GUS基因和CMV—CP基因在转基因番茄后代的遗传研究

本工作对外源基因ＧＵＳ和ＣＭＶ－ＣＰ在转化番茄植株后代的遗传稳定性方面作了研究。实验证明，位于同一质粒上的ＧＵＳ和ＣＭＶ－ＣＰ基因，在Ｒ１代番茄转化植株中表现为连锁遗传。     

马铃薯Y病毒HC-Pro基因的克隆、序列分析以及原核表达

本研究以马铃薯Ｙ病毒中国株系（ＰＶＹ－Ｃ） ＲＮＡ为模板,通过ＲＴ－ＰＣＲ克隆了ＰＶＹ－Ｃ ＨＣ－Ｐｒｏ基因,并对其进行了序列分析,测序结果表明ＰＶＹ－ＣＨＣ－Ｐｒｏ基因全长为１３６８ｎｔ,编码一个含４５６个氨基酸的蛋白。它与ＰＶＹ其它株系的同源性高于与马铃薯Ｙ病毒属其它种病毒的同源性,与所报道的ＰＶＹｎ株系的碱基及氨基酸序列同源性均为９６％,推测ＰＶＹ－Ｃ可能是ＰＶＹｎ株系或它的一个近缘株系。Ｓ     

我国花生矮化病毒（PSV）株系的血清学和壳蛋白基因序列分析

琼脂双扩散血清试验表明，参试的我国花生矮化病毒６个分离物和株系之间血清学关系十分亲近，而与美国ＰＳＶ－Ｅ和ＰＳＶ－Ｗ株系存在明显的差异。完成对花生致病力不同的ＰＳＶ－Ｍｉ和ＰＳＶ－Ｓ两个株系壳蛋白基因的ＲＴ－ＰＣＲ扩增，克隆和序列分析。     

马铃薯Y病毒普通株系外壳蛋白基因的克隆与原核表达载体的构建

本研究报道马铃薯Ｙ病毒普通株系外壳蛋白基因ｃＤＮＡ克隆,全序列分析及其原核表达载体构建的结果。从感染ＰＶＹ的烟草叶片中提取病毒粒体,ＳＤＳ－酚法提取病毒核酸。以所提核酸为模板,用一对ＰＶＰＣＰ基因引物进行ＲＴ－ＰＣＲ,扩增了０．８０ｋｂ的特异性核苷酸片段。该片段大小五国外报道的ＰＶＹ ＣＰ基因一致,将ＰＤＲ产物插入到克隆载体ｐＧＥＭ７Ｚｆ（＋）中转化大肠杆菌ＤＨ５α。     

辐射与花药培养相结合筛选烟草抗黄瓜花叶病毒病突变体

用６０Ｃｏγ射线辐射处理小孢子处于单核靠边期的烟草Ｋ３２６、ＮＣ８９、８６１１花蕾并进行花药培养,获得的单倍体植株移栽成活后接种黄瓜花叶病毒病（ＣＭＶ）汁液。结果表明,ＮＣ８９、８６１１单倍体植株的抗病性变异与６０Ｃｏγ射线辐射剂量之间存在一定范围的定向性,剂量≥４ｋｒａｄ时,植株叶片变异与ＣＭＶ症状相似,不利于选择;剂量＜２ｋｒａｄ时,植株的抗病性与对照之间没有差异;剂量＝２ｋｒａｄ时,植株的抗病性与对照之间的差异可达到显著水平,并在２ｋｒａｄ处理的ＮＣ８９、８６１１单倍体植株群体中筛选到了抗ＣＭＶ突变体。     

生长因子对卵母细胞体外成熟及早期胚胎体外发育的影响

为了探讨生长因子（ＥＧＦ，ＰＤＧＦ）对牛卵母细胞体外成熟与早期胚胎体外发育的影响，本研究进行了两个实验。实验１：在卵母细胞体外成熟（ＩＶＭ）中，将卵母细胞平均随机的放入表皮生长因子浓度为０，２．５，２５，５０μｇ／Ｌ的成熟培养液和对照组中。实验２：在早期胚胎体外培养（ＩＶＣ）过程中，将受精卵平均随机分配入５个不同培养液的处理组：（１）ＴＣＭ－１９９＋１０％阉公牛血清（ＳＳ）；（２）ＴＣＭ－１９９＋ＥＧＦ＋ＰＤＧＦ；（３）ＴＣＭ－１９９＋ＥＧＦ；（４）ＴＣＭ－１９９＋ＰＤＧＦ；（５）ＴＣＭ－１９９＋无生长因子、其中ＥＧＦ：５０μｇ／Ｌ，ＰＤＧＦ：０．１μｇ／Ｌ。２，３，４，５组有０．１％ＰＶＡ和０．３％ＢＳＡ，并与颗粒细胞单层协同培养。卵母细胞的体外成熟（ＩＶＭ）、体外受精（ＩＶＦ）和早期胚胎体外培养（ＩＶＣ）的方法与Ｌｕ等（１９８７）报道的相同。结果表明：浓度为５０μｇ／Ｌ的处理组分裂率与对照组无差异（８９．０％，９２．４％，Ｐ＞０．０５），而浓度为０，２．５，２５μｇ／Ｌ的处理组分裂率均显著低于对照组（７８．６％，８２．３％，８４．３％，Ｐ＜０．０５），在囊胚率和第７ｄ一级胚胎率上各组均无差异。ＥＧＦ在体     

利用植物体细胞无性系变异技术育成三系杂交籼稻恢复系371

以偏籼材料Ｉｒｉ３７１的幼穗为外植体,经１０Ｇｙ＾６０Ｃｏ－γ射线照射处理后,进行碎段离体培养,获１０２株Ｍ１Ｒ１再生株。Ｍ１Ｒ１植株表现出明显的生理性损伤,Ｍ２Ｒ２代有２７．５％株系出现８种可见性状的稳定变异与分离变异。     

植物对土壤中^137Cs浓集能力的筛选

生长在不同地区甚至同一地区的植物，对＾１３７Ｃｓ浓集能力表现出很大差异。以核电站周围水稻土和北京褐土盆栽１６科１０７种植物进行试验。水稻土栽培植物对１＾１３７Ｃｓ浓集能力强于北京褐土直植物，两者家集系数分别为５．１０－０．０４和１．１５－０．０３，浓集能力产强的植物有蜀葵，南瓜，地肤，番茄，丝瓜，西葫芦，小白菜，蓬子 菜等。     

Mehlich3通用浸提剂的研究

Ｍｅｈｌｉｃｈ３试剂（简称Ｍ３）是适用于多类土壤，多种大量和微量养分元素测试的能浸提剂，但对石灰性土壤尚少与生物相关研究的报道。本文以微钵栽培番茄和甜菜的微量元素吸收量及常用法测试值为参比项，对Ｍ３－ＩＣＰ法用于京，冀石灰土壤作了较详细的相关研究。结果表明，Ｍ３－Ｂ，Ｃｕ，Ｆｅ，Ｋ，Ｍｎ，Ｐ，Ｚｎ值分别与对应的常用法测定值都有极好相关发。Ｍ３－Ｂ，Ｃｕ，Ｍｎ，Ｍｏ，Ｚｎ，Ａｌ，Ｍｇ，Ｎａ值与两种植     

VIGS沉默番茄SlDCL2和SlDCL4破坏Ty-1/Ty-3对TYLCV的抗性

番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)严重威胁茄科蔬菜作物的生产。抗性标记Ty-1和Ty-3是一对等位基因,在番茄抗TYLCV育种中应用较为广泛。为了探究Ty-1/Ty-3抗病毒分子机制,本研究以携带Ty-1/Ty-3抗性标记的番茄Y19为材料,利用病毒诱导基因沉默(VIGS)技术,沉默RNA干扰(RNAi)机制关键基因,即番茄核糖核酸内切酶编码基因2a/b/c/d(SlDCL2)和番茄核糖核酸内切酶编码基因4(SlDCL4),初步分析其在Ty-1/Ty-3抗TYLCV中的功能。PCR与测序结果发现SlDCL2、SlDCL4的VIGS沉默载体pTRV2∶SlDCL2和pTRV2∶SlDCL4构建成功。以沉默番茄八氢番茄红素脱氢酶(SlPDS)基因为标记植株,定量PCR检测SlDCL2、SlDCL4沉默株系中SlDCL2、SlDCL4基因的沉默效率,结果显示SlDCL2、SlDCL4沉默株系中对应基因的表达均小于对照植株的50%,表明SlDCL2、SlDCL4沉默载体确实可以降低对应基因的表达,且不影响其他DCL基因的表达。VIGS沉默植株SlDCL2、SlDCL4基因后接种TYLCV,接种TYLCV 30dpi结果显示,Y9材料表现出明显的TYLCV病毒症状,通过比较植株发病严重度发现,SlDCL2、SlDCL4沉默株系发病严重度分别为1.97、2.35,显著高于空载体注射株系(0.14)和对照株系(0.07)。本研究结果表明RNAi通路关键基因SlDCL2、SlDCL4在Ty-1/Ty-3抗TYLCV中发挥着重要作用,这为利用Ty-1/3抗性标记基因育种奠定了基础。     

鸡传染性法氏囊病毒cDNA文库的建立及核酸探针的制备

利用氯化铯－蔗糖超速离心法纯化了细胞培养的鸡传染性法氏囊病（ＣＪ－８０１株）。经蛋白酶Ｋ消化，酚抽提得到的基因组ＲＮＡ在ＡＭＶ反转录酶催化下合成双链ｃＤＮＡ，通过Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ４００柱层析得到４００ｂｐ以上的大片段。将其重组到载体质粒ｐＵＣ１９的ＳｍａＩ酶切位点上，转化大肠杆菌ＮＭ５２２株。通过α－互补鉴定重组体克隆，从而构建了ＩＢＤＶ的ｃＤＮＡ文库。从文库中筛选出三个重组子作为用于ＩＢＤＶ诊     

水稻耐寒变异体筛选

从４个水稻品种的３６０个愈伤组织株系中筛选出４个耐寒变异株系。叶绿素荧光测定法（ＣＦＡ）的结果表明，这４个耐寒变异株系的再生植株在４℃条件下的光合效率明显高于原品种。由于各原品种的遗传基因型不一样，接种种胚的愈伤组织的诱导率、愈伤组织在低温筛选下的存活率、耐寒愈伤组织株系的分化率均有不同。使用稍加修改的ＢＭ诱导和增殖培养基、分化培养基及生根培养基，用低温、常温交替培养筛选法的愈伤组织株系的存活率、分化率高于持续低温培养筛选法的。     

甘薯羽状斑驳病毒外壳蛋白基因在大肠杆菌中的表达及特异抗血清的制备

根据已报道的甘薯羽状斑驳病毒（ＳＰＦＭＶ）外壳蛋白（ＣＰ）基因的核苷酸序列合成引物,利用ＲＴ－ＰＣＲ的方法获得ＣＰ基因后,再将其克隆到原核表达载体ｐＥＴ３０ａ（＋）中。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明,经ＩＰＴＧ诱导,ＣＰ基因在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ中获得了高效表达。以含表达产物的凝胶为抗原,免疫家兔,制备了ＳＰＦＭＶ外壳蛋白的特异性抗血清。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ和点免疫（Ｄｏｔｂｏ     

植物病毒复制酶基因介导的抗病性研究进展（综述）

用编码病毒复制酶的基因转化植物能赋予植物对病毒的高度抗病性。利用病毒的复制酶基因已经成功地获得对烟草花叶病毒（ＴＭＶ）、黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）、马铃薯Ｘ病毒（ＰＶＸ）、马铃薯Ｙ病毒（ＰＶＹ）等具有高度抗病性的转基因植物。复制酶基因在ＲＮＡ水平或者蛋白质水平上的表达，干扰了复制酶的正常功能，进而有效地抑制了病毒的复制，从而达到抗病的目的。     

三价转基因抗病毒西瓜的培育

利用西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus，WMV)外壳蛋白(CP)基因、西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus，ZYMV)复制酶(NIb)基因和黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus，CMV)复制酶基因构建三价植物表达载体，根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法转化西瓜(Cirrullus lanams)子叶外植体获得再生植株。经PCR和Southern-blot检测，证明目的基因成功地导入西瓜植株，并能够在后代植株中遗传，转化效率约为1．7‰。在温室和大田对T2、T3代转基因株系进行了病毒接种实验和抗病性筛选鉴定，转基因西瓜株系表现出感病、抗病、免疫和症状恢复等不同的类型。其中BHI-7株系的T2代植株对ZYMV和WMV的抗病能力普遍达到中等水平以上，并保持了受体西瓜品系原有的优良农艺性状。     

旱作农田石灰性土壤磷素形态,转化与施肥

本文针对近年来人们十分关注的石灰性土壤磷的固定问题，对石灰性土壤磷素形态转化、有效性及其与施肥的关系进行了研究。结果表明，石灰性土壤中Ｃａ２－Ｐ是最为有效的磷源，其次分别为Ｃａ８－Ｐ、ＡＬ－Ｐ和Ｆｅ－Ｐ，为缓效磷源，Ｃａ１０－Ｐ和闭蓄态磷则为无效态磷；磷肥施入石灰性土壤后，绝大部分转化为缓效态Ｃａ８－Ｐ，同时有一定量的Ａｌ－Ｐ和Ｆｅ－Ｐ生成，而Ｃａ－Ｐ体系中，基本不存在Ｃａ８－Ｐ进一步向无效态Ｃａ     

南瓜属三个种的亲缘关系与品种的分子鉴定研究

用随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术,对南瓜属三个主要栽培种即美洲南瓜、中国南瓜（Ｃ。ｍｏｓｃｈａｔａＤ．）和印度南瓜（Ｃ．ｍａｘｉｍａＤ．）的２３个品种（系）及种间杂交后代进行亲缘关系与品种（系）的分子鉴定研究。从２００个随机引物（１０ｂｐ）筛选出１７个引物,对２３个南瓜品种（系）的染色体组ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增,共产生８０条扩增带,其中７７条在南瓜属三个种间表现出差异,可作为遗传标记（ＲＡＰＤ标     

反向重复RNA介导转基因烟草对花生条纹病毒抗性

构建携带花生条纹病毒（Peanut stripe virus, PStV）外壳蛋白基因（cp）反向重复序列植物表达载体pKcp，转化农杆菌菌株GV3101，叶盘法转化本生烟，卡那霉素筛选得到的转化植株5~6叶期摩擦接种PStV。通过症状观察和ELISA检测，T0代转基因烟草植株87%表现免疫，T1代不同系植株的免疫比例为60~100%，T2代多数系植株免疫比例达到100%。利用PStVcp特异探针对转基因植株T1代进行特异siRNA的Northern blot检测，转基因植株都含有不同量的特异siRNA，而非转基因植株不含特异siRNA；接种前，免疫植株比感病植株体内siRNA含量高；不同转化系免疫植株在接种前、接种15天和50天后的叶片中都检测到特异siRNA，同一植株不同时期，siRNA含量相对稳定；不同转化系植株体内siRNA含量存在差异。本试验成功利用dsRNA获得对PStV具有较高比例抗性的转基因烟草植株。     

抗猪瘟兔化弱毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用猪瘟兔化弱毒（ＳＦＶ—Ｃ）牛睾丸细胞培养上清液，经ＰＥＧ—２００００沉淀和蔗糖密度梯度离心提纯制备ＳＦＶ—Ｃ抗原，腹腔免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，取抗体阳性的免疫小鼠脾细胞，在５０％（Ｗ／Ｖ）ＰＥＧ—４０００作用下，与ＳＰ２／０－Ａｇ１４小鼠骨髓瘤细胞进行融合，产生杂交瘤细胞。用间接ＥＬＩＳＡ法筛选阳性杂交瘤细胞株。通过有限稀释进行３次克隆，获得了２株分泌抗ＳＦＶ—Ｃ的单克隆抗体杂交瘤细胞株，并对其染色体形态和数目进行分析鉴定。     

抑制叶片衰老自动调控元件在油菜中的表达

将抑制衰老的自动调控元件SAG12－ipt-NOS构建成植物表达载体pBSG7。通过根癌农杆菌LBA4404介导法将其转化到甘蓝型油菜（Brassica napus)中，经PCR扩增验证，获得了含抑制衰老自动调节元件的转基因植株，转化频率10％－20％，对转基因植株后代的相关性状进行了考察与分析，结果表明：转基因植株后代下部叶片的叶绿素a,b和类胡萝卜素含量明显高于对照。6个转基因株系单株产量均比对照高，其中有2个株系达显著水平、1个株系达极水平，其中转基因株系65单株产量最高达45．83g，高于对照（33．28g），单株产量增产为32．9％，表明该元件在油菜中的表达能延缓叶片衰老，延长其持绿期，增加光合产物，提高油菜的产量。