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为避免多年生果树组织中的多糖和酚类物质影响基因组DNA的提取质量,在CTAB提取缓冲液中加入2%PVP-40和2% β-巯基乙醇,以改进的CTAB提取方法从苹果嫩叶中提取基因组DNA.所得DNA样品D260nm/D280nm比值为1.98~2.05,纯度高.当用DNA样品和设计的特异引物进行PCR扩增时,其PCR产物只出现一条清晰电泳谱带,质量满足测序要求,采用DNA纯化试剂盒纯化后可直接用于测序.该方法已成功用于"国光"和"金冠"苹果的基因组DNA测序,是一个操作简便、快捷和高效的方法,非常适用于果树基因组DNA的提取和测序. 相似文献
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一种适于SSR-PCR的棉花基因组DNA提取法 总被引:8,自引:0,他引:8
本文是一种适合于棉花这样高含酚类植物进行DNA提取的方法,提取程序中增加了DIECA、PVP40等对棉花酚类物质氧化有抑制作用的试剂,简化并改进了本实验室常用的棉花总DNA提取方法的步骤,使棉花总DNA能够快速高质量提取,避免了以往的棉花总DNA提取过程中棉酚的氧化对DNA提取质量的影响,提取的DNA能很好地进行SSR-PCR分析.本法提取的棉花总DNA呈乳白、疏松的丝状、干后为透明状,能很好的溶解在TE或ddH2O中.用本方法提取的棉花总DNA作为模板用JESPR系列SSR标记对其进行SSR-PCR扩增,可以扩增出清晰的条带. 相似文献
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高质量枣树基因组DNA提取方法的研究 总被引:21,自引:0,他引:21
主要针对枣树组织中多糖严重干扰基因组DNA提取质量的问题,本研究比较了常规CTAB法、TE3D法和改良CTAB法3种方法的处理效果。结果表明:常规CTAB法提取DNA难以去除植物组织中的多糖类杂质;TE3D法提取DNA多糖杂质少,但产率低、易降解、褐化严重;而改良CTAB法提取DNA量大(1000ng/μl左右),产率高,可达120μg DNA/g新鲜组织,无明显降解,杂质少,A260/A280比值1.80左右,通过基因组DNA-AFLP指纹图谱分析,完全满足实验要求。并进一步对改良CTAB法的关键步骤作出具体分析讨论。 相似文献
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金龟甲基因组DNA提取方法比较研究 总被引:1,自引:1,他引:0
摘 要:为了筛选适宜金龟甲RAPD-PCR的基因组DNA提取方法,于2009年在青岛农业大学实验室内,分别采用改良的SDS法、平衡酚法、裂解液法和CTAB法提取棕色鳃金龟(Holotrichia titanis Reitter)的基因组DNA,通过DNA沉淀性状观察、产量和质量分析,以及随机引物PCR (RAPD-PCR)比较,筛选最优的金龟甲基因组DNA提取方法。研究结果表明,改良的SDS法提取的基因组DNA产量较高,但纯度较低,并且降解严重,RAPD-PCR扩增谱带弥散较严重;裂解液法提取的基因组DNA纯度较高,降解程度较低,但产量最低,RAPD-PCR扩增谱带弥散较严重,并且存在非特异扩增现象;CTAB法提取的基因组DNA不仅产量和纯度较低,降解严重,而且RAPD-PCR扩增结果不稳定,具非特异扩增现象;平衡酚法提取的基因组DNA产量和纯度高,降解轻微,RAPD-PCR扩增结果稳定,扩增谱带弥散轻微。因此,在上述4种方法中,平衡酚法是最适合PAPD-PCR的金龟甲基因组DNA提取方法,裂解液法和改良的SDS法次之,CTAB法最差。 相似文献
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盾叶薯蓣基因组DNA的提取及RAPD鉴定研究 总被引:1,自引:1,他引:0
盾叶薯蓣是中国特有的植物,是甾体激素的重要来源。试验采用CTABⅠ,CTABⅡ,SDSⅠ和SDSⅡ等方法对盾叶薯蓣基因组DNA的提取进行了研究,并且结合核酸测定仪、琼脂糖凝胶电泳法以及RAPD鉴定等方法对DNA质量进行了鉴定。试验结果表明,采用CTABⅠ法可提取高质量DNA供分子标记使用。 相似文献
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摘要]目的:筛选并建立雷公藤叶片基因组DNA的RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)技术最优反应体系。方法:采用改良的CTAB法提取叶片总DNA,然后通过对RAPD反应体系中最主要的退火温度、引物浓度、dNTP浓度、DNA模板浓度以及Tag DNA聚合酶浓度等5个因子逐个进行单因子优化。结果:20μl PCR反应体系中,雷公藤叶片基因组DNA RAPD最优反应体系为,最佳温度36℃,引物浓度为1.1μmol/L,dNTP浓度1.25mmol/L,DNA模板浓度3790 ng/L,Tag DNA聚合酶用量为5.625 U/L。 相似文献
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Improved RAPD amplification of recalcitrant plant DNA by the use of activated charcoal during DNA extraction 总被引:8,自引:0,他引:8
An efficient procedure has been developed for DNA extraction from cotton by modifying the original CTAB method. The major improvement concerns the use of activated charcoal to bind resinous and coloured compounds which copurify with the DNA. The efficiency of amplification by RAPD was used as a criterion to evaluate the action of activated charcoal. Twenty-five random decamers from Operon Technologies were used to compare DNA samples extracted in the presence or absence of activated charcoal. The results in terms of amplification suggest that the use of activated charcoal in DNA extraction enhances RAPD amplification. This technique was initially developed for cotton but it has been applied successfully to other recalcitrant plants such as coffee, rubber tree, cassava and banana. 相似文献
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马蓝基因组DNA提取及RAPD反应体系的优化 总被引:1,自引:1,他引:0
摘 要:以马蓝为研究材料,对马蓝基因组DNA的提取以及RAPD-PCR反应体系进行了优化。结果表明,在提取液中加入PVP和β-巯基乙醇去除酚类物质,采用高盐沉淀DNA和多次洗涤去除糖类,可以得到高质量的马蓝基因组DNA。电泳检测结果表明,所获得的DNA完整,无降解,完全可以满足RAPD等分子标记分析的需要。同时对马蓝RAPD-PCR反应体系中各个影响因素进行了优化,建立了适合马蓝RAPD分子标记的最佳反应体系,即20μl反应体系中含有1.25UTaqDNA聚合酶,0.25mmol/LdNTP,2.5mmol/LMg2+,50ng模板DNA,1.0μmol/L引物;反应程序中最佳退火温度为38℃。 相似文献
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Random amplified polymorphic DNA (RAPD) markers were used to study the molecular characterization of 10 new radiomutants of chrysanthemum. The original cultivar ‘Richmond’ differed in genetic distance from its Lady group mutants. The analysis of genetic similarity indices revealed low diversity within the radiomutants. The dendrogram obtained after cluster analysis separated the new cultivars as a group that differed from the original cultivar ‘Richmond’. The Lady group cultivars, derived from one original cultivar by radiomutation, could be distinguished from each other by using RAPD markers of only a single primer or sets of two or three primers. Polymerase chain reaction analysis proved the efficiency of the RAPD method for DNA fingerprinting of the original cultivar ‘Richmond’ and its new radiomutants. 相似文献