CRISPR/Cas9介导的MSTN/FGF5基因编辑陕北白绒山羊粪便菌群分析

为了从绒山羊粪便微生物群落变化的角度对MSTN/FGF5基因编辑陕北白羊绒山的自身健康和环境安全性进行研究,利用6种不同培养基分别对MSTN/FGF5基因编辑和野生型陕北白绒山羊粪便不同微生物进行培养、计数,并做菌群结构的显著性检验分析。结果表明,FGF5/MSTN基因编辑和野生型陕北白绒山羊F0代和F1代公羊和母羊新鲜粪样经LB琼脂、伊红美蓝琼脂、TPY琼脂、胆硫乳琼脂、肠球菌琼脂和甘露醇盐琼脂培养后微生物计数分别为,F0代：公羊6.35±0.68,5.89±0.25;5.32±0.10,5.27±0.34;6.64±0.57,6.71±0.35;5.03±0.53,5.32±0.14;4.12±0.13,4.15±0.21;5.34±0.18,5.25±0.25;母羊6.62±0.45,6.64±0.31;4.80±0.51,4.75±0.45;7.20±0.30,7.15±0.55;4.30±0.52,4.42±0.62;5.83±0.51,5.73±0.86;6.24±0.28,6.24±0.21。F1代：公羊6.92±0.12,7.08±0.04;4.02±0.64,3.99±0.51;6.32±0.15,6.25±0.30;5.21±0.28,5.17±0.20;3.66±0.50,3.88±0.67;4.06±0.50,3.97±0.46;母羊7.12±0.24,6.96±0.19;4.15±0.19,4.25±0.24;6.45±0.30,6.56±0.45;4.97±0.42,4.87±0.38;4.04±0.96,3.96±0.57;4.10±0.28,3.85±0.37。F0和F1代MSTN/FGF5基因编辑陕北白绒山羊与野生型陕北白绒山羊粪便中菌群结构之间不存在显著性差异(P>0.05)。本研究为FGF5/MSTN基因编辑陕北白绒山羊的安全性评价研究提供了试验数据和研究基础。     

PRLR基因InDel检测及其与陕北白绒山羊生长性状的关联分析

[目的]探究催乳素受体(prolactin receptor, PRLR)基因InDel突变对绒山羊种群生长特性的影响。[方法]以陕北白绒山羊为研究对象,采用PCR扩增和测序技术法检测分析陕北白绒山羊PRLR基因的多态性,利用独立样本t检验和单因素方差法分析PRLR基因不同基因型与陕北白绒山羊生长性状之间的相关性。[结果]在所检测的1 176只陕北白绒山羊群体中,PRLR基因第2内含子存在1个16 bp InDel突变,形成了纯合插入型(II)、杂合型(ID)与纯合缺失型(DD)3种基因型;在育成羊群体中,该InDel突变与生长性状无显著关联(P>0.05),在成年羊群体中,InDel突变与管围性状显著相关(P<0.05);在育成羊和成年羊全部群体中,InDel突变仍与管围性状显著相关(P<0.05)。[结论]PRLR基因16 bp InDel突变可能会对陕北白绒山羊生长发育产生显著影响,该位点可作为陕北白绒山羊辅助育种的候选分子标记。     

营养因素对母羊超数排卵后胚胎质量影响的研究进展

超数排卵作为家畜繁殖育种中的新技术,是胚胎移植的重要技术环节,而胚胎质量与移植后胚胎成活率、妊娠率等紧密相关,影响羊超数排卵效果因素众多,其中营养水平是主要影响因素。综述了脂肪酸、维生素和微量元素等营养水平对母羊超数排卵的应用现状及效果,以期为母羊超数排卵效果的改善和提高胚胎移植效率提供参考依据。     

陕北白绒山羊生长发育规律的研究

旨在揭示陕北白绒山羊的生长发育规律,为其选育和科学的饲养管理提供参考依据。选取日龄相近的39只陕北白绒山羊(公羊16只,母羊23只)分别测量其体重和体尺指标。结果表明:(1)陕北白绒山羊体重和体尺各项指标均随月龄增加呈上升趋势;(2)陕北白绒山羊绝对增重和相对增重在出生后至1月龄最大,在3月龄降至最低值,随后分别在5月龄、8月龄出现2个绝对增重高峰期,而相对增重呈现出平稳变化趋势;(3)陕北白绒山羊公羊体高绝对生长值在8月龄最高,母羊体高绝对生长值在9月龄最高,而公、母羊体高相对生长值也分别在8、9月龄最高,公、母羊体长绝对生长值均在9月龄最高,体长相对生长值均在4月龄最高,胸围绝对生长值和相对生长值均在5月龄最高,管围绝对生长值和相对生长值均在12月龄最高。综上,陕北白绒山羊在出生后1月龄内、4~5月龄和7~8月龄增重速度较快。体尺指标在4~5月龄和7~9月龄增速较快。在此期间应注意营养提供,从而充分满足其生长发育的营养需要。     

关中奶山羊Prm1基因的克隆及真核表达

【目的】研究雄性奶山羊Prm1基因的表达规律并克隆该基因,为奶山羊精子发生过程的研究提供分子基础。【方法】利用PCR技术从关中奶山羊睾丸组织中扩增出Prm1基因的全CDS序列,对其进行同源性比较和进化比较。同时用PCR、western blotting及免疫组化技术检测Prm1在不同年龄雄性关中奶山羊睾丸中的表达。将克隆出的奶山羊Prm1基因与pIRES-GFP载体连接构建重组真核表达载体,转染GC1细胞和人的脐带基质细胞检测Prm1基因的超表达情况。【结果】Prm1基因在成年奶山羊睾丸组织中的表达量很高,且只定位于精子头部,在其它时期的睾丸组织中基本不表达。同时扩增得到了关中奶山羊Prm1 基因CDS序列,与其它物种比对,发现其与许多物种具有较高的同源性,与牛的同源性高达97.4%,最后在GC1细胞和人的脐带基质细胞中进行了超表达。【结论】得到了关中奶山羊Prm1基因的表达规律及完整的CDS序列。     

GHR基因9-bp InDel与陕北白绒山羊体重和生长性状的关联研究

生长激素受体(growth hormone receptor,GHR)是生长激素(GH)的特定跨膜受体,对动物正常的生长发育具有重要作用。该试验随机选择532只陕北白绒山羊,通过降落PCR (Touch down PCR)方法鉴定陕北白绒山羊GHR基因第一内含子存在的9bp插入缺失(InDel)情况并分析其与体重、生长性状的相关性。研究发现,陕北白绒山羊GHR基因共出现II、ID、DD 3种基因型;相关分析结果表明,在体重、髋宽、体高、荐高和胸深指标上,基因型ID或DD个体相比较II型个体更具显著性优势(P0.05),说明该位点等位基因D更有利于山羊的生长发育。研究表明GHR基因可作为陕北白绒山羊体重和生长性状的候选基因,为陕北白绒山羊产业快速高效发展提供科学理论依据。     

海带多糖和枸杞多糖对山羊精液冷冻保存效果的影响

在羊精液冷冻稀释液中分别添加不同浓度的海带多糖(0、0.5、1.0、2.0、4.0mg/mL)、枸杞多糖(0、2.0、4.0、6.0、8.0mg/mL)以及联合添加海带多糖与枸杞多糖(1.0+0、0+4.0、0.5+2.0、0.5+4.0、1.0+2.0、1.0+4.0mg/mL),比较解冻后精液品质(精子活率、顶体完整率、质膜完整率、线粒体活性等),以研究海带多糖、枸杞多糖以及海带多糖和枸杞多糖联合应用对羊精液的冷冻保存效果。结果表明:在山羊精液冷冻稀释液中添加一定浓度的海带多糖和枸杞多糖,均能提高山羊精液冻融后的品质,其中二者添加的最适浓度分别为1.0mg/mL、4.0mg/mL;联合添加海带多糖和枸杞多糖能够提高山羊精子活率、质膜完整率、顶体完整率,其中较佳浓度组合为(1.0+2.0)mg/mL组合与(0.5+4.0)mg/mL组合。     

不同月龄阶段陕北白绒山羊生精细胞发育规律研究

为研究陕北白绒山羊生精细胞发育规律,取1月龄、3月龄、6月龄及成年陕北白绒山羊睾丸组织,HE染色观察睾丸发育情况。结果表明:(1)随着年龄的增长,曲细精管直径显著增大(P0.05),6月龄达到150.72μm,略低于成年羊(161.94μm)(P0.05)。(2)细胞层数随年龄的增长而增长,6月龄达到7.70层,显著高于1月龄和3月龄(P0.05)。曲细精管横截面细胞总数随年龄增长而增长,6月龄和成年绒山羊曲细精管横截面细胞总数显著高于1月龄和3月龄绒山羊(P0.05)。(3)3月龄陕北白绒山羊曲细精管中精原细胞最为丰富,占总细胞数的46.40%,明显高于1月龄(33.10%)、6月龄(9.10%)和成年羊(7.60%)(P0.05)。(4)精原干细胞标记基因(CD49f、PLZF、Thy1、ETV5、VASA、Oct4、Nanog、Nanos2)均在3月龄睾丸中高表达,其中Oct4、PLZF、Thy1、ETV5、VASA、Nanog及Nanos2显著高于1月龄、6月龄及成年羊(P0.05)。研究结果表明,6月龄陕北白绒山羊已经达到性成熟;与1月龄、6月龄和成年羊相比,3月龄陕北白绒山羊睾丸组织含有更加丰富的精原细胞。     

山羊BMP15基因生物信息学分析

为探究骨形态发生蛋白15(Bone morphogenetic protein 15,BMP15)的生物学特性,本试验运用BioXM、DNAMAN、SignalP、ProtScale、PredicProtein、prosite、Smart和ProtFun等生物信息学软件分析山羊BMP15基因cDNA序列信息,预测其编码的蛋白的理化性质、二级结构、疏水性、信号肽、功能结构域和功能等。结果表明,山羊BMP15基因编码区长1185bp,编码394个氨基酸,其基因序列及蛋白序列与绵羊、牛的同源性分别为99%和98%,亲缘关系近。BMP15蛋白序列在25和26位氨基酸之间存在最佳剪切位点,存在信号肽,属于分泌性蛋白,具有信号转导功能。BMP15具有细胞外被膜功能的可能性最大,达到12.822,推测其合成后可能被转运到细胞外膜上进行功能反应。BMP15蛋白序列有TGFβ功能结构域,位于293~394氨基酸区域,且作为激素在生理活动中传递信息的可能性最大。总的来说,山羊BMP15属于分泌性蛋白,可能作为激素进行信号传递来调控机体生理活动,这为进一步研究对BMP15蛋白的功能调节机制奠定理论基础。     

转FGF5s基因的陕北白绒山羊粪便菌群分析

为了对转FGF5s基因陕北白绒山羊的生物安全进行评价,试验以转FGF5s基因和野生型陕北白绒山羊为研究对象,采集其新鲜粪便样品,用灭菌生理盐水进行梯度稀释后分别接种LB固体培养基、胆硫乳琼脂培养基、肠球菌琼脂培养基、伊红美蓝琼脂培养基和甘露醇盐琼脂培养基,37℃恒温过夜培养后分别对培养基上生长的所有需氧菌、沙门氏杆菌、肠球菌、大肠菌群和金黄色葡萄球菌进行菌落计数,并进行差异显著性检验。结果表明:微生物在5种培养基上形成不同的菌落形态,菌落计数之后对数据进行统计分析,结果差异不显著(P0.05)。说明转FGF5s基因与野生型陕北白绒山羊粪便中的需氧菌菌群结构间不存在显著差异。