激素组合为6-BA 5 mg/L+NAA 1 mg/L,平均分化率可达80%;生根壮苗的最佳组合为:IBA 1.5 mg/L+香蕉泥100 g/L+活性炭0.1%,其生根率为100%;愈伤组织形成后30 d左右时其总生物碱含量最高。     

大花蕙兰摇瓶液体培养体系的建立

研究了液体培养基和外植体培养基对大花蕙兰原球茎增殖及丛生芽诱导的影响.结果表明:含6-BA2 mg/L、NAA0.1mg/L和椰子汁30 mg/L的1/2 MS液体培养基适合原球茎增殖,含6-BA 1 mg/L和NAA0.1 mg/L的1/2 MS液体培养基适合丛生芽增殖,含6-BA1 mg/L、NAA0.2mg/L和椰子汁30mg/L的1/2 MS液体培养基既可诱导原球茎的增殖,又可诱导丛生芽;此外,当外植体为原球茎时,有利于原球茎的增殖;当外植体为幼芽时,有利于丛生芽的增殖.     

铁皮石斛与钩状石斛杂交及种子无菌播种快繁研究

以铁皮石斛和钩状石斛为研究对象,通过人工辅助杂交获得杂交种子,诱导种子离体萌发,开展无菌播种技术研究.结果表明,铁皮石斛与钩状石斛杂交容易成功,杂交坐果率可达到80％;适宜的种子萌发培养基为MS+ 6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L,培养30 d时的萌发率为89.7％;培养基MS+6-BA 1.5 mg/L+ NAA0.1 mg/L+香蕉100 g/L+ AC 1.0 mg/L对原球茎的增殖最好;培养基MS+ 6-BA 1.5 mg/L+ NAA 0.1mg/L+马铃薯200 g/L+ AC 1.0 g/L对原球茎的分化最好;壮苗生根培养基配方为1/2 MS+ NAA 0.6 mg/L+香蕉100 g/L+AC 1.0 g/L,植株生长健壮,生根率100％,移栽成活率达95％以上.     

红椿快繁技术研究

以红椿优良母株种子为外植体进行组织培养,对红椿组织快繁技术进行研究。结果表明,适宜的诱导培养基为MS+1mg/L 6-BA+0.15mg/L NAA,诱导率为85.56%;最佳的增殖培养基为改良1/2MS+0.5mg/L 6-BA+0.15mg/L NAA+1.0mg/L KT,增殖系数为5.7;最佳的生根培养基为1/2MS+1.0mg/L NAA,生根率为98.5%。     

四季凤仙的组织培养及快繁体系的建立

以四季凤仙的幼嫩茎段为外植体,MS为基本培养基,对四季凤仙的组织培养及快繁技术进行了研究。结果表明:最佳的外植体除菌方式为5%的NaClO处理5min;四季凤仙的最佳不定芽诱导培养基为:MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.10mg/L+GA30.01mg/L;芽的最佳增殖培养基为:MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.5mg/L;最佳生根培养为:1/2MS+IAA1.0mg/L。     

小对叶植株再生及遗传转化体系构建

为了利用生物技术方法开发及改良水生植物小对叶,以小对叶（Bacopa monnieri）叶片为外植体,建立其组织培养再生体系及根癌农杆菌介导的遗传转化体系。结果表明：小对叶叶盘最佳愈伤组织诱导培养基是MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.02 mg/L;最佳分化培养基是MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L;最佳生根培养基是1/2MS+IBA 0.1 mg/L。最佳的根癌农杆菌介导的小对叶遗传转化条件是：外植体预培养2天,侵染菌液OD600为0.5,侵染时间7 min、共培养4天和延迟筛选4天,可获得最高转化率21.4%。     

麻栎的组织培养与快速繁殖

以麻栎幼苗茎段为外植体,以MS为基本培养基,研究了不同种类和不同浓度生长调节物质对麻栎组织培养的影响。结果表明,芽诱导最佳培养基为MS+6-BA1.0 mg?L-1,培育21天左右,腋芽可长至1～2 cm,展叶3～4片,发芽率达83.3%;芽增殖最佳培养基为MS+6-BA1.0 mg?L-1+NAA0.02 mg?L-1,增殖系数为4.6;最佳生根培养基为1/2MS+NAA0.5 mg?L-1,培养4周后生根率可达87%。     

非洲紫罗兰叶片外植体再生技术体系的建立

以三种叶型的非洲紫罗兰（Saintpaulia ionantha）叶片作为外植体材料,研究了叶片外植体再生技术体系。结果表明：非洲紫罗兰叶片愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L和MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5mg/L,培养4周左右,诱导率达100%,绝大多数愈伤组织上都有芽的分化。采用培养基MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L继代一次后,每个愈伤组织上分化产生的芽可达30余个,3个品种的愈伤组织诱导、成芽能力差异不大。非洲紫罗兰品种A和C适宜的生根培养基为1/2MS+0.2mg?L－1NAA,品种B适宜的生根培养基为1/2MS+0.5mg?L－1IBA。生根苗转入纯蛭石栽培时,用1/4MS大量与微量元素进行叶片追肥,成活率90%以上。移栽至腐殖土栽培成活率95%以上,3个月栽培后栽培苗成花。本研究为非洲紫罗兰试管苗的工厂化生产提供了科学依据。     

卷丹百合脱毒快繁技术研究

对卷丹百合脱毒苗组培快繁技术体系进行研究。以带LSV病毒的卷丹百合珠芽为材料,通过36℃高温预处理10天,剥取0.2mm大小的茎尖在MS＋2.5mg/L6-BA＋1.5mg/LGA＋0.5mg/LNAA＋0.1g/L活性炭＋0.6%琼脂＋3%白糖的培养基中进行芽诱导培养,经过一次继代培养后,用RT-PCR检测LSV病毒,脱毒率达100%。将脱毒百合苗在MS＋2.0mg/L6-BA＋2.0mg/L2,4-D＋0.1mg/LNAA培养基中诱导愈伤组织及丛生芽,诱导率达100%;在1/2MS＋2.5mg/L6-BA＋0.2mg/LNAA培养基中进行分化、增殖培养,增殖倍数达到4.31;采用MS＋1.2mg/LNAA＋0.5g/L活性炭培养基进行生根培养,产生的根系多而粗壮,移栽时最易成活。     

肇东苜蓿和Pleven6苜蓿离体再生体系的建立

以肇东紫花苜蓿和Pleven6紫花苜蓿的子叶、下胚轴为外植体,建立离体再生体系。结果如下：最佳愈伤诱导培养基：肇东苜蓿为MS+2.0mg/L2,4-D+0.5mg/ＬKT+3%蔗糖,Pleven6为MS+1.5mg/L2,4-D+0.5mg/LKT+3%蔗糖;分化培养基：MS+2.0mg/L6-BA+0.5mg/L NAA+3%蔗糖;分化继代培养基：MS+0.3mg/L6-BA+0.1mg/LNAA+0.3mg/LKT+3%蔗糖;生根培养基：1/2MS+0.5mg/LNAA+1.5%蔗糖。两个品种的子叶均较下胚轴分化时间短、分化效率高,肇东苜蓿诱导率和分化率明显高于pleven6苜蓿。     

非洲菊组织培养基筛选研究

采用不同的培养基配方对非洲菊花托进行组织培养试验,综合分析不同的培养基配方在非洲菊组培过程中对花托培养、继代增殖和壮苗生根的影响。结果表明在试验配方中非洲菊花托培养的最适组织培养基为MS+6BA10mg/L+NAA1.0mg/L+糖30g/L+琼脂5%;继代增殖培养的最适组织培养基为MS+6BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+糖30g/L+琼脂7%;无根苗壮苗生根的最适组织培养基均为1/2MS+NAA0.5mg/L+糖20g/L+琼脂7%。     

千层金组培快繁技术研究

以千层金茎段为外植体进行离体培养,通过试验筛选出各阶段适宜的培养基,建立了千层金组培快繁体系。结果表明：在诱导不定芽的培养基中,MS+6-BA 1 mg/L的芽萌发率最高,芽体健壮;丛生芽继代增殖培养基为改良MS+6-BA 1 mg/L+NAA 0.1 mg/L+KT 0.1 mg/L;生根培养基为1/2MS+1号生根剂0.5 mg/L+IBA 0.1 mg/L,生根率达100%,且根系发达;栽培基质以椰糠+腐殖土=2:1较理想,移栽成活率为89.3%。     

蕙兰杂交种子的无菌萌发和快速繁殖研究

本实验采用蕙兰传统品种‘崔梅’与普通蕙兰进行杂交,对不同发育阶段的种子进行无菌萌发实验,并作不同培养基的对照。对萌发原球茎的增殖及分化进行研究。探讨不同培养基、6-BA和NAA对根状茎增殖和分化的影响。结果表明: 110天的种子接种在KC培养基上萌发效果最佳,蕙兰原球茎增殖的最佳培养基为W+NAA0.5mg/L+6-BA1.0mg/L,根状茎分化和生根的最佳培养基为MS+NAA 1.0 mg/L +6-BA 0.5 mg/L。