不同类型CpG基序对细粒棘球蚴Eg95抗原的免疫增强作用研究

为探究不同类型CpG基序对细粒棘球蚴（Echinococus granulosus）Eg95抗原的免疫增强作用,将pET-32a-3Eg95重组大肠杆菌,经IPTG诱导表达,亲和层析纯化重组蛋白pET-32a-3Eg95。将重组蛋白分别与常规佐剂Quli-A、pUC18-CpG和CpG ODN混合制备基因工程亚单位疫苗样品,免疫小鼠。通过间接ELISA方法检测抗体水平,通过实时荧光定量PCR方法测定体外刺激试验后细胞因子的相对表达量,检测不同佐剂在体液免疫和细胞免疫方面对Eg95抗原免疫效果的增强作用。结果显示,诱导表达重组蛋白的大小约为56 ku,与理论值相符,用羊细粒棘球蚴阳性血清检测有特异性条带;pUC18-CpG组和CpG ODN组小鼠免疫后14、28、42 d的抗体平均水平（D_{450 nm}）分别为3.10、3.03、3.22和2.98、3.12、3.27,与Quli-A组抗体平均水平相比均差异显著（P<0.05）;CpG ODN组血清中抗体平均水平略高于pUC18-CpG组,但差异不显著（P>0.05）。重组蛋白刺激后pUC18-CpG组与CpG ODN组IFN-β、IFN-γ和TNF-α的相对表达量分别为6.88、2.35、6.28和5.03、2.85、7.07,与Quli-A组相比差异均显著（P<0.05）。因此相对于常规佐剂Quli-A,pUC18-CpG和CpG ODN在体液免疫和细胞免疫方面对Eg95抗原都有显著的免疫增强作用,CpG ODN的免疫增强作用略优于pUC18-CpG,二者均可作为免疫佐剂,增强现有包虫病基因工程疫苗抗原的免疫效果。     

CpG和ICTYOLANETM31佐剂对ASFV-CD2v蛋白免疫效果的影响

探讨CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG oligodeoxynucleotides, CpG ODN)和ICTYOLANE^TM31微乳佐剂对重组表达的ASFV-CD2v蛋白在小鼠体内免疫效果的影响。以杆状病毒表达的CD2v蛋白为抗原，分别配伍CpG寡脱氧核苷酸(CpG oligonucleotide, CPG ODN)和ICTYOLANE^TM31微乳佐剂，皮下免疫BALB/c小鼠。首次免疫后14 d进行二免，采集首免后0、14 d以及二免后7、14及28 d血清，通过间接ELISA检测血清中CD2v抗体水平；采集二免后35 d小鼠分离脾脏淋巴细胞，通过流式细胞术分析IFN-γ水平。结果显示，间接ELISA结果显示在二免后7 d可检测到较高水平的CD2v抗体，ICTYOLANE^TM31佐剂和CPG ODN佐剂组抗体水平明显高于蛋白组。T细胞亚群分析结果显示，在二免后35 d, CpG ODN佐剂组的CD4⁺T淋巴细胞的比例最高，达到81.34%,ICTYOLANE^TM31佐剂组CD8<...     

桦褐孔菌发酵产物增强CpG ODN佐剂效应的研究

为了减少CpG ODN佐剂的用量,降低疫苗的生产成本,在日粮中添加桦褐孔菌发酵产物(Inonotus obliquus fermentation products,IOFP),以确定其对CpG ODN佐剂效应的增强效果。试验设立CpG ODN、IOFP的单独和联合应用组(CV、V+IOFP、CV+IOFP组),以及不添加佐剂的疫苗组(V组)和对照组(PBS组),所有动物于14日龄进行新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)灭活疫苗首免,21 d后加强免疫。分别于首免后0、7、14、21、28、35和42 d分离各组外周血血清,进行NDV HI抗体滴度和中和抗体滴度的测定,同时分离淋巴细胞进行增殖指数(Stimulation index,SI)的测定;随后分离各组首免后0、21和42 d外周血淋巴细胞和血清,对CD4+、CD8+T细胞含量和IL-4、IFN-γ表达量进行测定。结果显示,相比于两者的单独使用,CpG ODN和IOFP的联合应用并未表现出进一步增强机体HI抗体滴度、淋巴细胞增殖指数、CD4+/CD8+T细胞含量和Th1/Th2细胞因子表达量的作用,但对中和抗体滴度的提升作用显著。结果表明,IOFP能够在一定程度上增强CpG ODN的佐剂效应。     

GEL 01佐剂联合猪支原体肺炎活疫苗黏膜接种的效果评估

为评估水性佐剂GEL 01对猪支原体肺炎活疫苗的黏膜接种效果的影响,本研究以小鼠为动物模型,将猪肺炎支原体(168株)活疫苗与水性佐剂GEL 01滴鼻免疫小鼠,于免疫后不同时间点收集血清和支气管肺泡灌洗液,检测其中抗原特异性抗体水平和相关细胞因子的分泌情况,并检测了GEL 01对小鼠淋巴细胞增殖的影响。结果显示Gel 01联合活疫苗黏膜接种后,支气管肺泡灌洗液中抗原特性抗体(IgG、IgG1、IgG2a和sIgA)的水平显著高于单独疫苗组,同时支气管肺泡灌洗液中Th1(IFN-γ)型、Th2(IL-4)型和Th17(IL-17)型细胞因子分泌显著增加;另外,GEL 01联合猪肺炎支原体活疫苗黏膜接种后,促进小鼠淋巴细胞的显著增殖,并同时上调血清中IgG、IgG1、IgG2a抗体水平。以上结果说明GEL 01作为黏膜佐剂配合猪支原体肺炎活疫苗使用时,可全面激活宿主免疫系统,尤其是与猪肺炎支原体感染免疫保护相关的呼吸道局部黏膜免疫和全身循环系统的细胞免疫。     

鹰嘴豆芽素A免疫佐剂作用试验

为了探讨鹰嘴豆芽素A(BioA)的免疫佐剂效果,分别将BioA以及氢氧化铝胶(Alum)作为佐剂和鸡卵清白蛋白(OVA)抗原联合免疫ICR小鼠,二次免疫后2周采血和取脾脏,观察免疫前后血清OVA诱导特异性抗体及亚类含量变化、细胞因子水平,淋巴细胞在抗原刺激下的体外细胞增殖反应以及外周血CD4~+和CD8~+ T细胞表达。结果显示,BioA和抗原混合物免疫小鼠后,未见不良反应;100μg BioA组小鼠血清抗体IgG、IgG1和IgG2a水平显著高于OVA组(P0.05或P0.01);100μg BioA免疫小鼠受刀豆蛋白A(ConA)、脂多糖(LPS)和OVA刺激产生的淋巴细胞体外增殖能力显著高于OVA组(P0.05或P0.01);100μg BioA组小鼠血清细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ和TNF-α浓度显著高于OVA组(P0.05);BioA显著提高CD4~+T细胞数量和提高CD4~+/CD8~+值(P0.01)。表明BioA是一种能同时激活Th1和Th2型免疫反应的免疫佐剂。     

CpG寡核苷酸增强鸡新城疫疫苗免疫效力的研究

为了探讨CpG寡核苷酸（CpG oligonucleotide,CpG ODN）对鸡新城疫疫苗免疫效力的影响,将CpG2007与鸡淋巴细胞共孵育,测定淋巴细胞增殖率,结果发现CpG2007对鸡淋巴细胞具有显著的刺激活性。将CpG2007与不同浓度的新城疫抗原混合,制备灭活疫苗,免疫健康雏鸡。分别于免疫后不同时间采血,测定抗体效价和细胞因子表达量,并进行攻毒保护试验。结果发现,添加CpG ODN佐剂的试验组均比对应相同抗原剂量的免疫对照组的抗体水平高,产生抗体速度快;抗原剂量降低10倍的佐剂试验组与高抗原剂量免疫对照组抗体水平和攻毒保护率均相当,表明CpG ODN能显著增强新城疫疫苗的免疫效力,能促进机体产生更强烈的免疫应答,是有效的疫苗佐剂候选物质。     

猪IFN-γ和CpG基序双因子重组质粒增强亚洲Ⅰ型口蹄疫灭活病毒抗原免疫水平的研究

分析CpG基序与猪IFN-γ基因组合的重组表达质粒对口蹄疫灭活抗原的免疫佐剂效应.以亚洲I型口蹄疫灭活病毒为抗原,与含有猪IFN-γ基因和CpG基序的重组质粒配伍,采用肌肉注射法免疫小鼠,加强免疫后检测口蹄疫特异性抗体和中和性抗体水平、T淋巴细胞增殖反应、体内细胞毒性T细胞杀伤反应以及细胞因子IL-4、IL-6和IFN-γ的分泌水平.发现猪IFN-γ和CpG基序双因子重组质粒相对单一的因子能诱导更强的体液免疫和细胞免疫反应水平,尤其在中和性抗体和抗原特异性CTL反应方面更为明显.猪IFN-γ和CpG基序在诱导小鼠抵抗亚洲I型口蹄疫火活病毒免疫方面具有良好的佐剂效应,其重组质粒可望成为一种有前途的新型免疫佐剂.     

不同途径免疫小鼠重组乳酸乳球菌诱导的黏膜及系统免疫应答分析

重组乳酸乳球菌分别经鼻腔和口腔免疫小鼠后,免疫后的测定时间内鼻腔免疫方法刺激呼吸道和肠道产生s-Ig A水平高于口服免疫方法,且肺泡冲洗液中s-Ig A水平差异极显著(P0.01),肠道黏膜s-Ig A水平无显著差异(P0.05);血清中Ig G抗体水平两种免疫方法均无显著差异(P0.05),但鼻腔免疫组抗体水平在最后一次免疫后7 d达到最高,在整个测定时间内维持在高水平,口服免疫组抗体水平在最后一次免疫后21 d达到最高水平,然后迅速下降;h1型细胞因子IL-2和IFN-γ水平滴鼻免疫组高于口服免疫试验组,差异不显著(P0.05),Th2型细胞因子IL-4水平在各组之间差异不显著(P0.05)。结果表明,重组乳酸乳球菌分别经鼻腔及口腔免疫小鼠后,能诱导机体产生黏膜免疫系统的体液免疫及Th1型细胞免疫反应,且滴鼻免疫方法优于口服免疫方法,为传染病的预防控制提供了新的免疫策略。     

人参皂苷Rg1联合重组大肠杆菌不耐热肠毒素rLTB作为滴鼻免疫佐剂在小鼠体内的作用研究

为探究人参皂苷Rg1和重组大肠杆菌不耐热肠毒素rLTB联合滴鼻免疫小鼠的佐剂效果,本研究以卵清白蛋白(OVA)为模式抗原,分别将生理盐水、OVA、OVA+Rg1、OVA+rLTB、OVA+Rg1-rLTB滴鼻免疫小鼠,共免疫3次。利用血液细胞分析仪分析小鼠外周血中白细胞的变化;荧光定量PCR检测小鼠脾细胞中细胞因子mRNA转录水平;ELISA法检测小鼠血清、胆汁、肺泡支气管和阴道黏液中IgA和IgG抗体水平。结果显示,与OVA单独免疫组相比,Rg1-rLTB能够明显促进小鼠中性粒细胞和中间细胞数量的增加(p<0.05),显著上调Th1、Th2和Th17型细胞因子的转录水平(p<0.05),明显提高血清和局部黏膜中的OVA特异性IgA和IgG抗体水平(p<0.05),并且Rg1-rLTB的复合佐剂效果比单独Rg1或rLTB更具优势。因此,Rg-rLTB可以作为一种新型的滴鼻免疫佐剂,值得进一步的深入研究。     

CpG DNA重组质粒对猪O型口蹄疫病毒抗原的免疫佐剂效应

作者应用含CpG基序序列的重组质粒(即CpG DNA)作为免疫佐剂,评价其对猪O型口蹄疫病毒抗原疫苗的免疫增强效果.结果表明:CpG DNA重组质粒与猪口蹄疫灭活病毒抗原疫苗配伍免疫小鼠,CpG DNA重组质粒对小鼠具有较强的免疫佐剂效应,能促进口蹄疫病毒抗原诱导产生较高水平的特异性抗体,其抗体滴度是空载体疫苗对照的2倍.CpG DNA重组质粒与商品化猪口蹄疫灭活疫苗配伍免疫试验猪,其增强抗原诱导的特异性抗体滴度最高可达标准疫苗的4倍以上,也显著高于空载体疫苗对照;与病毒纯化抗原配伍免疫动物,攻毒后其免疫保护效力的PD50高达13.00,远高于标准疫苗对照(PD50> 4.69).在CpG DNA重组质粒剂量选择试验中,含低剂量的CpG DNA疫苗(50、200μg·头份-1)都比高剂量组(500 μg·头份-1)诱导的抗体滴度高,其中50和200μg·头份-1的CpG DNA剂量,在接种后14～32 d诱导的抗体滴度高达1:1 500,是标准疫苗的4～5倍,而500μg·头份-1剂量诱导的抗体仅是标准疫苗的2倍,说明CpG DNA重组质粒在低剂量时即可发挥强烈的佐剂效应.研究表明CpG DNA对猪O型口蹄疫病毒抗原疫苗有较强的免疫佐剂效应,且使用剂量低,应用前景广阔.