除去精浆、添加维生素E及水浴平衡对莎能奶山羊精液冷冻效果的影响

主要探讨精液离心、添加VE及平衡方法对山羊细管冻精冷冻-解冻后活力、顶体完整率等的影响,为提高山羊精液冷冻保存效果提供依据.试验1:将鲜精稀释后分为3组,第1组为稀释精液1 000 r/min离心6 min,去掉一半的上清液;第2组用相同的方法反复离心3次,完全去掉精浆;第3组不离心,做为对照.试验2:在稀释液中添加15 g/L VE,以不添加组作为对照.试验3:采用纱布包裹和水浴平衡两种方法.试验结果表明,离心去掉部分精浆组和离心去精浆组精子冷冻-解冻后的活力比不离心组高,差异显著(P＜0.05).精子顶体完整率和畸形率有所下降,但与对照组相比较差异不显著(P＞0.05).离心去掉部分精浆组和离心完全去精浆组相比,精子冷冻一解冻后的活力、顶体完整率和畸形率差异不显著(P＞0.05).冷冻稀释液中添加VE组的顶体完整率显著提高(P＜0.05),畸形率变化与对照组无差异(P＞0.05),精子活力提高效果也不明显(P＞0.05).精液冷冻前平衡方法以水浴法为好,与纱布包裹平衡组相比,水浴平衡组的活力和顶体完整率高(P＜0.05),精子畸形率较低(P＜0.05).可见,精液离心后去掉适量精浆可显著提高冷冻后精子的活力;添加VE可显著提高精液冷冻后精子的顶体完整率;与纱布包裹平衡法相比,水浴平衡法可显著提高精液冷冻后精子的品质.     

猪精液冷冻与常温保存技术的研究

为研究冷冻保存和常温((17±0.5)℃)保存后猪精子活率、活力和顶体完整率,比较了猪精液冷冻稀释液中2种甘油含量细管法的快速冷冻效果,以及不同解冻温度对冷冻精液的影响,采用细胞计数法、FDA-PI双重染色法与Giemsa染色方法检测精子的活率、活力和顶体完整率。结果显示:3%(体积分数,下同)甘油冷冻解冻后精液的活率、活力(38.54%、52.24%)显著(P<0.05)高于2%甘油组(15.63%、28.22%),但3%甘油组顶体完整率(11.55%)显著(P<0.05)低于2%甘油组(21.71%)。38℃水浴解冻后的精子在39℃培养箱中4 h内活率高于0.3,而50℃水浴解冻后1 h后的活率低于0.3。精液稀释液Anderohep和BTS在常温((17±0.5)℃)保存新鲜猪精子的活率与顶体完整率上效果相似,保存3 d内精子活率达0.6以上,保存6 d内精子活率为0.3以上。结果表明,使用3%甘油冷冻保存及2种常温保存稀释液均可以较好地保存精子。     

胆固醇和磷脂酰胆碱对山羊精液冷冻保存效果的影响

为探究胆固醇(CHL)和磷脂酰胆碱(PC)对山羊精液冷冻保存效果,分别在精液冷冻稀释液中添加不同浓度的CHL(1.0、2.5、5.0、10.0 g/L)、PC(10、15、20、25 g/L),以15%卵黄(EY)作为对照。通过测定冷冻解冻后精子的活力、顶体完整率、精子运动参数、质膜完整率、精子磷脂和胆固醇含量来判断保存效果。结果表明,精液冷冻显著降低山羊精子磷脂和胆固醇含量,分别添加5 g/L CHL和10 g/L PC,精子冷冻解冻后,在活力、顶体完整率、质膜完整率和运动参数与对照组差异不显著。进一步将CHL和PC混合添加发现,4 g/L CHL+16 g/L PC解冻后精子活力、曲线速率、平均路径速度和顶体完整率均显著高于对照组(P<0.05),且可以改善冷冻后精子磷脂和胆固醇含量。运用4 g/L CHL+16 g/L PC冷冻保存精子进行山羊人工授精,其受胎率和产仔率与EY组差异不显著,冷冻稀释液中添加4 g/L CHL+16 g/L PC显著提高山羊精液冷冻保存效果。     

稀释液中添加L-半胱氨酸对鸡精液室温保存的影响

利用安卡红种公鸡新鲜精液,在A、B等2种稀释液稀释后分别添加不同浓度的L-半胱氨酸,测定精子活率和精子畸形率,比较不同浓度的半胱氨酸对鸡精液在常温保存下的效果。结果表明,在常温下保存,在A稀释液中添加1.0 mmol/L L-半胱氨酸的鸡精液的各项指标值均比不添加和添加5.0 mmol/L L-半胱氨酸的好(P0.05),且保存效果较为理想。在B稀释液中添加1.0、5.0 mmol/L L-半胱氨酸的精子有效存活时间极显著高于对照组(P0.01);随着L-半胱氨酸添加量的增多,生存指数值变大,且以添加5.0mmol/L L-半胱氨酸最高,但与添加1.0 mmol/L L-半胱氨酸间差异不显著(P0.05)。但是,2种稀释液中是否添加L-半胱氨酸对精子畸形率影响不大(P0.05)。     

不同稀释液对猪精液常温保存效果的影响

为研究适宜于大白猪精液常温保存的稀释液配方,以精子活率、质膜完整率、顶体完整率和呼吸强度为测定指标,分析4种不同配方的稀释液常温下保存大白猪精液的效果。结果表明,经48h保存后,稀释液Ⅰ和Ⅱ保存的精子活率、质膜完整性和顶体完整率分别达到54%、58%和88%,显著优于其他组(P<0.05)。经稀释液Ⅰ和Ⅱ保存的精子的呼吸强度分别为7.25min和8.25min,显著优于稀释液Ⅲ、Ⅳ和对照组(P<0.05),但稀释液Ⅰ和Ⅱ差异不显著(P>0.05)。因此,稀释液Ⅰ和Ⅱ是大白猪精液常温保存的适宜稀释液。     

茶多酚对猪精液低温保存的影响

为了寻找一种可较好保护精子的低温保护剂,改善猪精液低温保存方法,通过在改进的猪精液低温稀释液中添加0、0.50、1.00、1.50、2.00 mg/m L茶多酚,对比7 d内4℃下低温保存猪精子的活率、活力、畸形率、质膜和顶体完整性等参数,探讨茶多酚在猪精液低温保存中应用的效果。结果表明,在猪精液低温保存后7 d,仅0.50、1.00 mg/m L组5个质量指标均显著好于对照组(P0.05),其中1.00 mg/m L组效果最好。总之,在本试验条件下,适宜浓度的茶多酚可以明显改善4℃低温条件下猪精液的保存效果,其中最佳添加浓度是1.00 mg/m L。     

夏季山羊精液不同保存方法研究

假阴道法采集重庆市大足黑山羊精液,分析鲜精精液品质,采取随机单位组两因素三水平无重复观察值方差分析试验设计,应用常温保存(20℃)、低温冷藏(4℃)和精液冷冻3种方式进行精液保存效果及对精液品质影响的研究.两因素分别为稀释液和精子密度,每个因素选择3个水平,以生存指数作为评价精液保存效果的指标.新鲜精液采集后检测发现品质良好,活力均值为0.87,畸形率为9.45%,符合GB20557-2006做山羊冻精标准.与去年同期比较,发现高温可造成精液品质下降.稀释液对3种保存效果影响差异均不显著(p0.05),精子密度对常温保存和低温冷藏影响差异极显著(p0.01),对冷冻影响差异不显著(p0.05).不同处理均造成精液品质下降,其中冷冻造成影响极显著.常温和冷藏下以稀释液A1、精子密度1×109个/mL保存较好,冷冻保存以稀释液A2、精子密度2×108个/mL较好.     

大豆卵磷脂替代卵黄的稀释液低温保存绵羊精液效果

为研究大豆卵磷脂稀释液对绵羊精液低温保存效果,用5个浓度的大豆卵磷脂(A1,1. 25%; A2,2. 5%; A3,5%;A4,7. 5%; A5,10%)替代TRIS专利稀释液(C组)中的卵黄进行绵羊精液低温保存试验,在保存第0 d、1 d、3 d、6 d、9 d、12 d对精子活率和顶体完整率进行检测,大豆卵磷脂稀释液效果最优组和C组的保存第9 d的精液进行人工授精试验。结果表明:A1组精液保存效果自保存第6 d起显著高于其他添加组(P 0. 05),且在保存第9 d精子活率为0. 53±0. 06,符合鲜精输精国家标准; A1组与C组在各时间点精子活率、顶体完整率差异均不显著(P 0. 05),且A1组与C组精子在第9 d活率都高于0. 5,顶体完整率高于60%; A1组与C组的受胎率64. 3%(72/112)、65. 6%(80/122)差异不显著(P 0. 05)。证明添加1. 25%浓度大豆卵磷脂的稀释液能够进行绵羊精液低温长时间有效保存。     

夏季山羊精液不同保存方法研究

假阴道法采集重庆市大足黑山羊精液,分析鲜精精液品质,采取随机单位组两因素三水平无重复观察值方差分析试验设计,应用常温保存(20℃)、低温冷藏(4℃)和精波冷冻3种方式进行精液保存效果及对精液品质影响的研究.两因素分别为稀释液和精子密度,每个因素选择3个水平,以生存指数作为评价精液保存效果的指标.新鲜精液采集后检测发现品质良好,活力均值为0.87,畸形率为9.45%,符合GB20557-2006做山羊冻精标准.与去年同期比较,发现高温可造成精液品质下降.稀释液对3种保存效果影响差异均不显著(p>0.05),精子密度对常温保存和低温冷藏影响差异极显著(p<0.01),对冷冻影响差异不显著(p>0.05).不同处理均造成精液品质下降,其中冷冻造成影响极显著.常温和冷藏下以稀释液At、精子密度1×109个/mL保存较好,冷冻保存以稀释液A2、精子密度2×108个/mL较好.     

添加V_(B_(12))、V_E、V_C对无角道塞特绵羊精液冷冻效果的影响

探讨在无角道塞特绵羊冷冻精液稀释液中添加VB12、VE、VC对精子冷冻品质的影响。在无角道塞特绵羊冷冻精液稀释液中添加不同质量浓度的VB12、VE、VC制作细管冻精,解冻后观察精子的成活率和顶体完整率等指标。结果显示,VB12添加0.003 g/L时能够显著提高解冻后的精子活率(P0.05)和精子顶体完整率(P0.05);VE添加2.5 g/L时,能够极显著提高解冻后的精子活率(P0.01)和顶体完整率(P0.01);VC的添加4.4 g/L时能够显著提高解冻后的精子活率(P0.05),但对冷冻后精子的顶体完整率无影响。在稀释液中添加VB12、VE和VC能使解冻后精子品质得到提高。VE添加后能够极显著提高冷冻精子的顶体完整率,应该优先考虑添加。     

新疆驴精液浓缩冷冻的研究

试验以假阴道采集新疆驴精液,并用5种不同稀释保护液稀释冷冻后,选取其中较为理想的稀释液作为对照组,再通过2种不同的离心方法进行离心浓缩试验,并对解冻后精液的品质进行检测。结果表明:(1)5号稀释液冷冻-解冻精液后,精液活力、顶体完整率要显著高于其他4种稀释液(P<0.05);(2)先添加生理盐水再离心浓缩(离心2组)冻后精液的活力要显著高于对照组和离心1组(P<0.05),在顶体完整率方面,对照组要显著高于离心组(P<0.05),而对照组的尾部畸形率要显著低于离心组(P<0.05)。     

牛精液低温（0℃）保存的效果研究

为研究一种Tris-卵黄稀释液0℃（冰水混合物中）保存牛精液的效果,该试验选用5头西门塔尔牛,将每头牛采集的精液等量分装,按1∶3的比例分别与试验组稀释液（Tris-卵黄专利稀释液）、对照组稀释液（基础稀释液）等温稀释处理,在0℃（冰水混合物中）状态下保存。检测保存0、 1、 2、 4、 6、 8、 10、 12 d的精子活率、顶体完整率及质膜完整性,并用保存5 d的精液进行人工授精,统计受胎率。结果表明：保存4～10 d, A组稀释液保存的精子活率显著高于B组（P<0.05）;保存10 d时,A组精子活率大于50%; 0℃保存牛精子顶体完整率、质膜完整性随保存时间的延长而逐渐降低,但不同处理间无显著差异（P>0.05）。A组稀释液保存牛精子的受胎率显著高于B组。可见,用Tris-卵黄稀释液0℃保存牛精液,保存效果较好,受胎率较高。     

解冻温度对大额牛(Bos frontalis)精子活率及形态的影响

分别用32、35、38、41和44 ℃水浴解冻大额牛细管冻精,解冻后在常温(平均温度18.06±1.50 ℃,相对湿度46.64±4.52 %)下保存40 h,分别在0、6、12、18、24、30、36、38、39和40 h取样在显微镜下观察记录精子活率和活力;并在解冻后0、6、12、18和24 h用姬姆萨染色,在显微镜下观察记录精子形态,统计分析5个时段的精子畸形率.研究结果:①35 ℃解冻的精子复苏率为68.80 %,极显著高于44 ℃解冻的54.2 %(P<0.01),但与其它3个解冻温度比较差异不显著(P>0.05).②以38～44 ℃解冻的精子存活时间在38～39 h之间,以32 ℃解冻的存活时间最短,仅为36 h.④解冻后0 h的精子活率在42.50 %～50.00 %之间,不同解冻温度间差异不显著(P>0.05);保存6、12和18 h时,分别以35、38和41 ℃显著高于44 ℃(P<0.05);保存24 h后,各解冻温度间差异不显著P>0.05).④解冻后0 h的精子活力以35 ℃极显著高于44 ℃(P<0.01);保存6 h以32～41 ℃显著高于44 ℃(P<0.05);保存18 h,以32和41 ℃高于44 ℃(P<0.05);保存24 h后各解冻温度间差异不显著(P>0.05).⑤用41和44 ℃解冻的总精子畸形率极显著高于38 ℃(P<0.01),显著高于35 ℃(P<0.05),32、35和38 ℃间及32、41和44 ℃间差异不显著(P>0.05),用35和38 ℃解冻对精子形态损伤较小.研究表明:解冻温度越高大额牛冻精的精子活率和活力降低速度越快,精子畸形率也高,且解冻温度对精子头部和尾部形态的影响最大;大额牛细管冻精宜用38±3 ℃水浴10s解冻,解冻后在18 ℃以下常温下保存6h对其精子活力等影响不大.     

褪黑素在猪精液保存中的抗氧化作用

为探讨褪黑素(MLT)在猪精液保存中的抗精子氧化损伤效应,采用分步筛选的方法,首先在15 ℃保存稀释精液中分别添加1×10-6 mol/L(M1)、1×10-5 mol/L(M2)、1×10-4 mol/L(M3)、1×10-3 mol/L(M4)和1×10-2 mol/L (M5) MLT,以不添加MLT为对照组(M0),检验并选择MLT有效浓度用于15 ℃保存的离心精液,检验并选择MLT最佳浓度用于冷冻精液.结果表明:在保存6 d的稀释精液中,M1、M2和M3组精子活率(TMS)、质膜完整性(PMI)和顶体完整性(NAR)均高于M0,M2最高,M4、M5则显著低于M0(P＜0.05);丙二醛(MDA)浓度均低于M0,并以M2为拐点先降后升;选择M1、M2和M3用于离心精液保存,6 d后TMS和NAR均高于对照组,且M2与对照差异显著(P＜0.05),MDA浓度则逐渐降低且与对照差异显著(P＜0.05);选择M2用于精液冷冻保存,解冻精液TMS、PMI、NAR和线粒体膜电位(Mt-MP)显著提高(P＜0.05),MDA浓度显著降低(P＜0.05).可见,添加适宜浓度MLT能够抑制稀释、离心及冷冻保存猪精液中的精子氧化损伤,显著提高精液保存质量.     

L-精氨酸对猪精液低温保存效果的影响

对L-精氨酸在猪精液低温保存中应用的效果进行评价,为猪精液低温保存稀释液配方的改良提供参考。采用手握法采集健康公猪精液,用含不同质量浓度L-精氨酸(0、0.50、1.00、1.50、2.00mg·mL-1)的低温保存稀释液稀释,于4℃下保存,对比7d内各组之间精子的活率、活力、畸形率、质膜和顶体完整性等参数。低温保存后,猪精液的总体质量浓度以1.00mg·mL-1组最好,其除了第1天精子活率与对照组差异不显著(P0.05)外,其他时间检测的5个指标均显著优于对照组(P0.05)。在本试验条件下,稀释液中添加1.00mg·mL-1 L-精氨酸可以明显改善4℃低温条件下猪精液的保存后质量。     

稀释液·清洁剂·冷冻程序对猪精液冷冻效果的影响

探讨了稀释液、清洁剂及冷冻程序对猪精液冷冻保存效果的影响。结果显示:①稀释液Ⅳ保存鲜精,精子活率明显低于其他组(P<0.05);但其作为冻精的解冻稀释液时,效果最佳(P<0.05),说明猪精液冷冻保存时可采用第Ⅰ～Ⅲ组稀释液,而解冻时采用第Ⅳ组较佳。②稀释液中于不同阶段添加SDS(Sodiumlaurylsulfate,十二烷基硫酸钠)或OEP(OrvusESPaste,清洁剂)均能显著提高冷冻精子活率(P<0.05),SDS与OEP对冻精活率的影响无显著差异(P>0.05)。③精液冷冻程序采用-70℃、液氮熏蒸与直接液氮熏蒸在对解冻后冻精精子活率上无显著差异(P>0.05)。添加咖啡因能有效提高冻精的解冻后活率。     

萨福克肉羊精液冷冻保存技术浅析

为充分发挥和提高优良萨福克种公羊的利用率,本试验对进口萨福克肉羊精液冷冻保存技术进行研究,试验设计4个萨福克羊冷冻精液稀释液配方,pH值6.0~7.0,挑选14只健康成年种公羊,调教采精、制冻。结果显示:稀释液C的冷冻后精子活力显著高于稀释液A的冻后精子活力(P0.05),极显著高于稀释液B和稀释液D的冻后精子活力(P0.01);冻精在40~42℃解冻时精子活力效果最好。故使用稀释液C制作进口萨福克肉羊冷冻精液并在42℃解冻效果较好,可在生产实践中推广使用。     

大豆卵磷脂稀释液中添加原花青素对山羊冻精效果的影响

为研究大豆卵磷脂稀释液中添加原花青素(proanthocyanidin, PC)对山羊精子的冷冻保护作用,以20%卵黄为对照(EY组),分别在大豆卵磷脂为基础稀释液的冻精稀释液中添加最终浓度为0、10、20、40、60μg·mL~(-1)的PC(分别命名为SL0、SL1、SL2、SL3、SL4组),冷冻-解冻后分别对精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性、抗氧化和凋亡指标进行检测。结果表明,当大豆卵磷脂稀释液中PC添加浓度为40μg·mL~(-1)(SL3组)时,解冻后精子活力、活率、质膜完整率、顶体完整率和线粒体活性最高,分别达58.49%、53.45%、50.46%、55.37%和55.16%,显著高于其他PC添加组和EY组(P0.05)。SL3组解冻后精子的超氧化物歧化酶(SOD)(224.87 U·mL~(-1))和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)含量(129.6 U·L~(-1))最高,总caspase凋亡率(54.33%)和TUNEL凋亡率(41.36%)最低,与EY和SL0组差异显著(P0.05)。当PC的添加浓度提高至60μg·mL~(-1)(SL4组)时,解冻后精子质量显著下降,表现为对精子毒性作用。综上,在山羊精液冷冻中,大豆卵磷脂稀释液中添加PC浓度为40μg·mL~(-1)可降低精子氧化损伤和细胞凋亡,提高冻精品质。该研究改善了无动物源稀释液在山羊精液冷冻中的应用效果,提高了山羊冻精的生物安全性和应用前景。     

IGF-Ι对绵羊冷冻精液质量的影响

【目的】探讨冻精稀释液中添加类胰岛素生长因子-I(IGF-Ι)对绵羊冷冻精液质量的影响,明确最佳的IGF-Ι添加浓度,为提高绵羊冻精受精率和加速其品种改良奠定基础。【方法】以特克赛尔年轻种公羊的精液为试验材料,在冻精稀释液中添加不同浓度(0、50、100、150和250 ng/m L)的IGF-Ι,通过SYBR-14/PI双染法、低渗肿胀试验和吖啶橙(AO)染色法检测解冻精液在孵育0、1和2 h后的顶体完整性、质膜完整性和DNA完整性,并通过体外培养验证其体外受精效果。【结果】Ⅱ组(IGF-Ι添加浓度100 ng/m L)的冷冻精液解冻孵育0、1和2 h后,其精子顶体完整性呈逐渐下降趋势,但整体效果优于其他试验组;在精子质膜完整性和DNA完整性方面,也表现为Ⅱ组高于其他试验组,且孵育时间越短(1 h内),效果差异越明显,均显著高于对照组(P0.05)。体外受精试验结果显示,5个试验组间的卵裂率和囊胚发育率均不存在显著差异(P0.05),但以Ⅱ组的体外受精效果略优于其他试验组。【结论】绵羊冻精稀释液中添加IGF-I可有效增强精子活力,改善冻精存活率,维持顶体、质膜和DNA完整性,但要求绵羊冷冻精液须在解冻后1 h内完成相关操作。     

十二烷基磺酸钠对山羊精液冷冻效果的影响

在山羊冷冻精液稀释液中添加浓度分别为0.05%、0.10%、0.15%、0.20%、0.25%、0.30%的十二烷基磺酸钠(SDS),探讨SDS对山羊精液冷冻品质的影响。结果表明,在冷冻精液稀释液中添加SDS可显著提高山羊精子活率、顶体完整率和质膜完整率,添加量为0.10%时精子活率最高,为73.90%;添加量为0.20%时顶体完整率最高,为58.46%;添加量为0.10%时精膜完整率最高,达54.13%。随着SDS添加浓度的增加,冻后精子质量也随之改善,但添加量至0.20%时,冻后精子质量显著下降(P<0.01)。本次试验SDS的最佳添加量为0.10%。