抗小鹅瘟病毒中和性单克隆抗体研制及实验防治效果

用淋巴细胞杂交瘤技术研制出１１株抗小鹅瘟病毒（ＧＰＶ）单克隆抗这些单抗仅与ＧＰＶ反应，与其它细小病毒（ＰＣＰＶ、ＦＰＶ、ＰＰＶ）和其它禽病毒（ＮＤＶ，ＩＢＤＶ，ＤＨＶ、ＤＰＶ）均不反应，腹水单抗的ＥＬＩＳＡ效价达１０＾－５－１０＾－７，琼扩沉淀效效价达１：２０－１：５１２，鹅胚中和效价达１：３０－１：１２２，鹅体中和效价为１：５４－－１：９６。ＧＰＳ１和ＧＰＧ５２株单抗对人工感染ＧＰＶ的雏鹅具有良     

抗小鹅瘟病毒中和性单克隆抗体的研制及实验防治效果

用淋巴细胞杂交瘤技术研制出１１株抗小鹅瘟病毒（ＧＰＶ）单克隆抗体。这些单抗仅与ＧＰＶ反应，与其它细小病毒（ＣＰＶ、ＦＰＶ、ＰＰＶ）和禽病毒（ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＤＨＶ、ＤＰＶ）均不反应。腹水单抗的ＥＬＩＳＡ效价达１０－５～１０－７，琼扩沉淀效价达１２０～１５１２，鹅胚中和效价达１３０～１１２２，鹅体中和效价为１５４～１９６。ＧＰＡ１和ＧＰＣ５两株单抗对人工感染ＧＰＶ的雏鹅具有良好防治效果。     

抗小鹅瘟病毒中和性单克隆抗体研制及实验防治效果

用淋巴细胞杂交瘤技术研制出１１株抗小鹅瘟病毒（ＧＰＶ）单克隆抗体。这些单抗仅与ＧＰＶ反应，与其它细小病毒（ＣＰＶ、ＦＰＶ、ＰＰＶ）和其它禽病毒（ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＤＨＶ、ＤＰＶ）均不反应。腹水单抗的ＥＬＩＳＡ效价达１０－５—１０－７，琼扩沉淀效价达１∶２０—１∶５１２，鹅胚中和效价达１∶３０—１∶１２２，鹅体中和效价为１∶５４—１∶９６。ＧＰＡ１和ＧＰＣ５２株单抗对人工感染ＧＰＶ的雏鹅具有良好防治效果。     

分泌抗禽呼肠孤病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立与鉴定

采用腹腔的接种１次脾内注射禽呼肠孤病毒（ＡＲＶ）蛋白免疫小鼠，经３次融合后，共筛选８株分泌抗禽呼肠孤病毒（单克隆抗体杂交瘤细胞株，这８株ＭｃＡｂ均可与ＡＲＶＳ１１３３株，ＦＤＯ株发生反应，而与ＩＢＤＶ，ＭＤＶ，ＥＤＳ－７６病毒不发生反应，经亚类鉴定，ＡＥ７，ＡＦ８，ＢＤ１，ＤＨ１０，ＥＥ５为ＩｇＧ１；ＡＤ６，ＣＧ４为ＩｇＣ２ａ，ＡＧ７为ＩｇＧ２ｂ。腹水效价在１０＾３～１０＾５之间。     

抗鸡传染性法氏囊病病毒型特异性单克隆抗体的临床治疗试验

通过琼扩试验（ＡＧＰ）和病毒中和试验（ＶＮ）检测ＩＢＤＶ单抗Ｍ１２和Ｄ２９１，其中和效价分别为１：１２＾１４×１００和１：２＾１９×１００，琼扩抗体价分别为１：１２８０和１：１６０，常规免疫血清分别为１：２＾１０×１０（ＶＮ）和１：３２（ＡＧＰ）。将Ｍ１２和Ｄ２９１应用于临床治疗，Ｍ１２（２００只／ｍｌ）保护率为９３％；Ｄ２９１（４５０只／ｍｌ）为９４％；血清（４只／ｍｌ）为９２％，对照组成活率为     

分泌抗鸡Ig单抗杂交瘤细胞系的建立与单抗生物学特性的鉴定

从传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞系１Ｄ１０、１Ｇ１中得到了３株能稳定分泌抗鸡免疫球蛋白（Ｉｇ）ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系１Ｂ７、１Ｄ７、３Ｇ６。其抗体类和亚类均属ＩｇＧ２ｂ，腹水的ＥＬＩＳＡ效价≥１∶２５６００，琼扩效价为１∶８～１∶１６。３株ＭｃＡｂ能与鸡血清中的Ｉｇ出现沉淀反应，琼扩在２４ｈ以内出现清晰的沉淀线，而不能和鸭、鸽、鹌鹑等禽类及异种动物血清出现沉淀线。纯化的鸡ＩｇＧ、ＩｇＭ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后，分别用纯化并经辣根过氧化物酶（ＨＰＲ）标记的１Ｂ７、１Ｄ７、３Ｇ６单抗酶结合物进行免疫印迹试验证明，３株单抗识别的均为ＩｇＧ、ＩｇＭ分子的轻链     

牛轮状病毒重组株的血清学和基因型特性

从母牛接种过Ａ组ＢＲＶ株ＮＣＤＶ－Ｌｉｎｃｏｌｎ（Ｐ１：Ｇ６）苗的两个吡邻牛场分离到两株牛轮状病毒（ＢＲＶ），编号为ＮＳ－１和ＮＳ－２，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ试验表明，ＮＳ－１和ＮＳ－２有相的的Ａ组ＲＮＡ电泳模式，而且全部基因片段同源，体外中和试验表明，ＮＳ－１株病毒能被Ｇ６特异性单克隆抗体（ＭｃＡｓ）和抗ＢＲＶＢ６４１株（Ｐ５：Ｇ６）豚鼠高免血清（ＧＰＡＳ）中和，但不被Ｇ１０特异性Ｍ     

鸡腺胃型传染性支气管炎的诊断及病毒分离鉴定

天津市部分鸡场发生一种以病鸡极度消瘦、拉稀和死亡为主要特征的传染病,经鉴定确诊为鸡腺胃型传染性支气管炎（ＧＩＢ）,并分离出ＩＢＶ ＪＢ９７０２株,ＨＡ效价为２＾１２,ＥＩＤ５０为１０＾－６．８１／０．２ｍＬ。病毒干扰试验中,ＩＢＶ ＪＢ９７０２＋ＮＤＶ ＬｓＡｏｔａ接种鸡胚ＨＡ效价为２＾４～６,ＬａＳｏｔａ接种鸡胚ＨＡ效价为２＾１０～１１;用ＩＢＶ ＪＢ９７０２病毒液１：１０稀释后感染经ＩＢＶ Ｈ     

抗伪狂犬病病毒单克隆抗体的特性鉴定

通过ＳＤＳＰＡＧＥ、免疫印迹和相加ＥＬＩＳＡ分析了五株抗伪狂犬病病毒杂交瘤细胞系所分泌的单抗５Ｈ２、２Ｅ６、２Ｇ１１、３Ｄ１０和１Ｂ５（均为ＩｇＧ１）各自所识别的病毒多肽。结果证明：单抗５Ｈ２、２Ｅ６、２Ｇ１１和３Ｄ１０识别伪狂犬病病毒９７ＫＤ多肽，单抗１Ｂ５识别５４ＫＤ多肽。相加ＥＬＩＳＡ证实单抗５Ｈ２、２Ｅ６、２Ｇ１１和３Ｄ１０识别同一多肽的重叠表位或邻近表位。     

分泌抗兔出血症病毒单抗杂交瘤细胞株的建立

以纯化的兔出血症病毒免疫ＢＡＬＢ／Ｃ鼠，应用杂交瘤技术获得了分泌抗ＲＨＤＶ单抗杂交瘤细胞１７株，其中有３株杂交瘤细胞分泌单抗的ＥＬＩＳＡ效价为１：４０９６００，１：４０９６；５株单抗具有血凝抑制活性。兔抗ＲＨＤＶ高兔血清对１７株ＭｃＡｂ的ＥＬＩＳＡ抑株为ＩｇＧ２ｂ。各株ＭｃＡｂ与欧洲棕色兔病病毒无抗原交叉反应，也无沉淀反应特性。     

猪细小病毒生物学特性研究

应用ＰＫ－１５传代细胞复制猪细小病毒（ＰＰＶ）参考株ＮＡＤＬ－２和云南分离株ＫＭ，研究得出细胞培养物半数细胞感染量分别为１０＾－７．９／ｍｌ和１０＾－６．８／ｍｌ经ＣｓＣｌ密度梯度离心，两种病毒颗粒其浮力密度值分别为１．３３ｇ／ｃｍ＾３和１．３９／ｃｍ，电镜观察病毒粒子呈圆形，直径约２０ｎｍ。ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）分析，表明纯化的ＰＰＶ细胞培养毒，主要含两种蛋白成分，分子量     

分泌抗猪伪狂犬病病毒(北京株)单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用纯化的猪伪狂犬病病毒免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,取脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合 ,经间接ＥＬＩＳＡ筛选,３次有限稀释法克隆,获得了２株能稳定分泌抗伪狂犬病病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株１Ｈ７和３Ｂ５,经鉴定两株单抗均为ＩｇＧ１亚类、Ｋａｐｐａ型轻链,杂交瘤细胞的平均染色体数为９７,细胞培养液上清及腹水效价分别为１：１０２４、１：１０２４和１：１０＾８、１：１０＾７;１Ｈ７、３Ｂ５单克隆抗体不与猪繁殖－呼吸综合征病毒、猪温病毒、猪细小病毒发生交叉反应,显示良好的特异性,为进一步应用奠定了基础。     

鸡病毒性关节炎病毒的提纯结构蛋白及其免疫活性分析

采用差速离心和蔗糖递度超速离心法提纯了鸡病毒性关节为病毒（ＡＶＡＶ）９３０７株，并用ＳＤＳ－ＰＡＧ电泳技术分析其结构蛋白，该病毒主要由８条多肽组成（ＶＰ１～ＶＰ８），它们的分子量分别是１４５，１３０，１１５，７２，７０，６５，４２，３９ＫＤ。用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ免疫印迹技术分析这些多肽的免疫活性，与同源病毒株抗血清出现５条可见的反应带，分别是ＶＰ１，ＶＰ２，ＶＰ４，ＶＰ５和ＶＰ７；与异     

分泌抗赭曲霉素A单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用赭曲霉素Ａ（ＯＡ）－ＢＳＡ合成抗原免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，取免疫鼠脾细胞与ｓｐ２／０细胞融合，通过克隆和ＥＬＩＳＡ法筛选，建立三株泌抗ＯＡ单克隆抗体杂交瘤细胞株（３Ｃ１２，１Ｄ１２和２Ｇ７）。用间接ＥＬＩＳＡ法测定，细胞上清液抗体效价为１２８＾×（３Ｃ１２）和６４＾×（１Ｄ１２和２Ｇ７）腹水抗体效价为１０＾－７（３Ｃ１２，１Ｄ１２）和１０＾－６（２Ｇ７）。三株单抗（ＭｃＡｂ）均属ＩｇＧ类，分泌抗体     

抗鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体的制备及其特性的研究

本实验将鸡传染性支气管炎病毒（澳大利亚Ｔ株）进行纯化，制成抗原，应用杂交瘤技术建立了５株分泌抗鸡传染性支气管炎病毒的杂交瘤细胞株，其免疫球蛋白的亚类分别属于ＩｇＧ１、ＩｇＧ３、ＩｇＭ。杂交瘤细胞分泌抗体的能力稳定，长期传代对其抗体分泌能力没有影响。５株单克隆抗体与其它１２株鸡传染性支气管炎病毒标准株之间存在不同程度的交叉反应，但对鸡新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、产蛋下降综合征病毒及禽流感病毒均无交叉反应。用此杂交瘤细胞制备腹水的ＥＬＩＳＡ效价为１０－６～１０－７，抗体对热的稳定性有一定的差别。抗体纯化后，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳表明具有单克隆抗体的特征，经快速蛋白分析鉴定其纯度为８９．４９％。竞争ＥＬＩＳＡ法证明其中４株的单抗与抗原结合位点并不完全相同。采用单抗夹心ＥＬＩＳＡ法，对抗原的检测方法进行了初步探索。     

禽病原性大肠杆菌I型菌毛单克隆抗体的研制及其对分离株的检测

从禽病原性大肠杆菌分离株ＴＫ３（Ｏ１）提取Ｉ型菌毛免疫ＢＡＩＢ／ｃ小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,获得４株能稳定分泌针对Ｉ型菌毛的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为ａＢ６、ｂＧ５、ｃＦ３和ｃＧ３。单克隆阻断甘露糖敏血凝试验,免疫胶体金和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ试验证明,单抗是Ｉ型菌毛特异的。这些单抗培养上清及腹水的ＥＬＩＳＡ效价为分别为１０＾－２～１０＾－３和１０＾－５～１０＾－６;腹水的平     

禽副粘病毒I型结构蛋白分析

鹅副粘病毒ＹＣ９７分离株,鸡源Ｖ９８分离株以及新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４８Ｅ８、ＬａＳＯｔａ和Ｃ３０毒株,鸽副粘病毒ＹＺＰＮＦ２分离株经鸡胚增殖纯化后,进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳,结果显示ＹＧ９７和Ｙ９８２个毒株在５６ｋＤ处比另外４个毒株多出一个条带。用单抗２０１０株进行Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ转印,结果该单抗只对ＹＧ９７和Ｙ９８２个毒株的５６ｋＤ条带反应,证明这２株病毒的结构蛋白与经典的新城疫病毒有     

BWEL-SPF鸡群对鸡传染性法氏囊病强毒的敏感性试验

用三种不同鸡传染性法氏囊病强毒株,对ＢＷＥＬ－ＳＰＦ鸡群１－１０个家系３周龄鸡进行敏感性试验,观察比较鸡群各家系对不同敏感性,测定不同毒株的毒价。广西强毒株（ＩＢＤＶ－ＧＸ株）〈ＬＤ５０为１０＾５．０／０．２ｍｌ;湖南强毒株,ＬＤ５０为１０＾５．２／０．２ｍｌ;吉林强毒株（ＩＢＤＶ－ＪＬ株）,ＬＤ５０为１０＾５．５／０．２ｍｍｌ,以１００ＬＤ５０攻毒剂量,对ＢＷＥＬ－ＳＰＦ鸡１￣１０家系的致死率为     

表达IBDV VP2免疫原的HVT重组体接种雏鸡对IBDV攻击的…

构建了表达了传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＶＰ２的两种火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）重组体ｖＨＶＴ００１和ｖＨＶＴ００２。用其接种１日龄雏鸡以评价它们对ＩＢＤＶ５２／７０株和马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＲＢ１Ｂ株攻击的保护效果。在ＩＢＤＶ攻击中，ｖＨＶＴ００２免疫鸡能预防死亡和法氏囊肉眼病变，具有良好的保护力，以１０＾５ＰＦＵ免疫能达１００％、１０＾４ＰＦＵ免疫能达６０％保护，而用ｖＨＶＴ００１免疫只获得较低     

用放射免疫沉淀试验比较不同IBDV毒株的中和表位

用单克隆抗体（ＭＡｂ）对传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）不同毒株中和表位的相关性进行了分析。ＭＡｂ Ｂ６９能中和同源病毒Ｄ７８株，但不中和ＭＤ及ＩＢＤＶ Ｄｅｌ－Ａ变异株。而ＭＡｂ ３３Ｅ８和Ｒ６３能中和Ｄ７８株和ＭＤ及Ｄｅｌ－Ａ变异株。在体外将Ｄｃｌ－Ａ株ＶＰ２基因和一个１０＾３ｂｐ片段的ｃＤＮＡ克隆进行翻译，得到６种多肽，它们代表了一个全长产物（３５．５ｋｄ）和５份切割片段。用ＭＡｂ Ｂ６９、３