生物素—亲和素法检测雏鸡实验性新城疫的研究

采用生物素—亲和素法检测实验鸡雏35只。结果,接毒12h,在法氏囊滤泡的髓质、胸腺小叶的髓质、脾白髓的脾小结、盲肠扁桃体的淋巴小结及弥散淋巴组织内首先出现核浓缩,胞浆呈棕色的阳性淋巴细胞。接毒1～3d,在骨髓血窦外区、法氏囊滤泡、胸腺小叶、脾白髓、盲肠扁桃体和弥散淋巴组织内出现核浓缩、碎裂,泡浆呈棕色的阳性淋巴细胞、阳性巨噬细胞和阳性网状细胞。接毒4～5d死亡病例的这些免疫器官原有结构破坏,形成蜂窝状空泡结构,空泡含有核碎屑和棕色微粒。肝、肾、肺的微血管充满红细胞凝集,其胞膜显现深棕色微粒。根据这些变化可建立雏鸡新城疫诊断。     

鸡传染性法氏囊病超强毒感染后SPF鸡免疫器官病理学观察

IBDV超强毒株LX株接种2周龄SPF雏鸡后，其致病性不同于经典强毒株CJ801株，它主要引起接种鸡全身性炎症反应，法氏囊、脾脏、盲肠扁桃体等免疫器官中大量异嗜性白细胞、巨噬细胞浸润，淋巴细胞严重坏死崩解，胸腺皮质严重萎缩、坏死，骨髓中造血细胞减少、巨噬细胞和脂肪细胞增生。在接种后14d法氏囊淋巴滤泡严重萎缩、淋巴细胞排空形成囊腺样结构，未见恢复正常，其它免疫器官形态基本恢复正常。电镜观察，接种后2和4d可见胸腺淋巴细胞胞浆浓集、染色质周边化形成新月形，表现细胞凋亡特征；在法氏囊坏死淋巴细胞胞浆中可见60nm大小呈晶格排列或散在的病毒粒子。研究初步探明了鸡传染性法氏囊病病毒超强毒的致病机理。     

鸡肾型传染性支气管炎病毒组织嗜性的研究

本研究用鸡肾型传染性支气管炎病毒 (肾型 IBV) C90 0 1株人工感染 14日龄 SPF鸡 ,于接种后定期采集病鸡的各组织器官制备成石蜡切片 ,用建立的检测石蜡切片中肾型 IB病毒的免疫酶组化染色技术 ,对人工感染肾型传染性支气管炎 (肾型 IB)鸡发病后病毒的组织器官亲嗜性和动态分布规律进行了研究。结果表明 ,肾型 IBV在胞浆内复制 ,主要亲嗜气管黏膜的上皮细胞和固有层腺体细胞、肺各级支气管上皮细胞以及肺房和呼吸性毛细管上皮细胞、气囊上皮细胞、肾和输尿管上皮细胞、消化道上皮和固有层腺体细胞、肝小叶间胆管上皮细胞、胰腺导管上皮细胞和腺泡上皮细胞、法氏囊淋巴滤泡髓质区淋巴细胞和网状细胞、胸腺小叶髓质区淋巴细胞和网状细胞、脾小体淋巴细胞、盲肠扁桃体弥散性淋巴组织的淋巴细胞以及心肌细胞 ,病毒出现的先后顺序为气管、肺脏、肾脏、输尿管 ,消化道、法氏囊、肝脏、胰脏、胸腺和气囊 ,盲肠扁桃体 ,脾脏 ,心肌。病毒在肾脏和输尿管持续 2 0天 ,气管为 13天 ,消化道和法氏囊为 11天 ,肝脏、胰脏和肺为 10天 ,胸腺为 6天 ,气囊为 5天 ,盲肠扁桃体、脾脏、心肌呈一过性感染     

雏鸡感染IBDV后法氏囊显微和超微结构的观察

运用光镜、电镜技术，观察了雏鸡实验感染传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）后，其法氏囊显微和超微结构的动态变化。光镜观察表明，在感染早期，淋巴滤泡髓质部的淋巴细胞发生坏死，间质轻度水肿。感染后４ｄ，淋巴滤泡皮质内的毛细血管呈一典型的出血带环绕髓质，髓质部的淋巴细胞多已坏死、崩解。继之，整个淋巴滤泡呈网络状或囊状空泡。感染６ｄ以后，固有膜内的网状细胞和毛细血管大量增生，新的淋巴滤泡形成。电镜观察证明，在感染早期，淋巴细胞质内的内质网与核膜扩张，线粒体嵴紊乱或空泡化。继之，淋巴细胞核液化，细胞坏死、崩解。巨噬细胞和多核巨细胞大量出现，其胞浆内含有大量吞噬体和吞噬泡。     

鸡贫轿病雏鸡ND免疫后免疫器官抗体生成细胞动态变化

对感染染鸡传染性贫血病毒（ＣＩＡＶ）雏鸡新城疫（ＮＤ）免疫及其强毒攻击后，其免疫器官－－法氏囊、脾脏和胸腺和ＩｇＧ、ＩｇＭ和ＩｇＡ抗体生成细胞的动态变化进行了检测。结果发现，感染雏鸡ＩｇＧ抗体生成细胞于免疫后７～２８ｄ、在法氏囊和胸腺髓质及脾脏红髓和白髓区明显低于未感染的免疫对照雏鸡；ＩｇＭ生成细胞分别于免疫后７～２８ｄ、７ｄ或１４ｄ明显降低；而ＬｇＡ生成细胞于免疫后２８ｄ，公在法氏囊髓质区明显减     

传染性法氏囊病病毒变异E株对法氏囊生长发育的影响

本试验全面而系统地观察了传染性法氏囊病病毒变异Ｅ株,通过泄殖腔、鼻腔和尿囊腔接种雏鸡和鸡胚后不同时间法氏囊的组织形态学变化。结果表明,病毒感染后１２～４８小时,雏鸡法囊粘膜上皮细胞肿胀、坏死脱落,淋巴滤泡髓质部及皮质部淋巴细胞不同程度变性、坏死、排空,形成腺管样结构或囊状空泡,接毒后７２～１４４小时,法氏囊淋巴滤泡淋巴细胞坏死排空,淋巴滤泡萎缩,网状结缔组织大量增生,而胚胎发育时期,法氏囊粘膜上皮肿胀变性,法氏囊淋巴滤泡形成延迟或不完整,淋巴滤泡内淋巴细胞缺乏或空虚。探讨了传染性法氏囊病病毒对胚胎发育时期的雏鸡发育时期法氏囊生长发育的影响。     

传染性法氏囊病病毒对法氏囊生长发育的影响

本试验运用传染性法氏囊病病毒变异 Ｅ 株，通过泄殖腔和鼻腔接种 １，８，１５，３０ 日龄雏鸡，通过尿囊腔接种８， １３，１８ 日龄鸡胚，全面而系统地观察了接毒后不同时间法氏囊的组织形态学变化，探讨了传染性法氏囊病病毒对胚胎发育时期和雏鸡发育时期法氏囊生长发育的影响。结果表明， Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ 感染后１２～４８ ｈ，雏鸡法氏囊粘膜上皮细胞肿胀，坏死脱落，淋巴滤泡髓质部及皮质部淋巴细胞不同程度变性、坏死、排空，形成腺管样结构或囊状空泡： 接毒后７２～１４４ ｈ，法氏囊淋巴滤泡淋巴细胞坏死排空，淋巴滤泡萎缩，网状结缔组织大量增生，而胚胎发育时期，法氏囊粘膜上皮肿胀变性，法氏囊淋巴滤泡形成延迟或不完整，淋巴滤泡内淋巴细胞缺乏或空虚，说明传染性法氏囊病病毒变异 Ｅ 株对法氏囊造成严重的组织学危害，从而导致法氏囊生长发育阻滞，组织学形态和结构严重受损。     

免疫器官中肾型鸡传染性支气管炎病毒的定位和动态分布

以鼠抗鸡肾型传染性支气管炎病毒（肾型IBV）的高免血清为一抗，辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗鼠IgG为二抗，建立了检测石蜡切片肾型IBV抗原的间接酶标抗体染色技术。应用该技术对人工感染肾型IBV C9001株鸡免疫器官中的病毒进行了检测，结果胸腺和法氏囊是病毒主要侵害的免疫器官，脾脏，盲肠扁桃体仅呈一过性感染，哈氏腺未检测到，法氏囊从感染后2－12天，胸腺从感染后3－8天均检测到病毒抗原，阳性染色主要集中于法氏囊淋巴滤泡髓质区和胸腺小叶髓质区淋巴细胞和网状细胞胞浆内。     

鸡贫血病雏鸡ND免疫后免疫器官抗体生成细胞动态变化

对感染鸡传染性贫血病毒（ＣＩＡＶ）雏鸡新城疫（ＮＤ）免疫及其强毒攻击后，其免疫器官ｋｋ法氏囊、脾脏和胸腺的ＩｇＧ、ＩｇＭ和ＩｇＡ抗体生成细胞的动态变化进行了检测。结果发现，感染雏鸡ＩｇＧ抗体生成细胞于免疫后７～２８ｄ，在法氏囊和胸腺髓质及脾脏红髓和白髓区明显低于未感染的免疫对照雏鸡；ＩｇＭ生成细胞分别于免疫后７～２８ｄ、７ｄ或１４ｄ明显降低；而ＩｇＡ生成细胞于免疫后２８ｄ，仅在法氏囊髓质区明显减少，表明ＣＩＡＶ感染雏鸡免疫器官对ＮＤ免疫的体液免疫应答降低。ＮＤ强毒攻击后，ＣＩＡＶ感染ＮＤ免疫雏鸡法氏囊、脾脏、胸腺的三种抗体生成细胞均程度不同地低于对照雏鸡，其中ＩｇＧ生成细胞减少最为明显。ＣＩＡＶ感染雏鸡免疫器官抗体生成细胞减少与免疫保护率降低密切相关     

鸡淋巴细胞性自血病病毒和群特异性抗原（P27）在体内的分布与消长

应用生物素－亲和素法和电镜技术对接种鸡淋巴细胞性白血病病毒的实验鸡作了研究。结果：接种后１５ｄ的两只发病鸡雏骨髓中含有大量病毒抗原和群特异性抗原，ＢＡ阳性细胞主要是成髓细胞。接种后１个月一只实验鸡骨髓中形成成髓细胞性肿瘤结节，结节中成髓细胞ＢＡ弱阳性。接种两个月以后骨髓结构正常，各细胞群ＢＡ弱阳性。接种后１５ｄ法氏囊中即有病毒抗原和群特异性抗原，但主要是成髓细胞阳性。接种后２－５个月，法氏囊淋巴滤泡中一直存有病毒抗原和群特异性抗原，但以接毒后３－４个月时含量最高。接毒后６个月，法氏囊萎缩，结缔组织和成淋巴细胞ＢＡ弱阳性。电镜观察，在接毒后１－４个月的实验鸡法氏囊滤泡髓质巨噬细胞胞浆内和胞膜表面、网状细胞胞浆内和淋巴细胞之间观察到大量ＬＬ病毒粒子。根据ＢＡ法染色在法氏囊检出ＢＡ阳性细胞，或电镜在法氏囊检出大量ＬＬ病毒粒子。均可与ＭＤ相区别而建立ＬＬ病理学诊断。     

鸡传染性法氏囊病的病理学研究

人工接种２８日龄非免疫鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）后,对感染鸡的法氏囊、胸腺、脾、盲肠扁桃体、哈德氏腺、肝、肾进行病理组织学检查。感染后４８ｈ,法氏囊淋巴组织最早出现坏死且长久存在。其他淋巴器官的病变出现较迟,程度轻微且恢复较快。ＩＢＤＶ单抗免疫荧光检测,法氏囊及其他淋巴器官中均检测到病毒,接种后１２ｈ法氏囊中即检出病毒,持续时间也最长（攻毒后１２ｄ）,其次是盲肠扁桃体（攻毒后８ｄ）。攻毒１３ｄ以后,上述器官均未检测到病毒。法氏囊粘膜上皮的扫描电镜观察,攻毒后２ｄ,上皮细胞肿胀,微绒毛减少或消失。攻毒后３ｄ,局部上皮细胞坏死、脱落,并向整个粘膜层扩展,攻毒后１０ｄ,上皮层基本修复。     

感染CIAV雏鸡免疫器官对ND疫苗的细胞免疫应答

对１日龄感染ＣＩＡＶ雏鸡接种ＮＤ疫苗后，其免疫器官组织Ｔ细胞数量的动态变化进行研究．结果，感染ＣＩＡＶ雏鸡ＮＤ疫苗免疫局，其胸腺和脾脏以及盲肠扁桃体和哈德尔腺的Ｔ细胞数量，于接种ＮＤ疫苗后较未感染ＣＩＡＶ免疫对照雏鸡明显减少，表明感染雏鸡的中枢和外周免疫器官及局部免疫组织对ＮＤ疫苗的细胞免疫应答功能明显降低．ＮＤ强毒攻击后，感染免疫鸡的免疫保护率明显低于未感染免疫对照鸡．     

传染性法氏囊病病毒超强毒感染SPF鸡免疫器官中CD4+和CD8+T淋巴细胞动态分布

利用免疫组织化学染色对传染性法氏囊病病毒（IBDV）超强毒LX株感染SPF鸡免疫器官中CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞的动态分布进行了研究。超强毒LX株接种2周龄SPF雏鸡，在其法氏囊、脾脏、胸腺、盲肠扁桃体、骨髓和哈氏腺中均可检出IBDV抗原的存在和CD4^ 与CD8^ T淋巴细胞的数量改变。在法氏囊中，CD4^ 淋巴细胞主要存在于淋巴滤泡间隙和滤泡皮质，而CD8^ T淋巴细胞则丰在于整个淋巴滤泡和滤泡间隙，并且CD8^ T淋巴细胞数量明显多于CD4^ T淋巴细胞，在接种后14d仍未见CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞数量减少。脾脏中CD4^ T淋巴细胞主要存在于外周小动脉淋巴鞘或散在，而CD8^ T淋巴细胞则多存在于外周小动脉淋巴鞘和红髓。接种后胸腺中CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞在皮质中减少，但在髓质增多，尤其是CD8^ T淋巴细胞数明显多于CD4^＋T淋巴细胞。盲肠扁桃体中CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞主要存在于发生中心，尤其是CD8^ T淋巴细胞数比CD4^ T淋巴细胞明显多。骨髓和哈氏腺中也可见CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞，而且CD8^ T淋巴细胞更多。在这些淋巴器官中，病毒损伤部位出现CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞的迁入聚集，表明T淋巴细胞可能参与IBDV超强毒的免疫致病过程。     

葡萄球菌性关节炎肉鸡免疫器官的病理学变化

利用鸡源致病性金黄色葡萄球菌复制鸡葡萄球菌性关节炎的病理模型,研究免疫器官的主要病理学变化及其内CD4 和CD8 T淋巴细胞的动态变化。结果表明:鸡接种细菌后呈典型的关节炎症状。脾脏肿大,表面呈网格状,法氏囊黏膜增厚,盲肠扁桃体和胸腺上散在出血点。光镜下脾脏淋巴小结早期数目增多,后期呈灶状坏死,法氏囊水肿,淋巴小结坏死液化。CD4 和CD8 T淋巴细胞的变化为:脾脏在接种后7 d淋巴小结内的CD4 和CD8 T淋巴细胞已明显多于对照组,与对照组比差异极显著(P<0.01);接种后7 d,法氏囊的淋巴滤泡周围的间隙中检出较多的阳性细胞,在接种后14 d CD4 T淋巴细胞达到高峰,随后下降,与对照组相比在接种后7 d差异显著(P<0.05),在接种后14 d差异极显著(P<0.01);而CD8 T淋巴细胞在接种后7 d就达到高峰,与对照组相比差异极显著(P<0.01);盲肠扁桃体的CD8 T淋巴细胞在接种后7 d上升,21 d达到最高值;胸腺组织中阳性细胞数对照组和试验组都很少,试验组的阳性细胞数的变化没有明显的规律。鸡接种金黄色葡萄球菌后免疫器官内CD4 和CD8 T淋巴细胞数目增多,表明T淋巴细胞参与了金黄色葡萄球菌引起鸡的关节炎的发生发展过程。     

Interleukin 4 increases CCR9 expression and homing of lymphocytes to gut-associated lymphoid tissue in chickens

The effects of in vitro and in vivo IL-4 supplementation on thymocyte and splenocyte CCR9 mRNA amount and migration were studied. Thymocytes, splenocytes, splenocytes+thymocytes (2:1), and splenocytes+bursocyte cells (2:1) were supplemented with either 0 or 5 ng/ml IL-4 for 5d. CCR9 mRNA was undetectable in all experimental groups supplemented with 0 ng/ml IL-4. IL-4 treatment (5 ng/ml) upregulated (P=0.01) CCR9 mRNA only in the splenocyte+thymocyte cell culture. IL-4-mediated CCR9 mRNA induction in the splenocyte+thymocyte cell culture was dependent on the in vitro dose of IL-4 supplementation. IL-4-treated splenocyte+thymocyte cells when injected in vivo preferentially migrated to cecal tonsils. In vivo supplementation of IL-4 was achieved through in ovo injection of recombinant chicken IL-4 plasmid. Cecal tonsils in chicks hatched from IL-4-plasmid-injected eggs weighed more, had a higher amount of CCR9 mRNA, and had a higher percentage of CD8(+) cells than cecal tonsils from chicks hatched from PBS-injected eggs. It could be concluded that IL-4 induces CCR9 mRNA in thymocytes and splenocytes and directs the migration of cells to gut-associated lymphoid tissue.     

猪呼吸道淋巴组织发育的亚显微结构变化

应用组织学和电镜技术研究猪呼吸道发育过程中淋巴组织的变化。结果表明：扁桃体和咽部是呼吸道进入机体的第一个淋巴组织集中的部位，弥散淋巴组织在出生时就存在，淋巴小结不明显；20日龄时扁桃体中淋巴组织增生，淋巴小结清晰可见；120日龄淋巴小结数量增加，紧靠鳞状上皮密集排列，淋巴小结发育很好，并出现生发中心。扁桃体复层鳞状上皮中含有大量的上皮内淋巴细胞。气管叉是呼吸道进入机体的第二个淋巴组织集中的部位，出生时气管叉外膜中淋巴组织直接与气管支气管淋巴结相连，淋巴组织明显可见。20日龄时气管叉外膜中淋巴组织已分开，形成气管叉外膜密集的淋巴组织和气管支气管淋巴结两个部分。120日龄时气管叉处淋巴组织特别发达，黏膜上皮中上皮内淋巴细胞数量也显著增加。肺内气管和细支气管固有膜中均有较多的淋巴细胞，其中浆细胞数量增加，上皮中仍存在少量的上皮内淋巴细胞。本试验结果提示猪呼吸道是黏膜免疫较理想的诱导位点和效应位点，新生仔猪通过鼻腔免疫可提高呼吸道局部黏膜免疫力。     

Polyclonal activation of B cells occurs in lymphoid organs from porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV)-infected pigs

Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) induces a persistent viral infection associated with an inefficient humoral immune response. A study of lymphoid B cells and specific humoral immune response was performed in blood and several lymphoid organs collected from PRRSV experimentally-infected pigs. Groups of specific pathogen-free (SPF) pigs were infected with the LHVA-93-3 isolate of PRRSV, and blood, tonsils, spleen and mediastinal lymph nodes (MLN) were collected at various times postinfection (p.i.) (3-60 days). Lymphoid cells were isolated, immunolabeled for cytofluorometric determination of B cell percentages, used for counting specific anti-PRRSV antibody secreting B cells by an ELISPOT assay, or cultured for metabolic activity. The presence of anti-PRRSV antibodies in the serum of infected pigs was determined using a commercial ELISA assay. Virus detection was performed in all tissues, including lungs, by virus isolation and RT-PCR. The results show that percentages of B cells increased in tonsils as soon as 3 days until 17 days p.i. in PRRSV-infected pigs while they increased in spleen at 3 days p.i. only, due to an increase of larger Ig(high)-producing B cells. Metabolic activity of lymphoid cells from blood and spleen increased at 3 days p.i. only while lymphoid cells from tonsils and MLN transiently decreased at that time and increased thereafter up to 60 days p.i. Anti-PRRSV antibody-secreting B cells occurred in tonsils after 10 days p.i. and strongly increased up to 60 days p.i. However, specific anti-PRRSV-secreting B cells were detected in blood and spleen after 17 days p.i and in MLN only after 45 days p.i. Specific antibodies were detectable in serum at 10 days p.i., reached the maximum level at 45 days and remained high up to 60 days p.i. Infectious virus was detected in lungs and MLN as soon as 3 days p.i., and remained detectable up to 45 days p.i. in tonsils of one pig while viral RNA was detected in most organs up to 60 days p.i. In vitro experiments revealed that inactivated virus induced a stimulation of lymphoid cells isolated from PRRSV-infected pigs while it was cytotoxic for lymphoid cells from control pigs. Taken together, these results indicate that viral infection induced simultaneously a polyclonal activation of B cells, mainly in tonsils, and an exaggerated and prolonged specific humoral immune response due to persistent viral infection in lymphoid organs.