转基因斑马鱼在镉免疫毒性研究中的应用

为开发转基因斑马鱼技术在环境污染物免疫毒性研究中的应用,以转基因斑马鱼Tg(lysC:DsRed2)-Lyz fish为模型,利用斑马鱼胚胎发育技术和定量实时RT-PCR技术,探讨了Cd对斑马鱼仔鱼的免疫毒性及其作用机制。结果表明,0.01μmol·L~(-1)CdCl_2即可显著抑制转基因斑马鱼胚胎的孵化(P=0.013),当暴露浓度增大到0.1μmol·L~(-1)时,斑马鱼胚胎24 h血流障碍和52 h孵化抑制这两个毒性效应都大幅增强,且剂量-效应关系显著。0.1μmol·L~(-1)CdCl2使得溶菌酶(lysozyme C,lyz)标记的斑马鱼仔鱼体内中性粒细胞数量增多,且趋向肝脏部位聚集。免疫毒性的作用机制与斑马鱼仔鱼体内金属硫蛋白相关基因(dMT)和炎症相关基因(serp、tnf)表达的诱导,以及癌症抑制相关基因(ccgn1、chk2、p53)表达的抑制有相关性。研究表明,转基因斑马鱼Tg(lysC:DsRed2)在重金属污染物免疫毒性评价中具有重要意义。     

青羊参愈伤组织对抗生素敏感性研究

研究青羊参愈伤组织对8种抗生素的敏感性,结果表明:青羊参对头孢唑林钠极敏感,致死浓度为50 μg/mL;对氯霉素、硫酸庆大霉素、硫酸链霉素、氨苄西林钠较敏感,致死浓度分别为300、300、200、400 μg/mL;而对硫酸卡那霉素、青霉素钠和头孢拉定不敏感.头孢唑林钠抗性基因作为标记基因筛选转基因青羊参植株效果最好,氯霉素、硫酸庆大霉素、硫酸链霉素、氨苄西林钠的抗性基因也可作为标记基因,而硫酸卡那霉素、青霉素钠和头孢拉定的抗性基因不宜作标记基因.     

三-(2,3-二溴丙基)异氰脲酸酯对斑马鱼胚胎发育的毒性研究

为了探究三-(2,3-二溴丙基)异氰脲酸酯(TBC)这一新型含溴阻燃剂对斑马鱼胚胎的毒性效应及潜在的致毒机制,将受精后2h内的斑马鱼胚胎分别暴露于0.2、1、5、25μg/mL的TBC和0.1、0.5、2.5、12.5μg/mL的17β-雌二醇(E2)以及各浓度TBC+2.5μg/mL E2中,分别在24、48、72、120hpf对胚胎进行形态学观察并统计。发现TBC对斑马鱼胚胎72hpf孵化率的抑制作用及120hpf致畸作用呈剂量效应关系,对120hpf胚胎的致死作用较小;E2对斑马鱼胚胎的孵化率亦有抑制作用;在120hpf,TBC和E2对斑马鱼胚胎均有致畸效应但致畸形态有差异;TBC的EC50为1.248μg/mL,E2的EC50为0.968μg/mL及LC50为2.834μg/mL。结果表明,TBC在一定程度上可抑制雌激素对斑马鱼胚胎的毒性效应,呈现潜在的抗雌激素效应的内分泌干扰作用。     

BDE-47对斑马鱼胚胎氧化应激与DNA损伤的毒性研究

以斑马鱼胚胎为受试对象,研究了2,2′,4,4′-四溴联苯醚(BDE-47)对胚胎的氧化应激及DNA损伤。通过对不同浓度BDE-47(1、5、10、50μg·L~(-1))暴露5 d后胚胎/幼鱼体内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽S转移酶(GSH)的活性及丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)含量变化的分析以及Sod1、Ucp-2、Gstp2及Nqo1基因相对量表达的测定,考查BDE-47对斑马鱼胚胎/幼鱼的氧化应激效应;通过单细胞凝胶电泳(SCGE)对尾矩值的分析,探讨BDE-47对斑马鱼胚胎/幼鱼的DNA损伤。结果显示,BDE-47能够显著诱导ROS与MDA的产生,并呈现浓度效应依赖关系;50μg·L~(-1)BDE-47能够显著增加SOD与CAT的活性,降低GSH的浓度。BDE-47暴露后50μg·L~(-1)暴露组基因Ucp-2的表达显著上调4.12倍(p0.01),Gstp2与Nqo1表达分别显著下调至对照组的0.62倍与0.55倍(p0.01),而基因Sod1相对表达量没有显著变化。同时,5、10、50μg·L~(-1)暴露组胚胎/幼鱼尾矩值显著增加并伴随着ROS的浓度升高。结果表明,BDE-47能够诱导斑马鱼胚胎/幼鱼产生氧化应激,ROS是诱发胚胎发生DNA损伤的导火索。     

抗生素对迟钝爱德华氏菌的体外抑菌试验

［目的］研究12种抗生素及8组联合药物对迟钝爱德华氏菌体外抑菌效果,为治疗鱼类爱德华氏菌病提供参考。［方法］采用试管二倍稀释法,通过测定抗生素对迟钝爱德华氏菌的最小抑菌浓度（MIC）、最小杀菌浓度（MBC）,筛选适宜抗生素。［结果］硫酸庆大霉素、卡那霉素硫酸盐、盐酸四环素的抑菌效果最好,其MIC分别为0.05、0.80、1.60 μg/ml,MBC分别为0.05、3.20、100.00 μg/ml。联合药物中硫酸庆大霉素＋羧苄青霉素、硫酸庆大霉素＋盐酸四环素、氨苄青霉素＋链霉素的抑菌效果最好,其最小抑菌浓度和最小杀菌浓度均为0.05 μg/ml。［结论］通过抗生素对爱德华氏菌的体外抑菌效果,确定单独使用选择硫酸庆大霉素、卡那霉素硫酸盐、盐酸四环素,联合药物选择硫酸庆大霉素＋羧苄青霉素、硫酸庆大霉素＋盐酸四环素、氨苄青霉素＋链霉素较适宜。     

杏鲍菇褐斑病的抑菌剂筛选试验

用硫酸新霉素、硫酸链霉素、多粘菌B、硫酸庆大霉素等4种抗生素和黄斑消、细菌病杀、疣克星等消毒剂对杏鲍菇褐斑病的病原菌细菌Pseudomonas tolaasii药剂筛选,采用纸碟法,以抑菌圈的大小.测定杀菌效果表明,消毒剂的防治效果黄斑消>疣克星>细菌病杀.生产上防治细菌性褐斑病首选黄斑消.四种抗生素抑菌效果表明,硫酸庆大霉素>硫酸新霉素>硫酸链霉素>多粘菌B.4种抗生素有效成分Ec50的大小顺序依次为:多粘菌B>硫酸链霉素>硫酸新霉素>硫酸庆大霉素且其差异显著,其中多粘菌最高为7,67 μg/mL,硫酸庆大霉素最低0,73μg/mL.     

莠去津对斑马鱼胚胎发育及幼鱼成活的影响

[目的]确定莠去津对斑马鱼生殖发育的毒性。[方法]从购自市场的斑马鱼中选取健康的雌鱼和雄鱼按1：2～1：3的比例进行交配产卵,分别用不同浓度的莠去津对斑马受精卵和平游后的幼鱼进行染毒试验,统计其孵化数和畸形数以及幼鱼死亡数。[结果]斑马鱼胚胎和幼鱼时莠去津毒性作用均很敏感,随着莠去津浓度的增加,斑马鱼胚胎孵化率降低,畸形率增加,幼鱼致死率增大。当莠去津高于30mg/L时,斑马鱼胚胎致死率和畸形率增加,当莠去津为50mg／L时胚胎出现全致死效应。斑马幼鱼对莠去津的毒性也很敏感,24h和48h的LC50值分别为36．25和22．89mg／L,在莠去津为50mg／L48h条件下,幼鱼产生全致死效应。[结论]该研究为莠去津的安全使用及淡水鱼的保护提供科学依据。     

紫草素可抑制在RAW264.7巨噬细胞和斑马鱼幼虫中由脂多糖诱导的炎症反应

【目的】通过巨噬细胞和斑马鱼这2种模型来评价紫草素的抗炎作用。【方法】首先使用细胞计数试剂盒检测紫草素对细胞活性的影响，然后将巨噬细胞分为空白对照组、脂多糖组（（LPS 1μg/mL）、LPS(1μg/mL)+紫草素（0.3、1.5、3μg/mL））组和紫草素（3μg/mL）组。采用一氧化氮产生法和酶联免疫吸附法检测促炎因子和促炎细胞介质的含量。在斑马鱼试验中，检测紫草素对斑马鱼胚胎的毒性，并通过存活率、体型、心率和体长等结果，选择合适的紫草素浓度（0.001、0.01、0.1μg/mL）进行后续试验。在转基因斑马鱼卵黄囊中注射2 nL LPS(2 mg/mL)建立炎症模型，测定紫草素处理后卵黄囊中2种细胞（巨噬细胞和中性粒细胞）的募集情况、测定紫草素对脂多糖诱导的斑马鱼心跳的影响。【结果】在细胞研究中，与仅经LPS处理的细胞相比，紫草素的加入可以减少促炎细胞因子如肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的积累。同时，紫草素还能抑制一氧化氮的分泌量，抑制率可达50%。斑马鱼的研究表明，紫草素有效地减少了卵黄囊中两种细胞的大量聚集，最高抑制率为73.3%，也减轻了LPS引起...     

核定位信号肽和转运肽对斑马鱼转基因效率的影响

为了探讨核定位信号肽S413-PV和转运肽Tp10这2种融合肽对转基因效率的影响,将S413-PV和Tp10与线性化质粒分别以质量比50∶1、100∶1、200∶1混合制成转染液,注射斑马鱼单细胞期胚胎,分别检测转染24 h、120 h后胚胎的阳性率和成活率。结果表明:与对照组相比,转染24 h后,S413-PV组胚胎阳性率极显著上升,胚胎成活率均下降,但差异不显著;Tp10组阳性率均呈上升趋势,200∶1组差异极显著,其他组差异不显著,胚胎成活率均显著下降;转染120 h后,S413-PV组胚胎阳性率均极显著上升,胚胎成活率均呈下降趋势,100∶1、200∶1组差异极显著;Tp10组胚胎阳性率上升,200∶1组差异显著,胚胎成活率均极显著下降。以上结果表明,S413-PV可显著提高斑马鱼转基因效率,对胚胎毒性较小;Tp10对转基因效率影响不显著,且对胚胎毒性较强。     

庆大霉素废水对斑马鱼的急性毒性效应

[目的]探讨庆大霉素废水对斑马鱼的急性毒性效应。[方法]采用静水式直接接触致毒法,研究庆大霉素废水对斑马鱼的急性毒性效应。根据斑马鱼在各时间段的死亡率求出半致死浓度(LC_(50)),根据LC_(50)判断庆大霉素废水的毒性等级。[结果]预试验结果表明,斑马鱼暴露于庆大霉素体积百分比为30%的废水中24 h 100%死亡(24 h LC100)和体积百分比为10%的废水96 h零死亡(96 h LC_0)。急性毒性试验结果表明,在(22±1)℃下,庆大霉素废水4、8、12、24、48、72、96 h的LC_(50)分别为23.975%、21.210%、19.050%、18.395%、16.779%、16.779%、16.779%。庆大霉素废水不同时段的LC_(50)为10%~50%,Tua值为2~10,毒性等级为中等毒性。[结论]研究结果可以为庆大霉素废水对水生生物的亚急性毒性研究提供相关数据。     

杜氏盐藻无菌体系的建立

为建立杜氏盐藻无菌培养体系,试验选用卡那霉素、头孢霉素、氯霉素、链霉素、潮霉素和氨苄青霉素6种抗生素,分别测试盐藻细胞的抗生素耐受性和对盐藻藻液的除菌效果。结果表明,盐藻对氯霉素耐受性低,对头孢霉素和氨苄青霉素的耐受性较高;氯霉素、头孢霉素和氨苄青霉素单独处理对盐藻藻液的抑菌效果明显,卡那霉素、潮霉素和链霉素单独处理的抑菌效果较差;抗生素组合处理对盐藻藻液的除菌效果更强;应用50μg/mL氯霉素、100μg/mL氨苄青霉素和100μg/mL头孢霉素组合,经3次除菌处理和5次继代培养,建立了盐藻无菌培养体系。     

LPS致奶牛蹄真皮细胞炎症模型的建立

为建立LPS致奶牛蹄真皮细胞炎症模型,通过分离、培养奶牛蹄真皮细胞,用不同浓度的LPS处理蹄真皮细胞,倒置显微镜下观察细胞形态,MTT法检测细胞活力,RT-PCR法检测CYP3A4、CYP1A1mRNA的表达,Western blot法检测CYP450蛋白的表达,并通过ELISA法检测细胞上清液中TNF-ɑ、IL-1β的含量,来确定LPS是否对细胞造成损伤。结果表明,随着LPS浓度的升高,对蹄真皮细胞的损伤也随之升高,CYP450蛋白的表达呈升高的趋势,在10μg/mL时表达最明显,10μg/mL LPS处理48h,对CYP3A4、CYP1A1mRNA表达的抑制作用较明显,模型组TNF-ɑ和IL-1β的含量极显著高于对照组(P0.01)。本试验表明,10μg/mL LPS作用48h可建立可靠的蹄真皮细胞炎症模型。     

抗生素对两种竹芋组织培养的影响

以青苹果和猫眼两个竹芋品种为植物材料,研究庆大霉素、硫酸链霉素、四环素、卡那霉素等4种抗生素对竹芋内生菌的抑制和芽的诱导及生根的影响。结果表明,将庆大霉素作为竹芋组织培养中的抑菌剂效果最好,使用浓度范围控制在500～1000mg·L-1。     

环境雌激素E2、o,p′-DDT和抗雌激素TAM对斑马鱼(Danio rerio)胚胎的二元联合毒性效应（英文）

为了探究雌激素与抗雌激素类化合物的联合毒性效应,将斑马鱼胚胎暴露于雌激素17β-雌二醇(E2)和o,p′-DDT,抗雌激素它莫昔芬(TAM)以及雌激素(E2、DDT)与抗雌激素(TAM)的二元混合物96h,观察其形态学变化(孵化率、畸形率和孵化时间)以及测定雌激素效应相关基因(VTG1,VTG2和ERα)的转录水平。结果显示,暴露于E2(0.25μg/L),o,p′-DDT(100μg/L)与TAM(10,50,250μg/L)的二元混合物组可致斑马鱼的畸形率上升、孵化率下降、孵化时间延长,混合暴露组与单独暴露组差异显著(P0.05)。例如当E2浓度为0.25μg/L,TAM浓度为50μg/L,混合暴露组孵化率为57.2%,显著低于单独暴露于E2的82.5%以及单独暴露于TAM的90.4%。在胚胎发育形态学水平上,未观察到二元混合物组繁殖毒性明显减低的现象;在基因转录水平上,TAM对雌激素并不是单纯的拮抗作用,其作用随暴露浓度不同而有所改变。实验表明,抗雌激素TAM与雌激素E2及DDT的混合暴露提高了对斑马鱼的毒害作用。     

不同抗生素和防腐剂对小球藻Chlorella sorokiniana细胞生长的影响

[目的]分析不同抗生素和防腐剂对小球藻Chlorella sorokiniana细胞生长的影响,筛选出适宜的抗生素和防腐剂种类及其剂量,为建立小球藻C.sorokiniana无菌培养体系提供参考依据.[方法]在HSM培养基中分别添加10、20、40、60、80和100μg/mL抗生素,包括氯霉素、链霉素、青霉素、庆大霉素和头孢噻肟,以及山梨酸钾(50、100、150和200μg/mL)、乳酸钠(0.5%、1.0%和2.0%)、富马酸二甲酯(0.1、0.5、1.0、5.0、10.0、25.0和50.0μg/mL)等防腐剂,培养3 d后测定小球藻C.sorokiniana的细胞密度、叶绿素含量及光系统Ⅱ最大光化学量子产量(Fv/Fm).[结果]添加10~100μg/mL青霉素或10~80μg/mL头孢噻肟对小球藻C.sorokiniana细胞密度、叶绿素含量和Fv/Fm的影响均不显著(P>0.05,下同);添加100μg/mL头孢噻肟会抑制藻细胞生长,抑制率为18.89%,并引起叶绿素含量和Fv/Fm极显著下降(P<0.01,下同).氯霉素、链霉素和庆大霉素等蛋白质合成抑制类抗生素对小球藻C.sorokiniana细胞的毒性较强,高于10μg/mL的链霉素和庆大霉素及高于20μg/mL的氯霉素均极显著抑制藻细胞生长,对应的叶绿素含量和Fv/Fm也极显著下降.3种防腐剂中,山梨酸钾对小球藻C.sorokiniana细胞生长无显著影响,添加200μg/mL山梨酸钾还会促进细胞叶绿素含量增加;乳酸钠对小球藻C.sorokiniana细胞有一定的毒性作用,其藻细胞密度、叶绿素含量和Fv/Fm随添加浓度增加而降低;添加0.1~10.0μg/mL富马酸二甲酯不影响小球藻C.sorokiniana的细胞密度及叶绿素含量,但Fv/Fm极显著下降.[结论]建立小球藻C.sorokiniana无菌培养体系时宜选用青霉素和头孢噻肟为抗生素、山梨酸钾为防腐剂,其推荐使用浓度分别为青霉素100μg/mL、头孢噻肟80μg/mL、山梨酸钾200μg/mL.     

罗非鱼与斑马鱼幼鱼肠内植物乳杆菌代谢比较研究

为比较外源添加植物乳杆菌在罗非鱼、斑马鱼幼鱼肠内的代谢情况,用104cfu/m L、105cfu/m L、106cfu/m L及107cfu/m L 4个浓度植物乳杆菌JCM1149分别浸浴罗非鱼、斑马鱼幼鱼3 d后取全肠,另外用107cfu/m L植物乳杆菌JCM1149分别浸浴罗非鱼、斑马鱼幼鱼7 d,在浸浴结束后0 h、4 h、12 h、1 d、2 d、3 d、4d、5 d取全肠。将各肠道样本匀浆处理涂板计数,比较罗非鱼与斑马鱼幼鱼肠内植物乳杆菌的代谢情况。结果显示,浸浴3 d后,对比不同浓度下肠内植物乳杆菌绝对丰度变化,当浓度大于105cfu/m L,罗非鱼肠内植物乳杆菌绝对丰度无显著性差异,然而,斑马鱼肠内植物乳杆菌绝对丰度随浸浴浓度增加而显著升高(P0.05);以107cfu/m L浸浴7 d后,罗非鱼与斑马鱼肠内植物乳杆菌均显著降低(P0.01),其中斑马鱼表现更为迅猛,24 h时降低2个数量级,罗非鱼则只降低1个数量级。上述结果表明,植物乳杆菌鱼类肠内代谢存在明显的宿主差异性。     

眼点拟微绿球藻养殖过程中细菌污染的治理方法

[目的]以进入中国饲料原料目录的眼点拟微绿球藻为研究对象,研究其在户外自然培养过程受到细菌污染时的污染治理方法及方法的应用。[方法]在硫酸庆大霉素、四环素、青霉素、红霉素和氯霉素为代表的5大类抗生素中筛选最佳的抗生素种类,并对藻液中抗生素残留进行氧化、紫外方法单独使用或结合使用等处理方法的研究。[结果]综合抗生素对藻细胞本身的影响和对细菌的治理效果结果,硫酸庆大霉素治理细菌效果最优,其次为四环素;红霉素对细菌无明显抑制作用;青霉素和氯霉素对藻细胞生长有明显的抑制作用。去除残留庆大霉素的有效方法为:在不含藻细胞的水体中可单独通入2 h的臭氧或加入100 mg/L高浓度有效氯溶液的方法可将硫酸庆大霉素去除95%以上,该方法可用作养殖清液或废液中硫酸庆大霉素的处理方法;在藻液中可使用15 mg/L的有效氯+紫外照射0.5 h的组合方法联合处理形式效果佳,藻液中的硫酸庆大霉素去除率在90%以上;藻细胞生长仅在初期受到轻微抑制作用,但细胞性状很快得到恢复,总体藻细胞的性状基本未受到明显的影响。[结论]针对户外眼点拟微绿球藻养殖过程中细菌污染可以使用硫酸庆大霉素进行治理,并可利用15 mg/L有效氯+紫外照射0.5 h将残留在藻液中的庆大霉素较好地去除,上述2种方法的结合使用可以保证户外养殖的持续进行,为眼点拟微绿球藻的规模化稳定养殖提供一种污染治理技术支撑,有利于该藻株的产业化进程。     

毛木耳958对4种抗生素的敏感性研究

[目的]检测毛木耳958对青霉素、硫酸链霉素、制霉菌素和卡那霉素4种抗生素的敏感性,以寻找适合原生质体融合育种的抗性筛选标记。[方法]以毛木耳958为试验材料,在PDA培养基中加入不同浓度的抗生素,测定菌丝生长速率、菌落形态特征和锁状联合菌丝数量。[结果]适宜浓度的青霉素和硫酸链霉素对毛木耳958菌丝生长都有显著的促进作用,而制霉菌素和高浓度的卡那霉素对菌丝生长有明显的抑制作用;4种抗生素对毛木耳958菌落形态特征影响较小;青霉素、制霉菌素和卡那霉素高于300μg/m L时,毛木耳958锁状联合菌丝比率呈明显的下降趋势,硫酸链霉素对其无显著作用。[结论]毛木耳958对制霉菌素和高浓度的卡那霉素具有较强的敏感性,做筛选标记时控制好抗生素的浓度,尽量减少其对锁状联合菌丝比率的影响。     

灭多威对斑马鱼胚胎抗氧化防御系统的影响

为探究灭多威对斑马鱼胚胎抗氧化防御系统的影响及氧化损伤效应,将受精后6h内的斑马鱼胚胎暴露在浓度为0、2、20、200 μg·L^-1的灭多威溶液中,分别在24、48、72、96h时测定斑马鱼体内超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽还原酶（GR）、还原型谷胱甘肽（GSH）、氧化型谷胱甘肽（GSSG）的活性及丙二醛（MDA）的含量。暴露于灭多威后,SOD活性呈现先降低后升高再降低的趋势,各浓度处理组与对照组差异显著（P<0.05）;CAT活性表现为先被诱导后抑制减弱的效应,其中20、200μg·L^-1处理组CAT活性显著高于对照组（P<0.05）;GR、GSH、GSSG活性呈现先升高后降低的趋势;与对照组相比,各浓度处理组斑马鱼胚胎体内MDA含量增加,呈先增加后减少再增加的趋势。灭多威对斑马鱼胚胎具氧化应激效应,造成鱼体内抗氧化防御因子活性水平及MDA含量发生改变,干扰抗氧化防御系统正常工作,具有氧化损伤效应。     

PCB_(153)对半滑舌鳎的急性毒性及抗氧化酶活性的影响

为探讨PCB_(153)对半滑舌鳎幼鱼的急性毒性及抗氧化力影响,设定4.00、11.31、32.00、90.50、256μg/L 4个PCB_(153)质量浓度梯度进行96 h急性暴露试验;根据其结果设定1、2、5μg/L 3个PCB_(153)质量浓度梯度进行96 h慢性暴露试验,测定半滑舌鳎肌肉中的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽巯基转移酶(GST)活性及脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量。结果显示,PCB_(153)对半滑舌鳎的96 h LC_(50)为9.28μg/L,其安全质量浓度为0.928μg/L,PCB_(153)对半滑舌鳎为剧毒物质。PCB_(153)暴露24 h或48 h时,半滑舌鳎SOD和CAT活性均呈现先诱导后抑制趋势(P0.01),CAT活性诱导有延迟情况。1μg/L处理组MDA含量和GST活性分别表现为先降低后升高和先抑制后诱导的趋势,而2、5μg/L处理组MDA含量和GST活性分别表现为先升高后降低和先诱导后抑制的趋势。