苹果茎沟病毒柑橘碎叶株系的分布与序列分析

为明确苹果茎沟病毒(apple stem grooving virus,ASGV)柑橘碎叶株系(citrus tatter leaf virus,CTLV)在中国柑橘产区的发生分布及其分子特性,于2017—2021年对我国12个柑橘主产区开展系统调查,并采用多重比对以及系统发育分析法对CTLV的全序列进行分析。结果表明,从12个柑橘主产区采集的2 012份疑似样品中检测出413份感CTLV阳性样品。除陕西省外,其余11个柑橘主产区样品中均检测出CTLV,并且柚类样品中CTLV的检出率最高,达到32.31%。对分离获得的22株CTLV毒株和已知的7株CTLV以及5株ASGV毒株进行全序列分析,发现所有34株毒株的核苷酸序列相似性为78.6%～99.8%,且CTLV序列的保守性较高。此外,与其他4株ASGV毒株相比,本研究中22株CTLV毒株与ASGV-MK毒株(GenBank登录号为MZ127820.1)具有更近的亲缘关系。推测CTLV中国毒株间的亲缘关系可能与其采样地和寄主品种有关。     

柑橘衰退病、裂皮病和碎叶病的多重RT-PCR检测方法研究

 本研究以广东省农业科学院果树研究所隔离网室内通过嫁接分别感染CTV、CEVd和CTLV的柑橘树皮为实验材料,建立了以oligo(dT)为反转录引物的RT-PCR检测体系,成功检测到在病毒RNA 3'末端带有ploy_(A)加尾的CTV和CTLV。实验过程中,发现不具有ploy_(A)加尾的环状类病毒CEVd,同样可以用oligo(dT)反转录的RT-PCR检测出来,通过测序分析,其同源性在96%以上,并发现在CEVd序列中有一个富含A的区段。在此基础上,进一步研究了同时检测CTV、CEVd和CTLV的多重RT-PCR检测体系,该方法能为这3种病害的检测简化步骤、节省时间、降低成本。     

应用多重PCR技术同步检测柑橘4种重要嫁接传播病原

 柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV),柑橘碎叶病毒(Citrus tatter\|leaf virus,CTLV),柑橘裂皮病类病毒(Citrus exocortis viroid,CEVd)和柑橘黄龙病(Huanglongbing, HLB)亚洲种病原(Candidatus liberobacter asiaticus)是重要的柑橘嫁接传播病原。本文建立了同时检测HLB病菌、CTV、CEVd 和CTLV 4种柑橘嫁接病原的一步法、双温多重PCR检测技术体系,同时在体系中设置内参基因。应用该体系快速评价了4种嫁接传播病原在田间侵染情况,结果表明28个田间样品CTV、CEVd、CTLV和HLB感染率分别为89.3 %、17.9 %、10.7 %和28.6 %,接近半数样品为混合感染。并且将该方法应用于快速评价茎尖嫁接苗病毒的脱除情况。     

柑桔碎叶病毒,茎陷衰退病毒脱除技术研究

Calavan等(1972)报道采用40/30℃ 44/30℃6 2星期,脱除北京柠檬碎叶病毒。Roistacher等(1972)采用50℃湿热处理北京柠檬3～22h,得到无碎叶病毒,并于1976、1977年报道,茎尖嫁接不能脱除柑桔碎叶病毒(CTLV)。宫川(1980)提出40/30℃120日脱除椪柑、蕉柑等碎叶病毒。Koizumi(1984)采用40/30℃9日 35/30℃13～20日 茎尖     

温州蜜柑萎缩病的分布鉴定

1985-1991年,从9个省(自治区、市)采集84个由日本引进的特早、早、中和晚熟的温州蜜柑品系、杂柑以及脐橙类品种样品,采用草本指示植物白芝麻、黑眼豇豆和美丽菜豆以及用ELISA法对各样品感染温州蜜柑萎缩病毒(SDV)情况进行鉴定。结果表明80年代初四川奉节和浙江黄岩分别从日本引进的特早熟宫本温州蜜柑感染该病,而其余样品均不带SDV。不少特早熟温州蜜柑品系感染有柑桔碎叶病毒(CTLV),尤以从浙江黄岩采集的为甚。1991年秋梢嫩梢期从国家果树种质重庆柑桔圃采集除温州蜜柑以外的各地主栽品种25个进行ELISA法测定,结果表明均未带SDV。     

北京月季病原病毒的高通量测序鉴定和RT-PCR检测

 本研究利用高通量测序技术对北京地区的月季染病样品进行了病毒鉴定,通过序列比对和拼接获得了李属坏死环斑病毒(prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)、苹果茎沟病毒(apple stem grooving virus,ASGV)、柑橘碎叶病毒(citrus tatter leaf virus,CTLV)、月季黄叶病毒(rose yellow leaf virus,RYLV)、月季黄花叶病毒(rose yellow mosaic virus,RoYMV)、月季潜隐病毒1(rose cryptic virus1,RCV1)和玫瑰黄脉病毒(rose yellow vein virus,RYVV)等7种已知病毒和2种未知病毒的序列信息。分别对PNRSV,ASGV和RYLV园博园分离物的外壳蛋白基因进行系统进化分析,结果表明PNRSV-YBY归属于PV32组,ASGV-YBY归属于Ⅰ组,RYLV-YBY为玫瑰叶畸形病毒(Rosa rugosa leaf distortion virus, RrLDV)的一个新的分离物。对中国农业大学校园、北京植物园、北京动物园和北京园博园的37份样品进行了PNRSV、ASGV和RYLV的RT-PCR检测,检出率分别为41.7%、44.4%和10.8%。本研究初步明确了侵染北京月季的病毒种类和侵染情况,为月季病毒病的检测和防控提供参考。     

枸头橙茎陷点病的研究

由柑桔衰退病毒(citrus tristeza virus,CTV)引起的茎陷点病,是世界上许多柑桔生产国家如巴西、澳大利亚、日本和秘鲁等的重要柑桔病害,该病主要为害敏感的柑桔品种,与所用砧木无关。枸头橙(Citrus aurantium)是浙江黄岩桔区特有的砧木种,具有许多优良的栽培特点。前人的研究结果表明,它用作甜橙的砧木时,耐苗黄型衰退病。作者研究发现它对茎陷点病非常敏感,被害严重。1986年以来,作者对枸头橙茎陷点病的发生、茎陷点病对枸头橙植株的树势、产量和果型等的影响、病原病毒的鉴定以及致病力的测定等进行了研究,结果简报如下。     

应用常规RT-PCR和荧光定量RT-PCR检测柑桔衰退病毒

 根据柑桔衰退病毒(CTV)P20基因序列设计cquctv9/cquctv10特异引物对,以柑桔RNApolymeraseⅡ基因作为内参照,建立了柑桔衰退病的常规RT-PCR快速检测体系;依据柑桔衰退病毒P20基因序列设计cquctv1/cquctv2特异引物对和TaqMan探针cquctvp1,建立了柑桔衰退病荧光定量RT-PCR快速检测体系。常规RT-PCR检测下限是含有CTV的50pg总RNA,荧光定量RT-PCR法的检测下限是2fg纯CTV片段。荧光定量RT-PCR的灵敏度相对比常规RT-PCR高100倍。利用常规RT-PCR和荧光定量RT-PCR体系对从2005年3月到2006年7月采自田间的样品进行检测,结果表明,2种检测体系都有很好的特异性和准确性;对183个田间柑桔苗木样品带毒率检测结果表明,荧光定量RT-PCR检出率为(82.5%),比常规RT-PCR检出率(73.2%)高。     

温州蜜柑矮缩病毒单克隆抗体的研制

酶联免疫吸附试验(ELISA)已成功用于检测柑桔病毒,例如温州蜜柑矮缩病毒(SDV)和柑桔花叶病毒(CiMV)。由于两者在抗原上密切相关,故需要用单克隆抗体做更特异和更灵敏的检验。因此,我们试图研制出SDV的单克隆抗体。依据宇杉等人的方法来提纯SDV病毒粒子,将其与等体积的弗氏完全佐剂相混合,然后注射到8周龄的BALB/c小鼠腹腔内     

关于无毒柑桔生产的建议

一、柑桔病毒病可能成为中国柑桔产业的威胁柑桔病毒类病害种类很多,如果传入中国,将对中国的柑桔产品起到破坏和威胁作用。最近引入的一些病原物对浙江省来说也许是以前没有的,如柑桔顽固病(Spitop-lasm Citri)、柑桔石果病毒(Impietra-tura)、C 型木质陷孔病(Cachexia),还有如 Dcuterophorna 类的真菌。对发展中的柑桔业真正的和潜在的危险是柑桔病毒、     

枸头橙种子中柑桔衰退-茎陷点病毒的鉴定

 采用双抗体夹心-酶联免疫吸附测定试验(DAS-ELISA)对枸头橙种子中柑桔衰退-茎陷点病毒的带毒情况进行了鉴定。结果表明,从严重感染茎陷点病的枸头橙罹病树采集的种子可检测到柑桔衰退病毒(CTV)。种子带毒量以内种皮为较高,剥皮种子次之,外种皮呈阴性。种子在4℃冰箱内贮藏1~2年后仍带毒,但带毒量有所下降。对带毒种子繁殖的实生苗及嫁接在实生苗上的墨西哥来檬的检测结果,有部分呈阳性,种植在防虫隔离网室内的100余株2年生枸头橙实生苗,用无毒珠心系的墨西哥来檬芽嫁接进行生物鉴定,经2年观察未发现症状     

柑桔碎叶病毒病发生与研究现状简介

1935年作者和赵学源等分别在浙江黄岩和四川重庆,于本地早、槾桔和蕉柑、北京柠檬上鉴定到柑桔碎叶病毒。次年,作者等又在黄岩柑桔等10个品种(系)上鉴定到碎叶病毒。我们的研究表明,柑桔碎叶病毒在我     

斜纹夜蛾核型多角体病毒的ELISA定量检测分析

本研究采用ELISA间接法检测试验,对纯化的斜纹夜蛾核型多角体病毒和五龄、六龄幼虫、蛹及卵块内所含的病毒进行了定量检测。当检测纯化病毒样品时,吸光值(OD_(450))与浓度值对敷值(LnC)有显著的直线相关关系,标准曲线的直线方程为:Y=8.1367X+0.7608(相关系数,r=0.9928)。其结果与生物测定方法比较无显著差异(P<0.01)。本试验所能测出的最低浓度值为:1630PIBs/ml,即27.38ng。而普遍采用的血球计数法所能测出的最低浓度值比这个结果高出近1000倍。当检测感染病毒的五龄、六龄幼虫样品,幼虫体内所检出的病毒含量与血球计数法基本相同(0.01相似文献   

日本鉴定柑桔花叶病毒的一次全国性行动

柑桔花叶病是由一种与温州蜜桔矮化病毒(SDV)有亲缘关系的一种病毒引起的,这种病毒原先只局限在日本很小的地区内。然而由于柑桔种植区新种植宫本早生柑桔这种致病的病毒(CiMV)在该地区内广泛传播。在新种的宫本早生柑桔中某些无性系,     

柑桔青霉病菌对多菌灵的抗药性检测

柑桔青霉病(Penicillium italicum)是柑桔贮运过程中的主要病害之一。国外于60年代末开始应用多菌灵等苯并咪唑类杀菌剂进行防治,并取得了较好的效果。国内应用此类药剂防治该病也有十几年的历史。自70年代初以来,在国外不断有柑桔青霉病菌对多菌灵等苯并咪唑类杀菌剂产生抗性并导致柑桔较大损失的报道。国内柑桔产地及柑桔贮运场所也不断反映多菌灵对柑桔青霉病的防效有所下降,但未见有柑桔青霉病菌产生抗性的报道。为了明确该菌对多菌灵的抗性情况,作者于1990年首次对上海、南京、杭州和苏州等地柑桔贮运场所的青霉病菌进行了抗多菌灵的抗性检测。结果报道如下。     

三种甘薯病毒多重RT-PCR检测技术的建立

本文根据GenBank中甘薯G病毒(SPVG)、甘薯卷叶病毒(SPLCV)和甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)外壳蛋白(CP)基因序列设计特异引物,对多重RT-PCR退火温度、延伸温度、模板浓度、引物浓度进行改良优化,建立能同时检测3种甘薯病毒的多重RT-PCR方法。该方法能同时扩增出SPVG、SPLCV和SPFMV特异片段,其大小分别是800、276和570bp。测序结果表明,扩增出的3种病毒序列与相应参考序列相似性达到98%以上。灵敏度分析结果表明,多重RT-PCR方法能够检测cDNA的量为0.1ng。应用建立的多重RT-PCR检测方法对田间样品进行检测,结果显示该方法可以特异、快速、灵敏地同时检测3种甘薯病毒。这些研究结果可为甘薯病毒检测提供参考。     

应用多聚酶链式反应(PCR)技术检测和定量分析柑桔黄龙病病原

 应用多聚酶链式反应(PCR)技术对柑桔黄龙病病原进行检测和定量分析。研究结果表明:PCR技术能准确、快速地检测出田间和温室内罹病的柑桔、长春花以及带菌柑桔木虱样本中的柑桔黄龙病病原(BLO),而健康植株和柑桔木虱样本则呈阴性反应。采用的PCR引物(Primers)是根据柑桔黄龙病病原亚洲株系的DNA序列(In-2.6,基因库号码:M9491)设计的。应用竞争性定量多聚酶链式反应(Q-PCR)方法能测定病原在不同样品中的含量。该技术关键在于:病原DNA和浓度系列稀释后的竞争物DNA,在同一试管中进行DNA扩增反应时,共用相同的引物。由于彼此互相竞争反应引物的结果,病原的PCR产物和竞争物的PCR产物在数量上呈反向线性相关。因竞争物的浓度为已知,便可从线性关系中推算出病原的含量。     

温州柑桔裂皮病初步调查和鉴定

柑桔裂皮病(Exocortis)是由一种类病毒引起的危险性病害。目前在我国的四川、湖南、广东、广西、福建、台湾等省已有发生。1977年在浙江海宁从阿尔巴尼亚引入的甜橙上发现过裂皮病。温州是浙江的重要柑桔产区之一,60年代以来通过各种渠道从四川、湖南等地引入不少新品种。为了保护柑桔生产,免受裂皮病危害,以及防止该病害的传播,我们在近两年对温州主要柑桔产区进行田间调查和鉴定,现将初步调查和鉴定结果报道如下。