玉蝉花愈伤组织的诱导及植株再生研究

以玉蝉花的茎尖和嫩叶为外植体进行愈伤组织诱导和再分化研究,成功建立了通过茎尖愈伤诱导途径的植株再生体系。研究得出:玉蝉花茎尖诱导愈伤的最佳培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L+2,4-D 1.0mg/L,最高诱导率为51.51%;不定芽诱导的培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L+KT 1.0mg/L,分化率达到72.31%,平均分化不定芽数为5.81;不定芽生根最佳培养基为MS+NAA 1.5mg/L,生根率为100%。     

野生软枣猕猴桃组织培养及褐变处理

以野生软枣猕猴桃嫩芽、幼嫩叶片以及茎段作为外植体,研究野生软枣猕猴桃组织培养整个过程,以建立快速高效的野生软枣猕猴桃再生体系。结果表明：最适宜的诱导叶片、茎段愈伤组织的培养基分别为MS+0.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA和MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA;诱导出愈伤组织在MS+0.6 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA培养基上能很好地分化不定芽苗;诱导幼芽产生丛生芽的培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA;较适宜的生根培养基为1/2MS。愈伤组织继代中发现细胞生长素NAA可以防止愈伤褐化。在愈伤组织分化中,发现将分化出的芽苗再次愈伤化,可以提高分化率。     

香茶藨子茎尖愈伤组织诱导及植株再生

试验以香茶藨子茎尖为外植体,建立了愈伤组织诱导及植株再生体系。结果表明,诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+NAA 0.5 mg/L+2,4-D 0.8 mg/L+6-BA 1.0 mg/L,诱导率为87.0%,愈伤呈紧密块状,生长良好;愈伤组织分化最佳培养基为MS+KT 1.5 mg/L+IBA 0.3 mg/L,愈伤分化率为55.53%;以1/2MS基本培养基添加IBA 0.5 mg/L,最利于生根培养。该体系的建立为香茶藨子规模化生产及遗传转化提供了技术平台。     

天蓝苜蓿花药愈伤组织诱导及再生体系的建立

为获得天蓝苜蓿单倍体再生植株,本研究以野生天蓝苜蓿花药为外植体,采用正交设计L₁₆(4⁴)筛选适宜天蓝苜蓿愈伤组织诱导培养基,比较不同基本培养基及生长调节剂组合筛选适宜的分化培养基,并用1/3MS、1/2MS和MS添加不同浓度的NAA研究不定生根。结果表明:天蓝苜蓿现蕾15~25 d的花药其愈伤组织诱导效果最好,高达60.5%。4℃低温预处理2~4 d有利于愈伤组织诱导,诱导率达77.2%。适宜花药愈伤组织诱导的培养基为NB+2,4-D 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+TDZ 1.0 mg/L,诱导率达78.5%。比较不同基本培养及生长调节剂的不同组合发现,NB培养基愈伤组织分化效果优于B₅和MS,NB+NAA0.5 mg/L+6-BA 2.0 mg/L适宜愈伤组织的分化,分化率为66.3%。不定芽在1/3MS+NAA 0.5 mg/L中培养,生根率最高,为86.55%。本研究建立了天蓝苜蓿花药培养再生体系,获得了单倍体植株,为天蓝苜蓿的育种实践及基因组学研究提供基础材料。     

木蓝愈伤组织诱导与不定芽分化培养

初步建立了木蓝(Indigofera bungeana Walp.)的离体再生培养体系，为其基因工程育种研究提供前期技术参考。通过种子无菌播种技术获得野生木蓝无菌实生苗，以胚轴、茎段和叶片为外植体，筛选木蓝愈伤组织诱导、不定芽分化、增殖、壮苗培养的最适培养基配方。结果显示，木蓝种子无菌播种发芽率达98%，最适培养基为1/2MS。3种外植体在不同培养基下均能诱导出愈伤组织，根据愈伤组织生长及质地色泽筛选出最适诱导培养基，其中，叶片为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L NAA；茎段为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L NAA；胚轴为MS+0.1 mg/L 6-BA+0.1 mg/L2,4-D+0.5 mg/L NAA。相比较叶片和茎段，胚轴来源的愈伤组织适于不定芽分化，最适分化培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L NAA和MS+2.0 mg/L 6-BA。不定芽增殖培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA，壮苗和生根的最适...     

影响细毛山药离体快繁和再生因素的研究

利用植物组织培养技术建立细毛山药茎尖培养和离体再生体系,探索影响山药组培的因素.结果表明:6-BA 2.0mg/L+ NAA 0.5 mg/L能很好的诱导出愈伤组织;将诱导出的愈伤组织接种在KT 2.5 mg/L+ NAA 0.02 mg/L和KT2.0mg/L NAA 0.03 mg/L上都可分化出4～5个芽,且接种在KT 2.0 mg/L+ NAA 0.03 mg/L上分化出的芽可直接长成健壮的植株.KT 1.5 mg/L+ NAA 0.02 mg/L培养基对腋芽有较好的增殖效果,增值系数可达到3.8.将芽接种到KT2.0mg/L+ IAA 0.2 mg/L培养基上可健壮成长,也可作为继代培养基.     

藜麦组织培养快速繁殖体系建立研究

为了探讨不同培养基、不同激素组合对藜麦茎段愈伤组织的诱导及分化形成再生植株的影响,以台湾红藜(Chenopodium quinoa Wild.)的茎段为外植体进行诱导、分化增殖、生根、炼苗移栽等研究,建立了藜麦植株再生体系。结果表明:MS+6-BA 1.5mg/L+NAA 0.2mg/L为愈伤组织诱导的最佳培养基,诱导率为84.33%,MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA0.6mg/L+2-IP 2mg/L培养基中,愈伤组织分化率最高。     

色素万寿菊杂交母本未授粉子房培养

以色素万寿菊雄性不育株未授粉子房为外植体,比较研究子房发育期、高低温处理和生长调节剂组合对愈伤组织诱导和分化的影响。结果显示:发育6~10 d,花丝刚好露出花萼,顶部呈圆柱状的花蕾愈伤组织诱导效果最好,为79.2%;低温预处理3 d,高温培养5 d有利于愈伤组织诱导;MS+2,4-D 0.5 mg/L+NAA0.5 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+KT 0.5 mg/L为愈伤组织诱导最佳培养基,诱导率高达85.8%;NAA 1.0 mg/L+6-BA3.0 mg/L为不定芽分化适宜培养基,分化率达77.6%;1/2MS+NAA 0.2 mg/L为生根适宜培养基,生根率93.5%。本研究可为建立高效单倍体培养体系以及单倍体育种技术提供基础性资料。     

马铃薯晋薯16号愈伤组织再生体系的建立

为建立马铃薯品种晋薯16号组织再生体系,以晋薯16号无菌苗为材料,对外植体类型、外植体表面消毒试剂浓度和根的诱导条件进行筛选,同时优化了愈伤组织诱导和分化的最佳植物激素组合及浓度。结果表明:愈伤组织诱导的最佳外植体为茎段;2%的次氯酸钠消毒效果较好;根的诱导使用含50g/L蔗糖的MS培养基较好;愈伤组织诱导培养基以MS+6-BA 1.5mg/L+NAA 0.5mg/L为佳;愈伤组织分化培养基以MS+6-BA 1.5mg/L+GA3 2.0mg/L+ZT 1.0mg/L为佳。     

韭葱愈伤组织和不定芽诱导研究

以韭葱假茎和葱薹为外植体,进行离体培养。结果表明,在MS附加不同浓度的NAA和6-BA培养基上,韭葱假茎和葱薹均能诱导形成愈伤组织,但二者出愈率差异极显著。在MS+NAA1.0mg/L+6-BA2.0mg/L培养基上,韭葱假茎愈伤组织出愈率仅为27.09%,在MS+NAA2.0mg/L+6-BA1.0mg/L培养基上,韭葱葱薹愈伤组织出愈率高达77.09%。愈伤组织继代培养后,葱薹形成的愈伤组织不能分化形成芽,而假茎形成的愈伤组织可以诱导产生不定芽,在MS+NAA1.0mg/L+6-BA2.0mg/L培养基上,假茎芽的诱导率为20.83%,且假茎靠近茎基部处诱导产生的愈伤组织分化芽的能力最强。     

降香黄檀愈伤组织培养与植株再生研究

为了实现降香黄檀工厂化快速繁殖和扩大栽培,并为降香黄檀抗寒基因导入打下一定的基础,以降香黄檀无菌实生苗茎段、叶片、根尖为外植体,MS为基本培养基,对各器官愈伤组织诱导与分化的最适培养基成分进行了研究。结果表明,可从降香黄檀无菌实生苗茎段、叶片、根尖成功地进行愈伤组织培养和植株再生。茎段、叶片、根尖诱导愈伤组织的最适培养基分别为1/2MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.10 mg/L、1/2MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.10 mg/L和1/4MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L;茎段、叶片、根尖的愈伤组织诱导丛生芽最适培养基分别为1/2MS+6-BA 1.5 mg/L+2,4-D 4.0 mg/L、1/2MS+6-BA 1.5 mg/L+2,4-D 3.5 mg/L和1/2MS+6-BA 1.5 mg/L+2,4-D 3.5 mg/L;茎段、叶片、根尖来源的单芽,其最佳生根培养基分别为MS+NAA 1.5 mg/L、MS+NAA 1.0 mg/L和MS+NAA 2.0 mg/L。比较茎段、叶片与根尖的愈伤组织诱导率、丛生芽诱导率和单芽生根率,得出以无菌实生苗根尖作为外植体是降香黄檀愈伤组织培养和植株再生的最佳选择。     

非洲紫罗兰叶片外植体再生技术体系的建立

以三种叶型的非洲紫罗兰（Saintpaulia ionantha）叶片作为外植体材料,研究了叶片外植体再生技术体系。结果表明：非洲紫罗兰叶片愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L和MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5mg/L,培养4周左右,诱导率达100%,绝大多数愈伤组织上都有芽的分化。采用培养基MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L继代一次后,每个愈伤组织上分化产生的芽可达30余个,3个品种的愈伤组织诱导、成芽能力差异不大。非洲紫罗兰品种A和C适宜的生根培养基为1/2MS+0.2mg?L－1NAA,品种B适宜的生根培养基为1/2MS+0.5mg?L－1IBA。生根苗转入纯蛭石栽培时,用1/4MS大量与微量元素进行叶片追肥,成活率90%以上。移栽至腐殖土栽培成活率95%以上,3个月栽培后栽培苗成花。本研究为非洲紫罗兰试管苗的工厂化生产提供了科学依据。     

中国水仙花药培养及植株再生体系建立

本研究以中国水仙花药为外植体,通过器官发生途径建立其植株再生体系,并通过染色体计数鉴定筛选变异个体。结果显示:在4℃下预处理3d有利于花药愈伤组织的形成;愈伤组织诱导培养基最适配比为:MS+2,4-D1.0mg/L+BA0.5mg/L+CH500mg/L+AC500mg/L;愈伤组织分化小鳞茎的最适培养基为:MS+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+CH500mg/L+AC1000mg/L。通过染色体计数对38个再生植株进行倍性鉴定,结果显示其中30个为三倍体(2n=30),8个为非整倍体(2n=10,11,12,14,17,26)。以这些再生苗为外植体,经器官发生途径,建立了不同倍性的再生体系。     

迷迭香叶片愈伤组织诱导及再分化培养

本研究以迷迭香叶片为外植体,探索愈伤组织形成及再分化条件。结果表明:蔗糖含量较高的培养基可促进愈伤组织形成,其中以MS+蔗糖50g/L+6-BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L效果最好,诱导率可达88%;愈伤组织再分化形成不定芽时,以MS+6-BA1.5mg/L+KT0.5mg/L+NAA0.5mg/L效果较好,再分化率达50%;MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.5mg/L诱导不定芽增殖,增殖率可达到300%多;不定芽生根时,MS+NAA0.1mg/L效果较好,生根率可达65%。同时,研究发现,尽管外植体被消毒至无菌,但75%乙醇复合其它灭菌剂共同灭菌时,会导致外植体大量死亡。     

钩藤愈伤组织的诱导与植株再生

为了建立钩藤愈伤组织诱导与植株再生体系。以药用植物钩藤[Uncaria rhynchophyllai (Mip.)Jack]嫩茎、嫩枝、嫩叶为外植体,通过优化激素组合,进行愈伤组织诱导和分化、幼苗生根和移栽,初步建立了钩藤愈伤组织诱导和植株再生体系。结果表明,以钩藤嫩枝作为外植体出愈情况较好,污染率低,继代后愈伤组织生长快。培养基成分为WPM+2.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA较适宜愈伤组织的诱导和增殖,诱导率可达83.3%。培养基成分为WPM+2.0 mg/L KT+0.2 mg/L NAA能分化出芽,愈伤组织率分化率达到82.3%;而1/2WPM+1.0 mg/L IBA适宜于试管苗生根,生根率达92.0%。以钩藤嫩枝为外植体诱导获得了质量良好的愈伤组织,并成功再生成植株,结果的获得可为解决钩藤人工栽培过程的资源和品质问题以及进行细胞培养和分子遗传改良奠定基础。     

马蹄金(Dichondra repens Forst.)组织培养和快速繁殖

为了探究马蹄金组织培养及快繁技术,本研究以马蹄金为材料,使用75%的酒精和10%NaClO对不同外植体(胚根,下胚轴,子叶)进行消毒处理,在不同激素浓度配比的MS培养基中进行丛生芽诱导、愈伤组织诱导及分化,成功建立了马蹄金的组培快繁体系。结果表明:利用马蹄金下胚轴为外植体直接诱导不定芽效果较好,其最适程序为:流水冲洗30 min+75%酒精30 s+10%NaClO 9 min,污染率为5%,成活率为75%;下胚轴不定芽诱导的最适培养基为MS+1 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA,诱导率为93.55%,出芽指数为8.86;胚根愈伤组织诱导的最适培养基为MS+1 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,诱导率为100%,下胚轴愈伤组织诱导的最适培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+1 mg/L NAA,诱导率为95.24%,子叶愈伤组织诱导的最适培养基为MS+0.3 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,诱导率为100%;愈伤组织不定芽分化的最适培养基为1/2MS+1.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,芽诱导率为20%,平均芽数为12.83;组培苗诱导生根的最适培养基为不加激素的1/2MS培养基;生根苗以瓶盖全开的炼苗方式移栽到以河沙为基质的育苗盒中成活率为100%,且添加蒸馏水与自来水对植株生长并无明显影响。本研究成功建立了马蹄金组织培养与快繁体系,为马蹄金种质资源改良及优质种苗生产提供了技术参考。     

小对叶植株再生及遗传转化体系构建

为了利用生物技术方法开发及改良水生植物小对叶,以小对叶（Bacopa monnieri）叶片为外植体,建立其组织培养再生体系及根癌农杆菌介导的遗传转化体系。结果表明：小对叶叶盘最佳愈伤组织诱导培养基是MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.02 mg/L;最佳分化培养基是MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L;最佳生根培养基是1/2MS+IBA 0.1 mg/L。最佳的根癌农杆菌介导的小对叶遗传转化条件是：外植体预培养2天,侵染菌液OD600为0.5,侵染时间7 min、共培养4天和延迟筛选4天,可获得最高转化率21.4%。