半定量RT-PCR法评定鸡小肠肽转运载体PepT1基因的表达

摘要：根据鸡肽转运载体cPepT1 mRNA和看家基因β-actin mRNA序列，分别设计cPepT1和β-actin 引物各1对，并通过Mg2+浓度、循环数等PCR条件的优化，建立了包括RNA提取、反转录、PCR的鸡小肠cPepT1基因表达检测方法。采用该方法研究了肉仔鸡cPepT1基因在小肠各段的表达差异。结果显示，肉仔鸡小肠cPepT1表达水平表现为随小肠近端到远端显著降低的趋势，回肠表达水平显著低于十二指肠和空肠，十二指肠和空肠差异不显著。     

日粮添加木聚糖酶对肉鸡小肠葡萄糖吸收及其转运载体基因表达影响

156羽1日龄AA肉雏鸡随机分为对照组和试验组，对照组饲以小麦基础日粮，试验组在基础日粮中添加1000mg/kg木聚糖酶，试验期为30d。与对照组相比，试验组4周内平均日增重提高4.81％（P〈0．01），料重比下降5．00％（P〈0．05）；肠系膜静脉血清中葡萄糖的含量提高5．56％（P〈0．05）。采用半定量RT-PCR方法测定十二指肠和空肠黏膜SGLT1 （sodium／glucose cotransporter 1）和GLUT2（glucose transporter 2）mRNA的表达，发现木聚糖酶显著增加十二指肠SGLT1 mRNA的表达，增幅为33．30％（P〈0．05），试验组空肠SGLT1 mRNA的表达量比对照组增加8．21％，但差异不显著（P〉0．05）。木聚糖酶对十二指肠和空肠GLUT2 mRNA表达均无显著影响。提示木聚糖酶主要作用在小肠上段，通过上调SGLT1的表达而影响肉鸡小肠葡萄糖吸收。     

断奶前后仔猪小肠Proglucagon mRNA的时空特异性表达

摘要：目的：胰高血糖素样肽-2（GLP-2）与小肠上皮生长关系密切。研究断奶前后仔猪十二指肠、空肠和回肠GLP-2 mRNA 表达丰度的变化规律，探讨断奶前后仔猪小肠上皮更新缓慢，是否与编码GLP-2的基因 — 胰高血糖素原（Proglucagon）的时空特异性表达有关。方法：本实验随机选取新生仔猪9窝，于35日龄（d）断奶。分别于断奶前1周（28d）、断奶当天（35d）、断奶后72h（38d）、断奶后1周（42d）、断奶后10天（45d）随机选取仔猪6头，屠宰，迅速采取十二指肠、空肠（后段）和回肠粘膜，用RT-PCR检测样品中胰高血糖素原 mRNA表达量。结果：胰高血糖素原基因在小肠中的表达呈现明显的空间（肠段）特异性，空肠和回肠表达丰度较高，而在十二指肠表达很少。胰高血糖素原 mRNA在仔猪空肠和回肠的表达显示截然不同的时间（日龄）特异性模式：空肠胰高血糖素原 mRNA表达在42日龄之前保持较高水平，而在断奶后1周和断奶后10天显著下降；而回肠中胰高血糖素原 mRNA表达水平在本实验观察期内保持稳定，未检测到日龄相关的变化。结论：断奶仔猪小肠GLP-2 mRNA表达呈现时空特异性规律。     

鸡胃肠道生长抑素(SS)mRNA表达的组织特异性

以30dArborAcre(AA)肉鸡为模型,采集胃肠道样品,采用相对定量RT-PCR方法研究了生长抑素(SS)mRNA在鸡胃肠道分布的组织特异性。结果表明,腺胃SSmRNA的表达量高于所有肠段,差异极显著(P<0.01);十二指肠和空肠SSmRNA的表达丰度相似,二者均显著高于回肠(P<0.05)。定性研究显示,肌胃和结直肠均有SSmRNA表达,但其表达量显著低于腺胃、十二指肠、空肠和回肠。SSmRNA在主要的消化(腺胃)、吸收(十二指肠和空肠前段)器官的高丰度表达,提示SS对营养物质的消化吸收具有重要的调控作用。异性     

in Gastrointestinal Tracts of Chicken

以30 d Arbor Acre (AA)肉鸡为模型，采集胃肠道样品，采用相对定量RT-PCR方法研究了生长抑素(SS ) mRNA在鸡胃肠道分布的组织特异性。结果表明，腺胃SS mRNA的表达量高于所有肠段，差异极显著 (P＜0.01)；十二指肠和空肠SS mRNA的表达丰度相似，二者均显著高于回肠(P＜0.05)。定性研究显示，肌胃和结直肠均有SS mRNA表达，但其表达量显著低于腺胃、十二指肠、空肠和回肠。SS mRNA在主要的消化(腺胃)、吸收(十二指肠和空肠前段)器官的高丰度表达，提示SS对营养物质的消化吸收具有重要的调控作用。     

断奶前后仔猪十二指肠、空肠和回肠SGLT1 mRNA表达的变化及半胱胺的影响

研究断奶前后仔猪十二指肠、空肠和回肠SGLT1mRNA表达丰度的变化,并同时观察半胱胺对其表达的影响,从分子水平探讨半胱胺对断奶仔猪葡萄糖吸收的影响与可能的机制。新生仔猪随机分为对照组和实验组,12日龄(D12)起对照组饲喂基础乳猪料,实验组在基础乳猪料中添加120mg/kg半胱胺,两组仔猪均于35日龄断奶,每组分别于断奶前1周、断奶当天、断奶后3d、1周以及断奶后10d随机选取仔猪各6头,宰杀后采集十二指肠、空肠和回肠粘膜,采用RT-PCR方法测定钠-葡萄糖共转运载体1(sodium-glucosecotransporter1,SGLT1)mRNA表达的相对丰度。结果表明,回肠SGLT1mRNA的表达量最高,空肠其次,十二指肠最低;SGLT1mRNA在不同肠段的表达呈现截然不同的发育模式,十二指肠SGLT1mRNA表达量在45d显著上升(P<0.05),而空肠则在42和45d时显著下降(P<0.01),回肠SGLT1mRNA表达在整个实验期间无显著变化;此外,日粮添加半胱胺显著提高38d十二指肠以及42和45d空肠SGLT1mRNA表达,而对回肠SGLT1mRNA表达无显著影响。小肠SGLT1mRNA表达以及日粮添加半胱胺促进SGLT1mRNA表达的作用均呈现时空特异性规律。     

猪肠道寡肽转运载体1(PepT1)mRNA表达的肠段特异性和发育性变化

研究旨在探讨猪肠道寡肽转运载体（PepT1）mRNA表达的肠段特异性和发育模式,为寡肽营养在养猪生产中的应用提供理论依据。实验分别选取遗传背景相同的1、7、26、30、60、90和150 d蓝塘和长白公猪各5头,测体重后屠宰,取十二指肠、空肠、回肠和结肠组织样品;以18S rRNA为内标基因,用实时荧光定量PCR法（SYBR Green Ⅰ试剂盒）检测PepT1 mRNA在60 d长白猪表达的肠段特异性及其在蓝塘和长白猪肠道的发育模式。结果显示：长白猪肠道PepT1 mRNA的表达丰度十二指肠显著高于空肠和回肠（P <0.05）,结肠无PepT1 mRNA的表达;PepT1 mRNA的表达丰度在十二指肠为蓝塘猪7、90 d和长白猪60 d,而在空肠和回肠为蓝塘猪60 d和长白猪90 d时达最高水平（P <0.05）;蓝塘和长白猪肠道PepT1 mRNA的表达在断奶前（28 d断奶）具有不同的发育模式,而在断奶后则具有相似的发育性变化;同一猪种不同肠段PepT1 mRNA的表达模式不同,但空肠和回肠在断奶后具有相似的发育性变化;不同猪种同一肠段PepT1 mRNA的表达蓝塘猪十二指肠在7和90 d、空肠在7和60 d及回肠在30 d时分别显著高于长白猪（P <0.05）。结果说明猪肠道PepT1 mRNA的表达受到发育阶段、品种和肠段的调控。     

仔猪水通道蛋白基因的克隆及断奶应激对其在胃肠道组织mRNA表达的影响

水通道蛋白(AQP)作为一种膜转运蛋白,对于调控肠道组织的水分子转运具有重要作用。本实验利用同源序列克隆法设计引物,从仔猪(Susscrofa)的消化道组织中克隆AQPs家族基因(AQP2~AQP11)(GenBank登录号分别为EU636238、EU161094、EU165525、EU192130、EU620575、EU024116、EU220426、EU220427、EU582021和EU220425),并对其进行生物信息学分析。采用荧光定量PCR研究断奶应激对于仔猪胃肠道组织中AQP1、AQP3、AQP8和AQP11的mRNA表达影响。生物信息学分析发现,猪AQPs家族基因含有高度保守的天冬酰氨-脯氨酸-丙氨酸(NPA)结构序列,基因表达分析发现,断奶组仔猪的AQP1基因在十二指肠、回肠和结肠组织的mRNA表达量与对照组相比显著上调(P<0.05);AQP3基因在胃和小肠组织的mRNA表达有显著上调(P<0.05);AQP8基因在胃和回肠组织中mRNA表达有显著上调(P<0.01),在其他组织中没有显著差异;AQP11基因在空肠组织的mRNA表达量显著上调了1.7倍(P<0.05)。这些研究结果表明,AQP基因可能在断奶应激引起的仔猪肠道腹泻中发挥重要作用。     

高、低脂系肉鸡肝脏脂肪合成代谢相关基因的表达差异分析

为探讨高、低脂肉鸡肝脏脂肪合成代谢的差异,本研究以东北农业大学肉鸡高、低腹脂双向选择品系第14世代鸡群为实验材料,利用实时荧光定量PCR方法,比较了乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、脂肪酸合成酶(FAS)、固醇调控元件结合蛋白1(SREBP1)、肝X受体(LXR)、甘油磷酸酰基转移酶(GPAT)、载脂蛋白A-1(ApoA-1)、葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)和载脂蛋白B(ApoB)8个与脂肪合成代谢相关的基因在1～12周龄高、低脂系肉鸡肝脏中的表达模式和表达差异.结果显示,从总体上看,ACC、FAS、SREBP1、LXR、GPAT和ApoA-1基因在高脂系鸡肝脏中的表达量高于低脂系鸡的表达,其中,ACC、FAS和SREBP1基因在第10周龄高脂系鸡中的表达量均极显著高于低脂系鸡(P＜0.01); LXR基因在第9和10周龄高脂系鸡中的表达量极显著高于低脂系鸡(P＜0.01); ApoA-1基因在第6、8和10周龄高脂系鸡中的表达量极显著高于低脂系鸡(P＜0.01),在第11周龄高脂系鸡中的表达量显著高于低脂系鸡(P＜0.05);同时,研究发现,GLUT2基因在第5、8周龄低脂系鸡的表达量显著高于高脂系鸡(P＜0.05),并且ApoB基因在7周龄低脂系鸡肝脏的表达量也显著性的高于高脂系鸡(P＜0.05).本研究表明,高、低脂系肉鸡肝脏脂肪合成相关基因的表达存在着明显的差异,高脂系肉鸡肝脏具有更强的脂肪合成能力.本研究结果为进一步揭示肉鸡脂肪性状形成的分子机制提供了基础研究资料.     

鸡核受体辅激活蛋白基因(NCOA1)SNPs分析及mRNA的表达

核受体辅激活蛋白基因(NCOA1)是类固醇激素受体超家族中的一员,在生殖细胞的生长和分化过程中起着重要的调节作用。本研究利用PCR-SSCP技术对NCOA1基因外显子的多态性进行了分析,在第3和12外显子上分别发现了SNPs位点,并采用实时荧光定量PCR对多态性位点处mRNA表达水平进行了研究,发现NCOA1基因随着生长发育其表达量呈波动性增加,14周龄前表达量很少,随着性成熟NCOA1基因表达量快速增加,28周龄时其表达量达到峰值,之后表达量下降。产蛋性能较好的母系鸡NCOA1基因的相对表达量比产蛋性能较差的父系鸡较早地开始增加,并且在14周龄后表达量显著高于父系鸡(P<0.05)。同位点对产蛋性能有显著影响的优势基因型AA和CC个体的表达量在16周后也显著高于同位点的其他基因型个体(P<0.05)。研究提示NCOA1基因mRNA表达水平影响鸡的性成熟过程和产蛋性能。     

青海省耕地资源开发利用分析及对策研究

分析论述了青海省耕地资源开发利用的现状、特点和问题。在此基础上,提出了对青海省耕地资源进行研究的框架体系和思路,同时基于GIS/RS技术设计了相关的技术路线。最后依据所做设计对青海省耕地资源开发利用做了初步分析,并进行了相关的对策研究分析。     

烘焙对生物质热解产物特性的影响

烘焙可有效地降低生物质中的水分和氧,对其热解过程有显著的影响。该文主要研究了烘焙温度（200,230,260,290℃）对生物质热解过程及产物特性的影响行为及影响机制;研究发现烘焙能改善热解产物的品质,随着烘焙温度的升高,热解合成气中CO含量由48%逐渐减少到34%,CH4和H2增加,其中H2含量最大增加了77.4%,而液体产物中,乙酸和水分含量逐渐减小,水分含量最大减少了42.8%,而酚类产物的含量明显增加,有利于生物油品质的提高。该研究为烘焙技术的发展和生物质高效热化学转化提供科学参考。     

氟对小鼠生精细胞凋亡的影响及锌的保护作用

为观察氟对成年雄性小鼠生精细胞凋亡的影响及锌的保护作用,通过腹腔注射氟化钠建立氟中毒动物模型及锌保护实验。采用石蜡切片、苏木精-伊红染色(HE染色)、末端原位标记(TUNEL)及琼脂糖凝胶电泳的方法检测小鼠生精细胞的凋亡情况。结果显示:(1)氟感染组无论是低剂量组(NaF10 mg/kg)或是高剂量组(NaF 20 mg/kg)生精细胞都发生了明显的凋亡。生精细胞凋亡主要发生在精母细胞和精原细胞,凋亡指数与对照组差异极显著(P<0.05)。(2)无论是高剂量锌(ZnSO430 mg/kg)和低剂量锌(ZnSO415 mg/kg)都可以使凋亡指数明显降低,高剂量锌组的凋亡指数与对照组差异不显著(P>0.05)。     

稀释介质种类对豆乳蛋白胶体粒子zeta电位测定效果的影响

蛋白粒子zeta电位是衡量豆乳体系稳定性的一个重要指标,而在电位分析前常采用稀释介质对豆乳进行预处理。为了确保zeta电位测定的准确性和科学性,必须选择合适的稀释介质。因此,该研究采用去离子水、豆乳超滤液两种稀释介质分别对豆乳进行稀释,并比较了这2种稀释介质对zeta电位、粒径分布、pH值以及电导率的影响。结果表明,若以去离子水为稀释介质,zeta电位的绝对值会随着稀释倍数的升高而显著增加（*P<0.05）,这主要是由于豆乳蛋白胶体粒子发生解聚导致粒径减小,而pH值的升高和电导率的降低则说明豆乳的离子强度显著降低。相比之下,选用豆乳超滤液稀释豆乳时,体系的 zeta 电位、粒径分布、pH值以及电导率都未随稀释倍数的增加而改变（*P>0.05）,说明此法能够较好地维持豆乳蛋白粒子的荷电稳定性。由此可知,豆乳超滤液可做为豆乳zeta电位测定的理想稀释介质。     

Towards bioremediation of toxic unresolved complex mixtures of hydrocarbons: identification of bacteria capable of rapid degradation of alkyltetralins

Background, aim and scope  Unresolved complex mixtures (UCMs) of aromatic hydrocarbons are widespread, but often overlooked, environmental contaminants. Since UCMs are generally rather resistant to bacterial degradation, bioremediation of UCM-contaminated sites by bacteria is a challenging goal. Branched chain alkyltetralins are amongst the individual classes of components of aromatic UCMs which have been identified in hydrocarbon-contaminated sediments and a number of synthetic alkyltetralins have proved toxic in laboratory studies. Thus, alkyltetralins should perhaps be amongst the targets for UCM bioremediation strategies. The slow degradation of several alkyltetralins by a microbial consortium has been reported previously; however, the bacteria involved remain unidentified and no single strain capable of alkyltetralin biodegradation has been isolated. The present project therefore aimed to enrich and identify bacterial consortia and single strains of bacteria from a naturally hydrocarbon-contaminated site (Whitley Bay, UK), which were capable of the degradation of two synthetic alkyltetralins (6-cyclohexyltetralin (CHT) and 1-(3’-methylbutyl)-7-cyclohexyltetralin (MBCHT)). Materials and methods  Bacteria were enriched from sediment collected from Whitley Bay, UK by culturing with CHT and MBCHT for a period of 4 months. Biodegradation experiments were then established and degradation of model compounds monitored by gas chromatography–mass spectrometry. Internal standards allowed the generation of quantitative data. 16S rRNA gene clone libraries were constructed from individual enrichments to allow assessment of microbial community structure. Selective media containing MBCHT were used to isolate single bacterial strains. These strains were then tested in liquid culture for their ability to degrade MBCHT. Results  The consortia obtained through enrichment culture were able to degrade 87% of CHT and 76% of MBCHT after only 46 days compared with abiotic controls. The 16S ribosomal RNA gene clone libraries of these bacteria were dominated by sequences of Rhodococcus spp. Using selective media, a strain of Rhodococcus was then isolated that was also able to biodegrade 63% of MBCHT in only 21 days. Discussion  The present report describes the isolation of a single bacterial strain able to degrade the resistant MBCHT. Although significant losses of MBCHT were observed, putative metabolites were not detectable. Rhodococcus sp. have been reported previously to be able to biodegrade a range of hydrocarbon compounds. Recommendations and perspectives  Due to their environmental persistence and toxicity, aromatic UCMs require bioremediation. The culturing and identification of such bacteria capable of rapid degradation of alkyltetralins may be an important step toward the development of bioremediation strategies for sites contaminated with toxic UCMs.     

食用仙人掌萎蔫气象条件分析

塑料大棚内种植的食用仙人掌在土壤墒情较好时也有萎蔫现象发生，通过试验观测和对仙人掌生理习性的分析，发现阴雨过后天气突然放晴温度急剧上升易使仙人掌发生萎蔫现象，并提出了田间管理的应对措施。     

大豆连作障碍的研究进展

从生物学、微生物学和植物营养生理学的角度及诸多障碍因子等方面,综合评述和分析了国内外大豆连作研究的现状,阐述了目前国内外学者提出的各种应对连作问题的策略和技术措施,提出大豆连作障碍研究仍有待解决的问题和研究方向。     

三门峡水库库岸坍塌成因分析与防治措施研究

三门峡水库自1960年9月蓄水运行以来,库岸坍塌现象频繁发生,平均每年塌岸0.5～0.7亿m3.指出了造成库岸坍塌的原因主要是地质环境的影响以及水力条件的变化;不同的地形、地貌、地质结构和岩性特征,表现了不同的塌岸强度,其中黄土塬区为极强塌岸段,黄河Ⅱ级阶地为强烈塌岸段,黄河Ⅰ级阶地为中等强烈塌岸段;分析了引起库岸坍塌的主要水力条件有大气降水、地表水和地下水,并且不同水力条件及其变化特征,对库岸坍塌影响的方式和程度也不同;最后给出了防治库岸坍塌应采用标本兼治的原则,治标是指对塌岸进行必要的加固、支挡、衬砌等;治本就是根据引起塌岸的原因以及不同地质环境条件下的塌岸特征和水力条件,因地制宜,因害设防,从根本上进行综合治理.     

荔枝种子结构的扫描电镜观察

荔枝种子从果实中剥离出来后, 即使在室内条件下, 也极易失水干缩, 潮湿环境中又易发霉而腐烂。扫描电镜观察表明: 种皮上布满纹孔, 水分散失面积很大; 种脐部为疏松的海绵组织, 且营养丰富。据此, 生产上应对种子彻底清洗, 并保存于适当湿度的环境中, 以提高其发芽率。     

石羊河下游民勤绿洲荒漠化影响因素趋势预测

 从荒漠化治理的实践出发,用Hurst指数对内陆河下游民勤绿洲荒漠化影响因素进行预测分析,对体现民勤绿洲荒漠化主要影响因子的农村人口、耕地面积、农村用电量、机井眼数和沙尘暴时间5个指标进行预测。结果表明:未来10年内,农村人口Hurst指数为0.381,与1989—2003年的上升趋势相反,具有下降趋势;年耕地面积Hurst指数为0.578 3,与1989—2003年时的上升趋势一致,但持续性不强;农村用电量Hurst指数为0.3324,与1989—2003年的上升趋势相反,具有下降趋势;年机井眼数Hurst指数为0.2618,与1989—2003年的上升趋势具有较强的长期相关性,但为相反趋势;年沙尘暴时间Hurst指数为0.4043,呈与1953—1998年的下降趋势相反的弱持续相关性。通过预测认为:应该加强对耕地面积的宏观调控,抑制土地利用所引起荒漠化的发展,控制开荒,提高现有耕地的利用效率;同时要继续宏观调控农村人口、农村用电量、机井数量变化向良性方向发展。