大豆卵磷脂稀释液中添加原花青素对山羊冻精效果的影响#br#

为研究大豆卵磷脂稀释液中添加原花青素（proanthocyanidin，PC）对山羊精子的冷冻保护作用，以20％卵黄为对照（EY组），分别在大豆卵磷脂为基础稀释液的冻精稀释液中添加最终浓度为0、10、20、40、60 μg·mL-1的PC（分别命名为SL0、SL1、SL2、SL3、SL4组），冷冻-解冻后分别对精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性、抗氧化和凋亡指标进行检测。结果表明，当大豆卵磷脂稀释液中PC添加浓度为40 μg·mL-1（SL3组）时，解冻后精子活力、活率、质膜完整率、顶体完整率和线粒体活性最高，分别达58.49%、53.45%、50.46%、55.37%和55.16%，显著高于其他PC添加组和EY组（P<0.05）。SL3组解冻后精子的超氧化物歧化酶（SOD）（224.87 U·mL^-1）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）含量（129.6 U·L^-1）最高，总caspase凋亡率（54.33%）和TUNEL凋亡率（41.36%）最低，与EY和SL0组差异显著（P<0.05）。当PC的添加浓度提高至60 μg·mL^-1（SL4组）时，解冻后精子质量显著下降，表现为对精子毒性作用。综上，在山羊精液冷冻中，大豆卵磷脂稀释液中添加PC浓度为40 μg·mL^-1可降低精子氧化损伤和细胞凋亡，提高冻精品质。该研究改善了无动物源稀释液在山羊精液冷冻中的应用效果，提高了山羊冻精的生物安全性和应用前景     

大豆卵磷脂稀释液中添加原花青素对山羊冻精效果的影响

为研究大豆卵磷脂稀释液中添加原花青素(proanthocyanidin, PC)对山羊精子的冷冻保护作用,以20%卵黄为对照(EY组),分别在大豆卵磷脂为基础稀释液的冻精稀释液中添加最终浓度为0、10、20、40、60μg·mL~(-1)的PC(分别命名为SL0、SL1、SL2、SL3、SL4组),冷冻-解冻后分别对精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性、抗氧化和凋亡指标进行检测。结果表明,当大豆卵磷脂稀释液中PC添加浓度为40μg·mL~(-1)(SL3组)时,解冻后精子活力、活率、质膜完整率、顶体完整率和线粒体活性最高,分别达58.49%、53.45%、50.46%、55.37%和55.16%,显著高于其他PC添加组和EY组(P0.05)。SL3组解冻后精子的超氧化物歧化酶(SOD)(224.87 U·mL~(-1))和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)含量(129.6 U·L~(-1))最高,总caspase凋亡率(54.33%)和TUNEL凋亡率(41.36%)最低,与EY和SL0组差异显著(P0.05)。当PC的添加浓度提高至60μg·mL~(-1)(SL4组)时,解冻后精子质量显著下降,表现为对精子毒性作用。综上,在山羊精液冷冻中,大豆卵磷脂稀释液中添加PC浓度为40μg·mL~(-1)可降低精子氧化损伤和细胞凋亡,提高冻精品质。该研究改善了无动物源稀释液在山羊精液冷冻中的应用效果,提高了山羊冻精的生物安全性和应用前景。     

番茄红素对山羊精液冷冻保存效果的影响

为研究番茄红素对山羊精液冷冻保存效果的影响,在山羊精液冷冻稀释液中添加不同质量浓度(0、0.5、1.0、2.0、4.0mg/mL)的番茄红素,检测冷冻-解冻后精子的活率、顶体完整率、质膜完整率、线粒体活性,并用试剂盒测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性。结果表明,1.0mg/mL组的冷冻保存效果最好,精子活率、顶体完整率、质膜完整率和线粒体活性分别达到52.04%、51.33%、53.57%和49.31%,显著高于对照组,且SOD、CAT、GSH-Px的活性也显著高于对照组;0.5mg/mL组与2.0mg/mL组的精子活率、顶体完整率、质膜完整率、线粒体活性及CAT和GSH-Px活性差异不显著;4.0mg/mL组的精子活率、顶体完整率、质膜完整率、线粒体活性及SOD和CAT活性与对照组差异不显著。因此,在山羊精液冷冻稀释液中加入1.0mg/mL的番茄红素对山羊精液具有显著的保护作用,能进一步提高山羊冻精品质。     

添加V_(B_(12))、V_E、V_C对无角道塞特绵羊精液冷冻效果的影响

探讨在无角道塞特绵羊冷冻精液稀释液中添加VB12、VE、VC对精子冷冻品质的影响。在无角道塞特绵羊冷冻精液稀释液中添加不同质量浓度的VB12、VE、VC制作细管冻精,解冻后观察精子的成活率和顶体完整率等指标。结果显示,VB12添加0.003 g/L时能够显著提高解冻后的精子活率(P0.05)和精子顶体完整率(P0.05);VE添加2.5 g/L时,能够极显著提高解冻后的精子活率(P0.01)和顶体完整率(P0.01);VC的添加4.4 g/L时能够显著提高解冻后的精子活率(P0.05),但对冷冻后精子的顶体完整率无影响。在稀释液中添加VB12、VE和VC能使解冻后精子品质得到提高。VE添加后能够极显著提高冷冻精子的顶体完整率,应该优先考虑添加。     

除去精浆、添加维生素E及水浴平衡对莎能奶山羊精液冷冻效果的影响

主要探讨精液离心、添加VE及平衡方法对山羊细管冻精冷冻-解冻后活力、顶体完整率等的影响,为提高山羊精液冷冻保存效果提供依据.试验1:将鲜精稀释后分为3组,第1组为稀释精液1 000 r/min离心6 min,去掉一半的上清液;第2组用相同的方法反复离心3次,完全去掉精浆;第3组不离心,做为对照.试验2:在稀释液中添加15 g/L VE,以不添加组作为对照.试验3:采用纱布包裹和水浴平衡两种方法.试验结果表明,离心去掉部分精浆组和离心去精浆组精子冷冻-解冻后的活力比不离心组高,差异显著(P＜0.05).精子顶体完整率和畸形率有所下降,但与对照组相比较差异不显著(P＞0.05).离心去掉部分精浆组和离心完全去精浆组相比,精子冷冻一解冻后的活力、顶体完整率和畸形率差异不显著(P＞0.05).冷冻稀释液中添加VE组的顶体完整率显著提高(P＜0.05),畸形率变化与对照组无差异(P＞0.05),精子活力提高效果也不明显(P＞0.05).精液冷冻前平衡方法以水浴法为好,与纱布包裹平衡组相比,水浴平衡组的活力和顶体完整率高(P＜0.05),精子畸形率较低(P＜0.05).可见,精液离心后去掉适量精浆可显著提高冷冻后精子的活力;添加VE可显著提高精液冷冻后精子的顶体完整率;与纱布包裹平衡法相比,水浴平衡法可显著提高精液冷冻后精子的品质.     

丝胶蛋白对牛精液冷冻效果的影响

精液在冷冻保存过程中易受氧化应激的影响,从而导致精液品质下降,丝胶蛋白具有抗氧化能力,可抑制由自由基产生的脂质过氧化。为研究精液稀释液中添加丝胶蛋白对牛精液冷冻效果的影响,采集4头公牛精液,将其分成5等份,在Optidyl稀释液中添加不同浓度丝胶蛋白(0,0.25%,0.5%,1.0%,2.0%),精液稀释后冷冻保存,使用计算机辅助精子分析系统检测解冻后精子的活力及运动参数,低渗肿胀试验检测质膜完整率,考马斯亮蓝染色法检测顶体完整率,分光光度计检测精浆中的过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)、活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)等氧化应激指标。结果表明：与对照组相比,稀释液中添加0.5%的丝胶蛋白可显著提高解冻后牛精子的活力、运动参数、顶体完整率、质膜完整率及SOD含量,并显著降低ROS和MDA水平(P<0.05)。这表明在Optidyl稀释液中添加0.5%的丝胶蛋白可保护牛精子免受氧化应激损伤,有效提高冷冻后精液品质。     

原花青素对湖羊冻精抗氧化能力的影响

在湖羊冻精基础稀释液中分别添加原花青素(PC),使其最终质量浓度为0μg/mL (CK)、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL,经冷冻解冻后对精子质量进行检测,探讨原花青素对湖羊精液冷冻效果的影响。结果表明:当PC的质量浓度为10μg/mL时,解冻后精子的活率、活力、质膜完整率、顶体完整率和线粒体活性最高,分别达58. 91%、56. 03%、50. 03%、53. 42%和50. 19%,其中活力和质膜完整性显著高于对照组;SOD值和GSH-PX值分别为212. 60 U/mL和125. 04 U/L,均显著高于对照组; ROS和MDA值分别为363. 05 U/mL和7. 02 nmol/L,显著低于对照组; NO和NOS值分别为8. 22μmol/L和35. 90μmol/L,其中NOS值显著低于对照组。当PC的质量浓度提高至40μg/mL时,精子解冻后质量显著下降,表现为促氧化损伤。在湖羊精液冷冻中,添加10μg/mL的PC可降低精子氧化损伤,提高冻精品质,当PC质量浓度提高至40μg/mL时,对精子具有毒副作用。     

不同抗氧化剂对金华猪精液冷冻保存效果的影响

为了观察冷冻稀释液中添加不同浓度的抗氧化剂谷胱甘肽(GSH)、绿茶多酚(GTPs)、维生素E(VE)和超氧化物歧化酶(SOD)对金华猪精液冷冻保存效果的影响,分别在冷冻稀释液中添加0.125、0.25、0.5 mmol.L-1的GSH,10、15、20 mmol.L-1的GTPs,1、2、4 mg.mL-1的VE和1 000、2 000、4 000 I U的SOD,采集活率较高的金华猪精液,用上述含抗氧化剂的冷冻稀释液稀释后进行冷冻保存,分别检测4个处理组精子4℃平衡后的活率和解冻后精子活率、质膜完整性、顶体完整率。结果表明,在金华猪精液的冷冻稀释液中分别添加15 mmol.L-1GTPs、2 mg.mL-1VE、4 000 I U SOD可显著提高猪精子4℃平衡后的活率、解冻后精子活率和质膜完整率(P0.05)。     

黑山羊精液冷冻稀释液配方的筛选

为筛选出提高黑山羊冷冻精液质量的最佳冷冻稀释液配方,试验分别用4个不同的稀释液配方,对15只湘东黑山羊进行精液的冷冻处理,通过观测平衡后精子活率、解冻后精子活力、顶体完整率、精子畸形率等几个特征性指标,可以看出稀释液配方Ⅳ效果最好,是用于黑山羊精液冷冻的最佳稀释液配方。其配方Ⅳ冷冻保存精液解冻后活力平均为0.3627、冻后顶体完整率为42.93%、精子畸形率为12.93%。     

十二烷基磺酸钠对山羊精液冷冻效果的影响

在山羊冷冻精液稀释液中添加浓度分别为0.05%、0.10%、0.15%、0.20%、0.25%、0.30%的十二烷基磺酸钠(SDS),探讨SDS对山羊精液冷冻品质的影响。结果表明,在冷冻精液稀释液中添加SDS可显著提高山羊精子活率、顶体完整率和质膜完整率,添加量为0.10%时精子活率最高,为73.90%;添加量为0.20%时顶体完整率最高,为58.46%;添加量为0.10%时精膜完整率最高,达54.13%。随着SDS添加浓度的增加,冻后精子质量也随之改善,但添加量至0.20%时,冻后精子质量显著下降(P<0.01)。本次试验SDS的最佳添加量为0.10%。     

猪精液冷冻与常温保存技术的研究

为研究冷冻保存和常温((17±0.5)℃)保存后猪精子活率、活力和顶体完整率,比较了猪精液冷冻稀释液中2种甘油含量细管法的快速冷冻效果,以及不同解冻温度对冷冻精液的影响,采用细胞计数法、FDA-PI双重染色法与Giemsa染色方法检测精子的活率、活力和顶体完整率。结果显示:3%(体积分数,下同)甘油冷冻解冻后精液的活率、活力(38.54%、52.24%)显著(P<0.05)高于2%甘油组(15.63%、28.22%),但3%甘油组顶体完整率(11.55%)显著(P<0.05)低于2%甘油组(21.71%)。38℃水浴解冻后的精子在39℃培养箱中4 h内活率高于0.3,而50℃水浴解冻后1 h后的活率低于0.3。精液稀释液Anderohep和BTS在常温((17±0.5)℃)保存新鲜猪精子的活率与顶体完整率上效果相似,保存3 d内精子活率达0.6以上,保存6 d内精子活率为0.3以上。结果表明,使用3%甘油冷冻保存及2种常温保存稀释液均可以较好地保存精子。     

猪精液预处理稀释液与冷冻基础液的配伍效应

采用6种预处理稀释液对猪精液进行预处理,然后用3种冷冻基础液冷冻保存,研究精液预处理稀释液和冷冻基础液对精子冷冻保存效果的影响,以及其间的配伍效应。结果表明,不同的预处理稀释液对解冻后精子活力的影响差异显著(P<0.05),而3种冷冻基础液对冻后精子活力的影响差异不显著(P>0.05)。不同的预处理稀释液与冷冻基础液之间存在明显的配伍效应,并且用含甘油的稀释液对平衡不同时间的精液冷冻时,其配伍效应又有所不同。猪精液中去除精清可显著提高精子冻后活力和顶体完整率(P<0.05),有利于提高精液品质。     

海藻糖和牛血清白蛋白对牛精液的冷冻效果

【目的】研究海藻糖(TH)和牛血清白蛋白(BSA)单独或配合使用对牛精液冷冻效果的影响。【方法】向种公牛精液商业稀释液中添加不同浓度的TH(0,0.000 37,0.025和0.05 mol/L)和BSA(0,1,2,3 g/L),TH和BSA的4个添加水平分别两两组合,组成16个处理,以其中二者添加水平均为0作为对照,制作0.25 mL细管冻精,解冻(40℃,10 s)后比较分析精子活率、顶体完整率和质膜完整性3个指标。【结果】单独添加TH、BSA及其互作对牛精液的冷冻效果与对照组相比达到显著水平。与对照组相比,单独添加不同水平的TH或BSA对冻后牛精子活率和质膜完整率均有明显影响(P<0.05),但对顶体完整率均影响不大(P>0.05),TH适宜的单独添加量为0.025mol/L,BSA为1 g/L;两者的交互作用对冻后牛精子活率、顶体完整率和质膜完整率均有明显影响(P<0.05),TH0.000 37 mol/L×BSA 2 g/L为较适宜的添加量。【结论】单独添加TH和BSA,均能对冻后精子品质产生明显影响;各TH×BSA组表现出显著的互作效应,其中以TH 0.000 37 mol/L×BSA 2 g/L的添加效果最好。     

他克林对猪精子冻后质量、抗氧化能力及糖代谢的影响

旨在研究他克林对猪精液冻后质量、抗氧化能力及糖代谢的影响机制。手握法采集12头18～24月龄健康杜洛克种公猪精液,在其冷冻保存稀释液中加0.10mmol/L他克林并冷冻保存,检测冻后精子活率、质膜完整率、顶体完整率和畸形率、线粒体膜电位、DNA完整性,同时利用试剂盒检测总抗氧能力、丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性、总胆固醇含量、丙酮酸含量及己糖激酶活性。结果表明,与鲜精相比,冻融后精子活率和质膜完整率、顶体完整率、线粒体膜电位、DNA完整性、抗氧化能力及糖代谢指标均极显著下降,畸形率极显著升高。与空白组相比,他克林显著提高冻后精子顶体完整率、DNA完整率、超氧化物歧化酶、丙酮酸含量;极显著提高精子活率、质膜完整率、线粒体膜电位、总抗氧能力、丙二醛含量、总胆固醇含量及己糖激酶活性,极显著降低畸形率。总之,猪精液冷冻前添加浓度为0.10 mmol/L的他克林可能通过提高抗氧化能力和糖代谢水平改善冻融后猪精子的质量。     

添加剂在猪精液冷冻保存中的应用

猪精液的冷冻保存显著影响猪精子的运动学参数,损伤精子质膜、顶体和DNA完整性,降低解冻后精子活率和受精能力.近年来,在以甘油和蛋黄作为冷冻保护剂的基础上,为了有效降低冷冻-解冻对精子的损伤,提高解冻精液的受精能力,研究人员将OEP、抗氧化剂(甲基黄嘌呤、丁羟基甲苯、谷胱甘肽、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、褪黑素和维生素E等)、2-羟丙基β环糊精以及透明质酸等物质作为添加剂应用于猪精液的冷冻保存,结果表明这些物质在保护精子质膜和顶体完整性,提高解冻后精子活力、活率和受精能力等方面均有显著作用.     

不同糖类对蓝狐精子常温及冷冻保存特性的影响

人工采取6只优质芬兰雄性蓝狐精液,利用含有不同性质糖成分的Tris-卵黄-柠檬酸钠-甘油稀释液稀释后,常温保存及制成细管冻精,荧光免疫方法检测蓝狐鲜精液常温保存及冷冻复苏后冻融精子的质量,目的在于比较不同性质糖在蓝狐精子常温及低温冷冻保存中的作用。结果表明,常温保存时,果糖、木糖及海藻糖试验组精子活力、质膜完整率及顶体完整率较高,与对照组差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01);超低温冷冻保存时,果糖、海藻糖稀释液有利于提高冻融精子质量,活力(44.6%、43.7%)与对照组(35.6%)差异显著(P<0.05),质膜完整率(50.6%、51.2%)、顶体完整率(53.2%、54.1%)与对照组间(39.6%、43.5%)差异极显著(P<0.01),而其他糖分试验组与无糖对照组差别不显著(P>0.05)。结果提示:果糖、木糖、海藻糖亦可作为蓝狐精液常温保存的稀释液成分,而果糖、海藻糖为蓝狐精液超低温冷冻保存较理想的保护剂     

谷胱甘肽(GSH)对绵羊细管冻精质量的影响

研究了在绵羊冻精稀释液中添加不同浓度(0、1、2、2.5、3 mmol/L)的谷胱甘肽(GSH)对细管冻精质量及体外受精的影响。结果显示:在绵羊精子的冷冻稀释液中添加1 mmol/L GSH具有最好的效果,可以显著地增加冷冻解冻精子的活力以及精子质膜、顶体膜和DNA的完整性,还可以在一定程度上提高体外受精的卵裂率及囊胚率。     

谷胱甘肽(GSH)对绵羊细管冻精质量的影响

研究了在绵羊冻精稀释液中添加不同浓度(0、1、2、2.5、3 mmol/L)的谷胱甘肽(GSH)对细管冻精质量及体外受精的影响。结果显示:在绵羊精子的冷冻稀释液中添加1 mmol/L GSH具有最好的效果,可以显著地增加冷冻解冻精子的活力以及精子质膜、顶体膜和DNA的完整性,还可以在一定程度上提高体外受精的卵裂率及囊胚率。     

湖羊精液稀释液及冷冻保护剂的筛选

试验旨在研究不同稀释液对湖羊精液的4℃保存效果,同时探讨不同种类及浓度的冷冻保护剂对湖羊精液冷冻保存效果的影响。选择6种常见的绵羊精液稀释液配方,检测湖羊精液稀释后精子活力变化,分析精子存活时间及生存指数;另选取6种常见的精子冷冻保护剂,分3组浓度(5%、10%、15%)添加,检测细管冻精解冻后的精子活率。结果表明,6种稀释液对湖羊精液的4℃保存效果存在显著差异,其中F稀释液保存效果最佳。冷冻保护剂的种类和添加比例对湖羊精液的冷冻保存效果都存在影响,稀释液中添加5%的丙三醇对湖羊精液的冷冻保存效果最佳。     

IGF-Ι对绵羊冷冻精液质量的影响

【目的】探讨冻精稀释液中添加类胰岛素生长因子-I(IGF-Ι)对绵羊冷冻精液质量的影响,明确最佳的IGF-Ι添加浓度,为提高绵羊冻精受精率和加速其品种改良奠定基础。【方法】以特克赛尔年轻种公羊的精液为试验材料,在冻精稀释液中添加不同浓度(0、50、100、150和250 ng/m L)的IGF-Ι,通过SYBR-14/PI双染法、低渗肿胀试验和吖啶橙(AO)染色法检测解冻精液在孵育0、1和2 h后的顶体完整性、质膜完整性和DNA完整性,并通过体外培养验证其体外受精效果。【结果】Ⅱ组(IGF-Ι添加浓度100 ng/m L)的冷冻精液解冻孵育0、1和2 h后,其精子顶体完整性呈逐渐下降趋势,但整体效果优于其他试验组;在精子质膜完整性和DNA完整性方面,也表现为Ⅱ组高于其他试验组,且孵育时间越短(1 h内),效果差异越明显,均显著高于对照组(P0.05)。体外受精试验结果显示,5个试验组间的卵裂率和囊胚发育率均不存在显著差异(P0.05),但以Ⅱ组的体外受精效果略优于其他试验组。【结论】绵羊冻精稀释液中添加IGF-I可有效增强精子活力,改善冻精存活率,维持顶体、质膜和DNA完整性,但要求绵羊冷冻精液须在解冻后1 h内完成相关操作。