导入Chi-linker-Glu和Bar基因获得抗真菌和抗除草剂的转基因烟草

构建重组表达载体pBIb-CG(含有Chi-linker-Glu融合基因和Bar基因),利用农杆菌介导法将其携带的Chi-linke1r-Glu融合基因和Bar基因转化烟草(Nicotiana tobaccum L.)品种红花大金子.经根癌农杆菌侵染和共培养后,用100mg/L Kar+500mg/L Cef筛选抗性芽,获得30株抗性植株,抗性植株再生率为37％;分别对抗性再生植株中Chi-linker-Glu融合基因和Bar基因的特异性引物进行PCR检测,结果27株为阳性,占90％.PCR、Southern杂交结果证明,外源基因已整合到烟草基因组中.离体抑菌试验和除草剂抗性试验表明,转基因烟草植株对木霉菌(Tricho derma viride)、镰刀菌(Fusarium solanif sppisii)和除草剂都表现出一定的抗性.     

雄性不育基因对棉花的遗传转化

利用TA29、A6、A9三启动子功能区与barnase基因融合构建的不育基因以农杆菌介导法对棉花下胚轴进行了遗传转化,通过胚状体途径获得了转基因再生植株.利用150 mg·L-1高浓度卡那霉素(Km)对转化初期筛选出的再生苗进行再次筛选,提高了转化株的选出率.通过PCR检测和Southern dot blot分析从转基因胚状体再生植株中获得了带有barnase不育基因的120株转基因植株.进行转基因植株生物学性状检测和观察表明,所获得的转基因植株对溴苯腈表现出了明显的抗性,并从不育基因转化植株中筛选出了具有明显不育特征的雄性不育株.     

转根癌农杆菌介导的AtNHX1基因马铃薯的获得

构建重组表达质粒pBI12135-GZ+AtNHX1（带有CaMV 35S启动子）,通过农杆菌将其携带的液泡膜Na⁺/H⁺逆向转运蛋白基因（AtNHX）转化马铃薯栽培品种“甘农薯2号”试管薯薄片和“克新2号”茎段。经根癌农杆菌侵染和共培养后,用50 mg L^-1卡那霉素 +300 mg L^-1头孢霉素筛选抗性芽,试管薯薄片获得30株抗性植株,抗性植株再生率为37%;茎段未获得抗性植株。抗性植株的总DNA用AtNHX1基因的特异性引物进行PCR检测,结果27株为阳性,占90%。Southern杂交结果证实,外源基因多以双拷贝整合到马铃薯的基因组中。Northern杂交结果表明,转基因植株可以进行AtNHX1基因mRNA的正常转录,但植株间存在着转录量的差异。该研究为耐盐马铃薯的培育奠定了良好的基础。     

农杆菌介导获得高亲和NH_4~+转运因子转基因甜菜

本研究利用农杆菌介导的方法将高亲和NH4+转运因子融合基因转入甜菜子叶节外植体。遗传转化过程主要包括子叶节预培养、侵染转化、共培养、洗菌、抑菌培养、潮霉素筛选分化培养、抗性苗生根移栽。实验获得抗性苗140株,抗性芽分化率为8.14%,随机抽取24株抗性苗进行PCR检测,获得转基因植株10株。     

转Bt-CpTI-GNA基因棉花的研究

采用农杆菌介导法将外源三价抗虫基因(Bt-CpTI-GNA)导入常规棉花品种中,获得转基因再生株,分子检测表明外源基因已在棉花体内表达,并遗传给后代材料。PCR分子检测与转化的标记基因和外源目的基因抗性三者极有规律性。其所携带的基因在转基因棉花中有分离现象,这可能是外源基因整合到受体棉株体内“基因沉默”而引起所致。     

应用Gene-deletor系统创制安全复合抗逆转ZmSDD1、BT和BAR基因玉米新种质研究

本研究通过农杆菌介导玉米茎尖遗传转化法将含有花粉特异启动子Zm13驱动的Gene-deletor外源基因清除系统、表达元件Ubi-Zm SDD1-3'UTR、Actin-Bt-NOS和Ubi-Bar::GUS-3'UTR的植物表达载体遗传转化玉米交51,经过除草剂初步筛选、GUS组织化学染色和PCR分子鉴定,获得31株转基因植株。研究表明转基因植株比野生型植株具有更强抗旱性、抗玉米螟能力和抗除草剂草丁膦的能力。抗旱性鉴定表明干旱处理后转基因植株的存活率比野生型高70%,同时,转基因植株的叶片保水性显著高于野生型植株。抗虫性试验表明转基因植株的叶片蛀孔少而小,对玉米螟具有明显抗性,还抑制了玉米螟的取食和发育。叶片离体和田间抗除草剂试验表明转基因植株比野生型能够抵抗更高的除草剂浓度,最高可抵抗150 mg/L草丁膦浓度。同时,在统计的20株转基因玉米植株的基因删除效率时发现部分植株可完全清除玉米中的外源基因,对于未完全清除的玉米植株还需要进一步研究。本研究创制了一种抗虫、抗除草剂、抗旱的复合性状转基因玉米新种质,可为培育多性状叠加的转基因玉米新品种奠定基础,同时结合"Gene-deletor"技术,为实现转基因生物安全提供技术支撑。     

转根癌农杆菌介导的AtNHX1基因马铃薯的获得

构建重组表达质粒pBI12135-GZ+AtNHX1（带有CaMV 35S启动子），通过农杆菌将其携带的液泡膜Na⁺/H⁺逆向转运蛋白基因（AtNHX）转化马铃薯栽培品种“甘农薯2号”试管薯薄片和“克新2号”茎段。经根癌农杆菌侵染和共培养后，用50 mg L^-1卡那霉素 +300 mg L^-1头孢霉素筛选抗性芽，试管薯薄片获得30株抗性植株，抗性植株再生率为37%；茎段未获得抗性植株。抗性植株的总DNA用AtNHX1基因的特异性引物进行PCR检测，结果27株为阳性，占90%。Southern杂交结果证实，外源基因多以双拷贝整合到马铃薯的基因组中。Northern杂交结果表明，转基因植株可以进行AtNHX1基因mRNA的正常转录，但植株间存在着转录量的差异。该研究为耐盐马铃薯的培育奠定了良好的基础。     

农杆菌介导大豆不同外植体遗传转化研究

以MYB转录因子GmPHR1为目的基因,冀豆12、冀豆16和绥农14为转化受体,比较农杆菌介导大豆不同外植体的遗传转化技术,为大豆转基因育种提供技术支撑。结果表明,以茎尖转化系统的不定芽诱导率、植株再生率和转化效率最高,且对基因型的依赖性最小,但由于对抗生素的敏感性较差,因而存在一定程度的假阳性;其次,以胚尖转化系统的不定芽诱导率、植株再生率和转化效率较高,对基因型的依赖性较小,同时对抗生素的敏感性较强,因而是一种较为理想的转化系统。而子叶节、下胚轴转化系统则表现出不定芽诱导率、植株再生率和转化效率均较低,且存在较强的基因型依赖性等不足。同时,利用上述4种转化系统,获得了3个供试大豆品种的转基因T1植株。     

玉米光敏色素A1基因(ZmPHYA1)在棉花中的转化及分子鉴定

为评价玉米ZmPHYA1基因在棉花种质资源改良中的价值,本研究利用农杆菌介导法在陆地棉(Gossypium hirsutum)R15材料中进行了玉米ZmPHYA1基因的遗传转化。经过愈伤组织诱导、抗性愈伤筛选、体细胞分化诱导后获得棉花转基因再生植株。通过田间草铵膦除草剂筛选鉴定抗性植株,并利用PCR扩增其草铵膦抗性基因和目的基因ZmPHYA1进行分子鉴定,发现阳性植株对草铵膦除草剂具较好抗性,并可扩增到256 bp的草铵膦抗性基因和217 bp ZmPHYA1基因的特异条带。进一步通过免疫印迹检测表明,3个不同转基因株系中外源ZmPHYA1基因可正常表达约170 kD大小的蛋白,且在不同组织中该外源蛋白均可正常表达。此外,对转基因植株的不同农艺性状分析表明,转基因株系株高明显低于受体对照,而铃重和纤维长度等性状无明显差异。本研究成功获得具有草铵膦抗性和外源ZmPHYA1基因的棉花新种质材料,为进一步利用光敏色素基因创新种质资源提供了材料来源。     

ProDH基因反义表达载体的遗传转化

利用农杆菌介导的叶盘法将ProDH基因反义表达载体分别导入番茄品种‘耐运2000’和烟草中,建立并优化了番茄子叶再生体系。同时采用操作简单、再生周期短、转化效率较高的烟草进行了遗传转化体系的建立。试验获得49个烟草抗性芽和177个番茄抗性芽,用特异性引物对其做PCR扩增验证,共获得9个PCR呈阳性的抗性芽,其中7个烟草抗性芽、2个番茄抗性芽,因此证明外源基因已成功转入番茄的基因组中,为进一步番茄转基因工程的研究奠定基础。     

用根癌农杆菌介导法转化大豆萌动子叶节细胞

利用根癌农杆菌转化萌动大豆成熟子叶节获得了高频率的转基因大豆。从萌发12～16 h的大豆种子切取半片种子作为目标组织,对其子叶节组织进行伤处理后,接种于含有pGB载体的LBA4404农杆菌溶液。pGB载体含有除草剂（phosphinothricin, PPT）抗性基因bar和绿色荧光蛋白基因sgfp。将接种的外植体分别在含有3或5 mg/L PPT的芽诱导培养基、3 mg/L PPT的芽伸长培养基及2～4 mg/L PPT的根诱导培养基上进行了筛选。利用萌发5 d的外植体进行PPT浓度筛选的结果表明,芽诱导、芽伸长及根诱导阶段的PPT浓度分别为5、3及3 mg/L时,转化效率达到最大值,为5.3%。PCR和Southern杂交结果证实了外源基因稳定地整合在大豆基因组中。Northern杂交和GFP分析结果表明被整合的外源基因在大豆细胞中得到了稳定的表达。成熟植株对体外喷洒100 mg/L PPT溶液产生抗性。转化效率达8.9%。     

商陆抗病毒蛋白基因在麝香百合中的转化和表达

以麝香百合叶片愈伤组织为受体,利用根瘤农杆菌介导法将美洲商陆蛋白（PAP）基因和抗卡那霉素筛选基因以共转化的方式转入百合叶片愈伤组织中,然后在含有MS培养基中筛选愈伤组织并得到再生植株,在建立的农杆菌转化百合的遗传转化体系中,获得49株再生植株,经PCR检测表明PAP基因已经转移到有抗性愈伤组织再生出百合植株中。     

Analysis of genomic variability in transgenic sugarcane plants produced by Agrobacterium tumefaciens infection

Three transgenic sugarcane populations produced by Agrobacterium tumefaciens infection were analysed for the presence of genomic variability. Plants of the original cultivar, plants regenerated without transformation, as well as transformed and untransformed calli were used as control treatments. Amplified fragment length polymorphism (AFLP) of DNA extracted from leaves or calli assessed genomic profiling. The average DNA polymorphism within each population was determined by calculating the polymorphism index, while the extent of genomic dissimilarity among individual plants within transgenic populations was verified in unweighted pair group method using arithmetic averages dendrograms. The results showed that the production of transgenic sugarcane plants by A. tumefaciens infection is accompanied by limited but detectable genomic changes and that, on average, these occur at the same rate in plant populations carrying different transgenes. Main factors contributing to somaclonal variation in transgenic sugarcane plants have been verified by pre-existing DNA polymorphism into the donor genotype and in vitro culture steps during the transformation procedure. The relevant practical conclusion from this finding is that the AFLP analysis may be effectively used to identify individual transgenic plants with the least genomic deviation from the parental ones. The selected genotype would be conserved as cultivated sugarcane is asexually propagated.     

导入LPAAT和KCS基因对油菜种子芥酸含量的影响

采用农杆菌介导法,以下胚轴为转化受体,将溶血性磷脂酸酰基转移酶（LPAAT）和酮脂酰辅酶A合成酶（KCS）基因导入2种不同基因型（“Drakkar”和“Maplus”）的甘蓝型油菜,共获得247株再生植株,其再生频率分别为15.1%和2.0%。PCR检测和Southern杂交分析证实,外源基因已整合到油菜基因组中,转化频率分别为3.6%和0.7%。种子中芥酸含量因外源基因的导入使零芥酸油菜“Drakkar”提高到10.5%,高芥酸品种“Maplus”提高了5.0%,最高达62.8%。     

陕西农业科技成果转化应用的现状与思考

改革开放以来,陕西农业科技成果转化应用取得了长足发展,但也存在着农业科技成果转化率低、资金投入不足、体制落后、队伍不稳、农民文化素质较低等诸多问题。在综合分析发展机遇和面临矛盾的基础上,提出了建立科学合理的政策法律保障体系、坚实的农业科技创新基础、多元化的农业科技推广体系、高效灵活的运行机制、以国家投入为主的多渠道投融资体系和精干高效的农业科技推广队伍等对策和建议。     

以Bar为选择标记的遗传转化体系的建立

Bar基因是转基因商品化作物中应用最多的目标基因，也是水稻遗传转化中应用较多的选择标记基因，因此，建立以Bar基因为选择标记的通用和高效的遗传转化体系非常必要。本研究中，以籼型水稻明恢63为受体，Bar基因作选择标记，采用农杆菌介导的遗传转化法，将Bar基因转入其中，获得了一批转化子，初步建立了稳定、高效的水稻遗传转化体系。随后，以此体系为基础，将装有不同基因的两个载体pBar-1C^＊和pBar-1Ab进行了转化，分别从5400块和4800块愈伤组织中获得156个和115个抗性愈伤，其抗性愈伤率分别为2．8％和2．4％，分化率分别为80．7％和87．8％，由此说明，此转化体系相对稳定，且分化率高、抗性愈伤率也较高，可用于同类选择标记的遗传转化，加快水稻转基因育种步伐。     

Production of Transgenic Plants： More, Better, and Faster

Over the last two decades, transgenic plants have moved from being solely laboratory vehicles for basic research work to providing new varieties grown on large areas throughout the world. A number of plant     

Open Park Transformation and Upgrading Means of Comprehensive Park: A Case Study of Xuzhou Quanshan Forest Park

The transformation and upgrading of comprehensive park can not be only limited to the adjustment for structure, function and landscape facility of comprehensive park itself, which shall be carried out as a whole. Viewing from the macroscopic perspective of city, comprehensive park is an important constituent part of urban green space system, and its transformation is an integral part of overall perfection and development of urban green space system. Park is an organic integrity comprising many elements. The transformation of comprehensive park shall be carried out as a whole and handled by using the methods of "from top to bottom" and "from bottom to top", thus adjusting the relationship between park and city and within park on the whole. This research takes the open park transformation and upgrading of Xuzhou Quanshan Forest Park as an example to introduce the key points of open park transformation from such aspects as of entrance space, overall space structure, service function expansion and spatial form optimization in expectation of having a certain reference value.     

The Application of Relevant Homology in the Unified Representation of Electromagnetic Potentials and Gauge Transformation

Electromagnetic potentials and gauge transformation are derived for non-cloSedexterior differential forms with the help of relevant homology.Since de Rham ccahomology is sure-ly a relavant homology. potentials for both closed and non-closed forms and the gauge transforma-tion ean be unified in terms of relavent homology.     

农杆菌介导菊花遗传转化效率的研究进展

本文结合近年来菊花遗传转化的研究,从菊花再生体系建立和农杆菌介导的菊花遗传转化出发,讨论了影响菊花遗传转化效率的因素。诸多的菊花遗传转化研究表明,不同基因型的菊花转化受体、外植体类型、转化条件、激素添加是决定转化效率的关键因素。