整合质粒对苏云金芽胞杆菌转化的研究

苏云金芽胞杆菌(Bt)是一种革兰氏阳性菌,可产生具有杀虫活性的伴胞晶体蛋白,作为一种全球性生物农药广泛应用于农林害虫的防治.电脉冲法是细菌质粒转化中比较常用的一种方法,特别是在革兰氏阳性菌以及很多用常规方法不能转化的细胞,用电脉冲法可以成功转化[1].所以,电脉冲法目前已作为一种高效、简便和省时的方法,被用于Bt的遗传改良中.     

耕作方式和秸秆还田对稻田表层土壤微生物群落的短期影响

土壤微生物作为土壤生态系统的重要组成部分,对农艺措施响应敏感,为此采用磷脂脂肪酸(PLFA)法研究短期耕作和小麦秸秆还田对稻田表层土壤(0～5cm)微生物群落结构和多样性的影响。2011年在湖北省均川镇,设置了免耕(NT)和翻耕(PT)两种耕作方式以及6000kg·hm-2(SR3)、4000kg·hm-2(SR2)、2000kg·hm-2(SR1)、0kg·hm-2(SR0)四种还田量试验。为期两年的试验结果表明,试验田土壤共检测出了21种不同的磷脂脂肪酸类型,以iC15:0、C16:0、10Me17:0、Cyc19:0为主,分别占总磷脂脂肪酸的9.6%～11.6%、16.1%～19.0%、8.7%～13.0%和7.6%～9.8%,各处理土壤总磷脂脂肪酸含量在25.35～43.06nmol·g-1波动;免耕显著提高了表层土壤革兰氏阳性菌/革兰氏阴性菌,显著降低真菌和革兰氏阴性菌的生物量以及真菌/细菌、单不饱和脂肪酸/饱和脂肪酸和Shannon-Winner指数;秸秆还田显著提高了细菌、真菌、革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的生物量以及真菌/细菌、Shannon-Winner指数、Simpson指数和Margalf丰度指数。因此,秸秆还田提高了表层土壤微生物生物量和微生物多样性,短期免耕主要影响微生物群落结构。     

将重组质粒高效导入农杆菌的电脉冲转化研究

利用电脉冲法将重组质粒PBI121/α-PAP导入农杆菌LBA4404,获得3.5×106转化子/μ g质粒DNA的转化效率.探讨了不同电激条件及农杆菌细胞生长状态对转化率的影响.结果表明,农杆菌LBA4404电脉冲转化的最适电激条件为电场强度18kv/cm,电容25μF,电阻200Ω;农杆菌最适细胞生长状态为OD600＝0.4～0.5.在一定范围DNA浓度与转化率成正比关系.     

电击法转化菜豆原生质体研究

以菜豆叶肉细胞原生质体为受体研究了以NPT-Ⅱ为外源基因的电脉冲转化方法,并对脉冲电压、宽度等进行了测定。从862块电脉冲处理的原生质体愈伤组织中,筛选出具有Km~γ的转化愈伤组织14块。转化率为1.5%。     

不同条件下转化BHK-21细胞冻存复苏效果比较

为寻找出一种简单有效的转化BHK-21细胞冻存方法,对转化BHK-21细胞用2种冻存液和3种方法进行冻存,复苏后用台盼蓝拒染和生长曲线法检测细胞成活率。结果表明,采用2种冻存液,细胞复苏成活率无明显的差别,方法1为90%以上,方法2和3均为90%以下。方法1可用于转化BHK-21细胞冻存。     

鸭疫里氏杆菌病的诊治

一、病原学 鸭疫里氏杆菌为革兰氏阴性小杆菌,不形成芽胞．不运动。纯培养菌落涂片可见菌体呈单个、成对或呈丝状,菌体大小不一．0．2～0．4微米×1～5微米．用瑞特氏法染色时,菌体两端浓染,呈两极染色特性．用印度墨汁染色可见到荚膜。     

10种植物精油对蓝莓病原菌的体外抑菌活性初筛（英文）

为了开发应用于蓝莓保鲜的天然保鲜剂,采用牛津杯法和试管二倍稀释法对10种植物精油的抑菌活性进行鉴定,研究了植物精油对2种代表性革兰氏细菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌)及蓝莓中3种有害真菌(链格孢霉、指状青霉、灰霉)的抑制能力。结果显示:肉桂精油、百里香精油对革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌)抑制效果较好,肉桂精油、马尾松精油对革兰氏阴性菌(大肠杆菌)有较好抑制;10种植物精油中有7种精油对3种真菌均有抑制作用,其中肉桂精油、丁香精油、八角精油、百里香精油等精油均有较强的抑真菌能力;其中,肉桂精油对真菌以及革兰氏阴性和阳性菌均有强烈抑制效果,最小抑菌浓度在0.039 1～0.156 0μL/m L之间;植物精油对真菌的抑菌效果优于细菌,可以用肉桂精油作为复配基油,添加其他精油应用于蓝莓的天然保鲜,以达到更好的抑菌防腐效果。     

几种基因转移技术在小麦上的应用

采用基因枪法、电脉冲法、农杆菌介导法和浸泡法将外源基因质粒ｐＺＦＸ２导入小麦细胞中,经卡那霉素筛选,获得了抗生的愈伤组织和再生植株。通过此项试验,研究了不同方法的转化效果,摸索了适宜的小麦基因转化条件。     

电穿孔法用于大肠杆菌和苏云金杆菌的转化及质粒消除

利用电脉冲交质粒ｐＨＴ３１０１和ｐＨＥ－４Ｄ分别转入大肠杆菌和苏云金杆菌,结果显示大肠杆菌ＤＮＡ的转化率为１０＾４－１０＾５．μｇ＾－１,苏云金杆菌的ＤＮＡ的转化率为１０＾２－１０＾３．μｇ＾－１,同时利用该法消除Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ菌株ＴＧ１和Ｂｔ菌株ＩＳＰ７８／１１中的ｐＨＴ３１０１质粒,消除率分别为８８．６％和６６．４％。比较了转化和质粒消除的条件并构建了一个工程菌。     

10种植物精油对蓝莓病原菌的体外抑菌活性初筛

为了开发应用于蓝莓保鲜的天然保鲜剂,采用牛津杯法和试管二倍稀释法对10种植物精油的抑菌活性进行鉴定,研究了植物精油对2种代表性革兰氏细菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌)及蓝莓中3种有害真菌(链格孢霉、指状青霉、灰霉)的抑制能力。结果显示:肉桂精油、百里香精油对革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌)抑制效果较好,肉桂精油、马尾松精油对革兰氏阴性菌(大肠杆菌)有较好抑制;10种植物精油中有7种精油对3种真菌均有抑制作用,其中肉桂精油、丁香精油、八角精油、百里香精油等精油均有较强的抑真菌能力;其中,肉桂精油对真菌以及革兰氏阴性和阳性菌均有强烈抑制效果,最小抑菌浓度在0.039 1~0.156 0μL/mL之间;植物精油对真菌的抑菌效果优于细菌,可以用肉桂精油作为复配基油,添加其他精油应用于蓝莓的天然保鲜,以达到更好的抑菌防腐效果。