棉花转基因工作中利用卡那霉素筛选试管再生株的研究

在转棉花不育基因工作中,利用kanamycin(简称KM)筛选携带有NPTⅡ基因的棉花试管再生株,其结果基本与大田涂抹除草剂结果一致.对于大量转化后代,用此方法比常规直接将试管再生株移入大田后再进行检测更为方便,而且减轻试验室的工作量、节省试验成本、节约试验空间、减少移入大田的非转化体的数量.     

过量表达TaNHX2基因提高转基因棉花的抗旱耐盐性

液泡膜Na+/H+反向转运蛋白在调节离子平衡,提高植物耐盐耐旱方面起着重要功能.为了研究液泡膜Na+/H+反向转运蛋白基因TaNHX2在棉花耐盐耐旱中的作用,以晋棉7号为受体,利用农杆菌介导法将克隆自小麦的TaNHX2基因转入棉花愈伤组织,通过组织培养胚状体发生途径获得转基因再生植株.以0.5％卡那霉素对再生苗筛选后,利用PCR和RT-PCR进行分子检测,证实外源基因已导入棉花并正常表达.在温室盆栽条件下,于4片真叶期对转TaNHX2基因棉花及其野生型对照施加NaCl或PEG胁迫处理,处理10天后发现盐胁迫或干旱胁迫显著抑制了棉花光合作用,提高了丙二醛(MDA)含量;转TaNHX2基因棉花的光合速率(Pn)显著高于野生型,MDA含量显著低于野生型;转TaNHX2基因棉花在盐旱胁迫后,叶片和根系中的Na+含量显著低于野生型对照.这些结果说明:在棉花中过量表达TaNHX2基因,盐旱胁迫下可以降低转基因棉花的Na+含量,提高光合速率,降低MDA含量,从而提高转基因棉花的耐盐抗旱能力.     

农杆菌介导的棉花转基因过程中影响出愈率的因素

以晋棉７号、石远３２１、泗棉３号、冀合３２１、柯字３１２、２０１等６个品种为供试材料。种出无菌苗，以５ｄ苗龄的下胚轴作为外植体；供试菌种为Ａｇｌ－１，培养方法同前。按试验设计，分不同品种、苗龄、菌液浓度、预培养和抗生素浓度及配比等５个试验处理将外植体...     

甘露糖在棉花基因转化中对愈伤的诱导和分化的影响

在目前的植物转化系统中,要求在关注基因或目的基因转入细胞时,同时有标记基因存在。标记基因主要是抗生素或除草剂的抗性基因。借标记基因的表达可以将转化细胞从大量的未转化细胞中筛选出来。但抗生素或除草剂的抗性标记基因存在,对转基因作物的安全性有很大的影响。本文利用甘露糖异构酶基因对棉花进行转化,以甘露糖作为筛选剂分析对棉花愈伤诱导和分化的影响。1材料和方法1.1供试品种和菌种以晋棉7号、柯字312、泗棉3号作为供试品种。用于转化的农杆菌菌株为LB4404,内含甘露糖-6-P-异构酶基因。1.2实验方法1.2.1无菌苗制备。棉子经硫…     

雄性不育基因对棉花的遗传转化

利用TA29、A6、A9三启动子功能区与barnase基因融合构建的不育基因以农杆菌介导法对棉花下胚轴进行了遗传转化,通过胚状体途径获得了转基因再生植株.利用150 mg·L-1高浓度卡那霉素(Km)对转化初期筛选出的再生苗进行再次筛选,提高了转化株的选出率.通过PCR检测和Southern dot blot分析从转基因胚状体再生植株中获得了带有barnase不育基因的120株转基因植株.进行转基因植株生物学性状检测和观察表明,所获得的转基因植株对溴苯腈表现出了明显的抗性,并从不育基因转化植株中筛选出了具有明显不育特征的雄性不育株.     

以对潮霉素抗性为筛选标记的棉花遗传转化

以 HPT基因作为筛选标记基因 ,潮霉素作为筛选剂 ,通过农杆菌介导法将 GFP基因导入棉花细胞并得到再生植株。经过 Southern杂交证实外源基因已经整合到棉花基因中 ,荧光显微镜可以观察到绿色荧光 ,说明 GFP基因得到表达。研究确定了潮霉素作为棉花转化的筛选剂在农杆菌介导的转化中适用的浓度范围及筛选方法 ,即棉花转化中潮霉素的筛选浓度范围为 2 .5～ 1 0 mg· L- 1,在有 GFP等一些易于观察和检测的标记基因存在时 ,起始浓度可用较低 ( 2 .5 mg· L- 1)的筛选浓度 ;而在没有标记基因或检测方法较复杂时 ,起始浓度用较高 ( 1 0 mg· L- 1)的筛选浓度     

棉花转基因工作中利用卡那霉素筛选试管再生株的研究

在转棉花不育基因工作中，利用kanamycin(简称KM）筛选携带有NPTⅡ基因的棉花试管再生株，其结果基本与大田涂抹除草剂结果一致，对于大量转化后代，用此方法比常规直接将试管再生株移入大田后再进行检测更为方便，而且减轻试验室的工作量，节省试验成本，节约试验空间，减少移入大田的非转化体的数量。     

NPTII标记转基因棉花再生株的延其筛选

新霉素磷酸转移酶(Neomycin Phosphotransferase Ⅱ,NPTⅡ)基因是迄今植物遗传转化中应用最为广泛的选择标记.该基因编码新霉素磷酸转移酶亦称氨基糖苷-3＇-磷酸转移酶(aminoglycoside-3'-phosphotransferase Ⅱ),其编码产物可使氨基糖苷类抗生素(aminoglycoside angibi-otics)如卡那霉素(kanamycin,Km)、新霉素(neomycin)、G418等磷酸化而失活.卡那霉素等氨基糖苷类抗生素能与植物细胞叶绿体和线粒体中的核糖体30S小亚基相结合,影响70S起始复合物的形成,干扰叶绿体及线粒体的蛋白质合成,从而导致植物细胞死亡.     

小陇山野生药用观赏植物介绍

小陇山野生药用观赏植物介绍张慧军我省小陇山林区野生药用观赏植物丰富；种类多达１８０多种。这些野生植物药用和观赏价值极高，现向大家介绍几种。（一）针叶类：白皮松，常绿乔木，树干发白，易造形，观赏价值极高。药用部分为球果，能镇咳、祛痰、消炎、平喘，生于山...