猪圆环病毒2型ORF2基因在Sf9细胞中表达及免疫原性研究

利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达猪圆环病毒2型(PCV2)核衣壳(Cap)蛋白。将优化合成的PCV2 ORF2基因克隆到杆状病毒转移载体p Fast HTA中,并将鉴定正确的重组质粒p Fast HTA-Cap2转化至大肠杆菌感受态细胞,经蓝白斑筛选得到含有目的基因的重组杆状病毒质粒(r Bac-Cap2),转染至Sf9细胞,获得重组杆状病毒,对感染重组杆状病毒的细胞培养物进行重组蛋白的表达,进行SDS-PAGE和Western blot分析,并对表达的重组蛋白进行小鼠免疫试验及其病毒血清中和试验。SDS-PAGE分析表明,优化合成的PCV2 ORF2基因得到表达,蛋白分子质量大小为33 ku;Western blot证实重组蛋白能够识别抗PCV2阳性血清,表明重组蛋白具有反应原性;小鼠免疫试验结果显示,该蛋白能刺激机体产生特异性抗体,具有较好的免疫原性;病毒血清中和试验证实,抗PCV2 Cap血清抗体具有中和病毒的活性,中和效价为1∶42。该蛋白在杆状病毒系统中的成功表达,为PCV2感染的诊断及亚单位疫苗的研制奠定基础。     

表达CSFV E2线性表位的PCV2病毒样颗粒的制备及免疫原性研究

为制备携带猪瘟病毒(CSFV) E2蛋白的猪圆环病毒2型(PCV2)病毒样颗粒(VLP),并在小鼠体内评价其免疫原性,本研究采用PCR扩增PCV2 Cap基因,利用重叠延伸PCR将PCV2 Cap蛋白的诱饵表位(aa169～aa180)替换成编码两个连续的CSFV E2蛋白线性表位(aa829～aa837)的融合基因(PCV2-Cap^169～180-E2^829～837)经测序鉴定正确后克隆至载体pET-32a(+)中,构建重组质粒p-Cap-E2并采用PCR方法鉴定正确后转化大肠杆菌BL21 (DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白(PCV2-Cap-E2),采用改良的镍亲和层析法纯化重组蛋白,并利用SDS-PAGE与western blot对重组蛋白的表达形式及反应原性鉴定;利用透射电镜观察纯化的重组蛋白能否形成VLP;利用本研究制备的VLP、PCV2及CSFV商品化疫苗分别免疫小鼠,采用ELISA方法检测免疫后不同时间小鼠体内的抗体水平及细胞因子含量。SDS-PAGE结果显示,在49 ku处出现目的条带,且重组蛋白主要以可溶性形式表达,纯化...     

PCV2-HPS二联亚单位疫苗对小鼠免疫保护效果的评价

为评价猪圆环病毒2型-副猪嗜血杆菌二联亚单位疫苗(以下简称二联苗)对小鼠的免疫保护效果，本研究将猪圆环病毒2型(PCV2) cap基因克隆至p MAL-c5X载体中，并通过原核系统表达了重组Cap蛋白(rCap)。通过western blot检测显示原核表达的r Cap与PCV2单克隆抗体发生特异性结合，表明r Cap具有良好的反应原性。利用本研究室已经纯化并保存的副猪嗜血杆菌(HPS)重组蛋白r Cdt B、r Afua和r OPPA，与r Cap蛋白以及佐剂ISA201VG混合乳化后制成PCV2-HPS二联亚单位疫苗，疫苗中各蛋白(rCdtB、r Afua、r OPPA、r Cap)浓度均为50μg/300μL。将60只6周龄BALB/c小鼠随机均分成免疫组和对照组，采用背部多点注射方式免疫，首免后间隔14 d二免。一免后以及二免后的14 d分别通过颌下采血方法采血，通过间接ELISA方法检测各组小鼠血清中的特异性抗体，结果显示，二免后14 d，免疫组小鼠血清中CdtB、OPPA、Afua抗体水平分别与PBS+ISA201VG对照组和免疫之前比较均极显著提高(P<0.0001...     

猪圆环病毒2a/2b亚型病毒株灭活疫苗及其重组Cap蛋白亚单位疫苗的交互免疫实验

为评价猪圆环病毒(PCV)2a/2b两种基因型病毒株及其重组Cap蛋白(rCap)之间的交互免疫,本研究采用PCV2a-LG株和PCV2b-YJ株制备了2种病毒灭活疫苗,及其重组杆状病毒表达的2种Cap蛋白(PCV2a-rCap和PCV2b-rCap)亚单位疫苗.选用8周龄BALB/c鼠165只,随机分成11组,每组15只,用上述4种疫苗各免疫2组,以PCV2a或PCV2b株攻毒.攻毒后,所有鼠均未见肉眼可见的临床症状和病理变化.采用IPMA法检测抗体,4种疫苗于免疫第3周抗体转阳,第5周抗体效价达到1:200～1:800倍,其中PCV2a-rCap免疫组抗体效价最高.2种灭活苗和PCV2a-rCap免疫组攻击同型或异型病毒株均可以获得完全保护.以PCV2a和PCV2b各为指示病毒对病毒抗血清和rCap蛋白抗血清进行交叉中和试验,同型病毒株与同型血清的中和抗体效价均高于异型病毒株.病理观察显示,免疫鼠均未见明显病理变化,攻毒对照鼠肺脏出现一定程度的病理损伤.本研究表明,病毒灭活疫苗及其rCap亚单位疫苗PCV2a和PCV2b可提供交叉保护.     

新疆天康将推出三款猪用疫苗

<正>猪圆环病毒2型重组杆状病毒亚单位灭活疫苗由新疆天康畜牧生物技术股份有限公司技术中心研制的猪圆环病毒2型重组杆状病毒亚单位灭活疫苗,是应用分子生物学技术将猪圆环病毒2型Cap基因重组于杆状病毒内,在昆虫细胞上培养表达PCV2-r Cap蛋白而制成的亚单位疫苗。该疫苗与市场使用的猪圆环病毒2型全病毒灭活疫苗相比,具有极其显著的特点:(1)以当前的优势基因型毒株PCV2b基因序列做参考,经杆状病毒系统表达出类似病毒样颗粒(VLPs)的蛋白,抗原的     

猪流感病毒多表位抗原的小鼠黏膜免疫试验

为探讨经黏膜途径免疫接种猪流感病毒(SIV)多肽疫苗的可行性,选择STV主要结构蛋白血凝素(HA)的T、B抗原表位,将多个表位片段串联,定向克隆到原核表达载体pET-30a(+)中,对串联表达的重组猪流感病毒蛋白SIV-ep1、SW-ep2、SIV-el2进行了小鼠免疫试验。重组蛋白以包涵体形式表达,经洗涤定量后,采用灌胃途径免疫6周龄KM小鼠,检测免疫小鼠抗体及细胞免疫水平。结果发现三免后各免疫组血清IgG抗体与PBS对照组差异极显著(P<0.01);黏膜分泌型IgA抗体,所有免疫蛋白组与PBS组差异均极显著(P<0.01);细胞免疫检测,所有免疫组小鼠外周血T淋巴细胞增殖明显;猪流感病毒血凝抗体检测,SIV-ep1免疫组、SIV-ep2免疫组、SIV-ep1与LT蛋白免疫组抗SIVH1N1亚型HI效价达1:1024,SIV-el2蛋白免疫组HI效价达1:512。结果表明,猪流感病毒重组多表位抗原灌胃免疫小鼠,能产生理想的黏膜免疫抗体和血清抗体。     

杆状病毒表达系统融合表达猪圆环病毒2型Cap蛋白与口蹄疫病毒VP1蛋白及免疫原性评估

猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)Cap蛋白是病毒的主要结构蛋白,能诱导宿主产生特异性免疫应答。口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)VP1蛋白是病毒的主要免疫原性蛋白,能刺激机体产生中和抗体。利用杆状病毒表面展示系统,将这2种病毒蛋白与猪CD40配体(CD40 ligand,CD40L)进行融合表达并展示在杆状病毒表面,构建了rv Ac-Cap、rv Ac-VP1和rv Ac-Cap-VP1 3种重组杆状病毒。通过SDS-PAGE和Western blotting检测3种重组杆状病毒感染的Sf9细胞总蛋白,证明3种融合蛋白成功表达。纯化的重组杆状病毒颗粒以1×108pfu/只的剂量免疫接种BALB/c小鼠,通过间接ELISA检测血清中Cap和VP1的抗体浓度,证明表面展示有Cap和VP1的重组杆状病毒能激发小鼠产生较高水平的抗体,与PCV2和FMDV商品化疫苗免疫组的抗体浓度差异不显著(P0.05),表明该重组杆状病毒具有较好的免疫原性。     

猪圆环病毒2型衣壳蛋白优势B细胞表位重组蛋白免疫原性研究

猪圆环病毒2型(PCV-2)衣壳蛋白(Cap)是研制基因工程疫苗和血清抗体检测方法的主要候选抗原。为筛选免疫原性强的Cap抗原表位,将定位在Cap上的6个B细胞线性表位的编码基因序列重新组合,命名为R1234、R1235、R1236、R2345、R2346和R3456,然后克隆至pET32a原核表达载体,转化到大肠埃希菌中进行诱导表达。通过对表达和纯化条件的优化,最终获得6个多抗原表位串联体的重组蛋白。Western blot和间接ELISA结果显示,6组重组表位蛋白均能被PCV-2阳性血清特异性识别,具有良好的反应原性。将其与完整Cap分别免疫Balb/c小鼠,检测免疫后血清中特异性抗体和细胞因子水平以及脾脏淋巴细胞中CD4^+和CD8^+T淋巴细胞的比例。结果表明,R2346组合刺激机体产生的特异性抗体和细胞因子IFN-γ、IL-4的水平明显高于其他组,脾脏淋巴细胞中CD4^+和CD8^+T淋巴细胞含量与对照组相比显著增加(P<0.05),说明该重组蛋白能够刺激体液免疫和细胞免疫反应。因此,筛选获得的R2346重组表位蛋白可以作为研制PCV-2多表位基因工程疫苗和血清抗体诊断方法的候选抗原,用于PCV-2的预防和控制工作中。     

猪圆环病毒2型山西流行株Cap蛋白可溶性表达与免疫原性分析

为建立猪圆环病毒2型(PCV2)山西流行毒株Cap蛋白的原核可溶性表达体系,并分析比较重组蛋白与2种商品化基因工程Cap亚单位疫苗在小鼠体内不同阶段的免疫原性,本试验以PCV2e SXJX株(GenBank登录号：MH922991.1)的ORF2基因为基础,根据大肠埃希菌密码子偏性优化序列,将其插入原核表达载体pET-28a-c(+)中,鉴定为阳性后转入宿主菌BL21(DE3)中,经优化表达条件后,对超声破碎后的菌体上清进行纯化,分析纯化后产物的纯度和抗原性,并利用负染透射电镜观察重组Cap蛋白体外自组装成病毒样颗粒(VLPs)。分别将同等免疫剂量的PCV2e重组Cap蛋白和2种商品化PCV2基因工程亚单位疫苗免疫健康BALB/c雌鼠,应用ELISA方法检测不同阶段小鼠体内特异性抗体的水平。结果显示：重组Cap蛋白可在大肠埃希菌中表达,以完全可溶性形式存在于菌体超声波破碎后的上清中,表达产物纯化效果良好,并能被PCV2单克隆抗体识别;透射电镜观察结果发现,表达的重组Cap蛋白可以自组装成约20 mm大小的VLPs;动物免疫试验结果显示,在首免后第21天PCV2e Cap试验组抗体水平显...     

猪圆环病毒2a和2b双亚型Cap蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及对小鼠的免疫效果试验

试验通过PCR分别获得PCV2a和PCV2b的Cap基因,顺次克隆入pFast Bac-Dual载体质粒,获得携带2a和2b型Cap基因的重组质粒Cap-pFast Bac Dual,转化E.coli DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑筛选获得重组杆粒Cap-Bacmid,以脂质体法将重组杆粒转染Sf9细胞,获得表达Cap蛋白的重组杆状病毒。PCR能从重组杆状病毒中扩增出相应大小的Cap基因片段,蛋白电泳和ELISA法鉴定表明,Cap蛋白成功表达。采用重组杆状病毒肌内注射免疫小鼠(每只相当于8μg Cap蛋白),免疫后14 d血清中产生PCV2抗体,免疫后28 d用PCV2a和PCV2b强毒株攻击,荧光定量PCR法检测结果显示,免疫组小鼠脾脏中PCV2基因组拷贝数极显著低于未免疫对照组。结果表明,PCV2a和PCV2b双亚型重组Cap蛋白能开发成猪圆环病毒防控的新型疫苗。     

猪圆环病毒2型免疫学研究进展

猪圆环病毒2型(PCV2)感染猪体后,可引发猪体内相应的细胞免疫反应和体液免疫反应,同时可造成免疫系统损伤,其中包括CD4+/CD8+/MHC II T细胞和B细胞显著减少,相关细胞因子γ-干扰素、IL-a和IL-10增加,产生病毒中和抗体等。人们已鉴定了PCV2衣壳蛋白的多个B/T细胞抗原表位,其中包括PCV2特异的氨基酸残基231～233和195～202和PCV1和PCV2共有的氨基酸残基156～162和175～192位;T细胞抗原表位包括Rep蛋白的第81～100位和201～220位氨基酸和ORF3蛋白的第31～50位氨基酸。在PCV2疫苗研究中,灭活疫苗和亚单位疫苗成为现时养猪生产中的常用疫苗、病毒活载体疫苗和DNA疫苗也成为疫苗研究的热点。     

猪圆环病毒2型(PCV2) Cap基因原核表达及抗血清制备

Cap蛋白作为猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)的重要结构蛋白,可以实现诱导机体免疫保护。以本实验室分离保存的PCV2毒株的Cap基因作为模板,设计特异性引物进行PCR扩增,并将该PCR产物连接至原核表达载体pET-28a上,获得重组质粒pET-28a-PCV2 Cap。将验证正确的菌种接入HB-pET自诱导培养基,过夜培养,SDS-PAGE及Western blot验证其表达,可获得28 000左右的目的蛋白。利用亲和层析技术纯化PCV2 Cap蛋白,免疫BALB/c小鼠获得小鼠阳性血清,通过ELISA方法检测其效价,并用Western blot验证其活性。结果显示,本试验成功应用大肠杆菌表达了PCV2 Cap蛋白,表达的蛋白具有免疫原性,并获得小鼠阳性血清,为PCV2 Cap蛋白的功能研究、鉴定、抗体及疫苗研制和病原检测奠定理论基础。     

流行性乙型脑炎病毒E蛋白多表位肽在毕赤酵母中分泌表达及其免疫原性研究

为构建流行性乙型脑炎病毒(JEV)E蛋白多表位疫苗,本研究将人工合成的优化后的E蛋白多表位肽(MP)序列克隆入酵母表达载体p PICZα-A,构建分泌型重组酵母表达质粒p PICZ-MP,经SacⅠ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母X-33,阳性重组子经甲醇诱导表达,亲和层析纯化重组蛋白(rMP)。通过测定rMP免疫小鼠的抗体水平、抗体亚型、中和抗体和CTL,以评价该多表位疫苗在小鼠模型上的免疫原性。结果表明:成功构建了表达JEV E蛋白多表位抗原的重组酵母菌株X33(pPICZ-MP),能分泌表达多表位肽r MP。纯化后的r MP免疫小鼠产生了较强的体液免疫和细胞免疫反应,其中和抗体水平、CTL活性均与活病毒疫苗组差异不显著(p0.05),且能保护小鼠免受致死量JEV的攻击。构建的JEV E蛋白多表位疫苗具有良好的免疫原性,能够刺激小鼠产生特异性的细胞免疫和体液免疫应答反应,为流行性乙型脑炎多表位疫苗研制提供新的思路。     

猪圆环病毒pSCA-Cap-T2A-Rep重组载体的构建及小鼠免疫试验

克隆猪圆环病毒1型(PCV1)的Rep基因和猪圆环病毒2型(PCV2)Cap基因,利用T2A片段进行连接,并插入到载体pSCA,构建pSCA-Cap-T2A-Rep重组质粒。转染PK-15细胞后通过Western blot技术检测目的蛋白的表达。大量提取构建的重组质粒后进行小鼠接种试验。56只小鼠随机分为8组,每组7只。第1,2,3组为质粒注射组,注射质粒质量分别为50,100,200μg/只;第4～6组分别为与1～3组注射相同剂量质粒+免疫佐剂对应组;第7组为注射生理盐水对照组;第8组为注射生理盐水+佐剂对照组。首次接种后14 d进行第2次接种,处理方法同第1次。在首次接种后0,14,21,28 d从试验小鼠眼静脉丛采血,ELISA方法检测血清中PCV2 Cap蛋白抗体。结果显示,pSCA-Cap-T2A-Rep重组质粒接种小鼠血清中Cap蛋白特异性抗体在接种后14～28 d均为阳性;质粒+免疫佐剂组比质粒注射组小鼠特异性抗体水平显著升高。结果表明,pSCA-Cap-T2A-Rep重组质粒在试验小鼠中产生有效的特异性抗体,为进一步优化免疫方法、在试验猪上的应用及猪圆环病毒核酸疫苗的研制提供了依据。     

PPVVP2基因与PCV2ORF2不同抗原表位重组真核表达载体的构建及其免疫原性

为了研究PCV2ORF2的不同抗原表位重组PPVVP2基因真核表达质粒的体外表达情况与免疫原性,分别以PCV2SC株和PPVSC-1株为模板,扩增PCV2ORF2的抗原表位基因A、B、c（A：117～131aa,B：157～183aa,C：165～200aa）和PPVVP2基因。将A、B、C基因分别与PPVVP2基因串联,并插入到pCI真核表达载体中,构建了能同时表达PPVVP2蛋白和PCV20RF2抗原表位的重组质粒pCI—A—VP2、pCI13-Vp2、pCI—C—VP2。将重组真核表达质粒转染MDBK细胞,用间接免疫荧光试验检测各个质粒在细胞中的表达情况;并将其免疫小鼠,采用MTT比色法、流式细胞术和ELISA法检测免疫效果。结果显示,3种重组表达质粒转染细胞48h后都能检测到较强的免疫荧光;免疫小鼠后14～42d诱导的T淋巴细胞转化效率、CD4＋／CD8＋细胞比值以及PPV和PCV2抗体均显著高于对照组,且pCI—13-VP2免疫效率高于其他组。该结果表明PCV2ORF2上157～183aa抗原表位在3个抗原表位中抗原性最强,可作为PCV2与其他病毒二联疫苗研究的主要抗原表位。     

猪圆环病毒Cap蛋白的分泌表达及其免疫原性研究

探索利用杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac expression system)分泌表达猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白及将其作为亚单位疫苗的应用价值。将PCV2 Cap基因克隆到已插入蜂毒信号肽(Melittin)的转移载体pFastBacⅠ中,将鉴定正确的重组质粒(pFastBAC-Cap)转化至DH10Bac大肠杆菌感受态细胞,经抗性及蓝白斑筛选得到含Cap基因的重组杆状病毒DNA(Bacmid-Cap),转染提取的Bacmid-Cap DNA转染至sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒(rBac-Cap),应用无血清培养的High Five细胞进行重组蛋白的表达及条件优化。重组蛋白通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分析(SDS-PAGE)证明:在重组杆状病毒感染的High Five昆虫细胞中获得分泌表达,并可产生较高浓度的重组蛋白;Western blotting结果显示:重组蛋白可被猪PCV2的特异性抗体所识别,表明重组蛋白具有反应原性;应用重组蛋白免疫BALB/C小鼠试验结果显示:该蛋白可刺激小鼠产生较高水平的特异性抗体。该研究成功分泌表达了PCV2 Cap蛋白,该蛋白能够刺激机体产生免疫应答,为PCV2亚单位疫苗的研制打下基础。     

PPV VP2基因与PCV2 ORF2不同抗原表位重组真核表达载体的构建及其免疫原性

为了研究PCV2ORF2的不同抗原表位重组PPV VP2基因真核表达质粒的体外表达情况与免疫原性,分别以PCV2SC株和PPV SC-1株为模板,扩增PCV2ORF2的抗原表位基因A、B、C(A:117～131aa,B:157～183aa,C:165～200aa)和PPV VP2基因。将A、B、C基因分别与PPV VP2基因串联,并插入到pCI真核表达载体中,构建了能同时表达PPV VP2蛋白和PCV2ORF2抗原表位的重组质粒pCI-A-VP2、pCI-B-VP2、pCI-C-VP2。将重组真核表达质粒转染MDBK细胞,用间接免疫荧光试验检测各个质粒在细胞中的表达情况;并将其免疫小鼠,采用MTT比色法、流式细胞术和ELISA法检测免疫效果。结果显示,3种重组表达质粒转染细胞48h后都能检测到较强的免疫荧光;免疫小鼠后14～42d诱导的T淋巴细胞转化效率、CD4+/CD8+细胞比值以及PPV和PCV2抗体均显著高于对照组,且pCI-B-VP2免疫效率高于其他组。该结果表明PCV2ORF2上157～183aa抗原表位在3个抗原表位中抗原性最强,可作为PCV2与其他病毒二联疫苗研究的主要抗原表位。     

重组猪圆环病毒2型Cap蛋白在毕赤酵母中的表达及免疫原性研究

为了获得在体外表达的猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)Cap蛋白,研究其免疫原性,试验根据GenBank公布的国内PCV2-Cap蛋白基因序列特点,结合毕赤酵母密码子偏好对Cap基因进行优化,合成目的基因后,构建分泌型表达载体pPIC9K-Cap,转化毕赤酵母GS115后,经诱导表达获得重组Cap蛋白。重组蛋白以50μg/只的剂量连续3次免疫豚鼠后检测抗体水平。结果表明:含有PCV2-Cap基因的质粒成功转化到酵母菌基因组中,重组酵母菌株在30℃,经1%甲醇诱导表达96 h后,培养液中能够检测到33 ku的重组蛋白,重组蛋白表达量为155μg/mL,占培养上清液总蛋白的9.362%,Western-blot试验结果显示重组蛋白具有良好的抗原活性。重组蛋白以50μg/只的剂量连续3次免疫豚鼠后,能够刺激豚鼠产生特异性抗体且与接种0.3头份/只剂量的市售PCV2灭活疫苗产生的抗体水平无显著差异(P0.05)。说明成功利用毕赤酵母表达系统分泌表达了PCV2-Cap蛋白,表达的重组蛋白具有良好的抗原活性。     

猪圆环病毒2型全基因组序列分析及Cap蛋白CTL表位预测

【目的】监测当前湖南省猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)流行毒株及其衣壳蛋白(capsid protein, Cap)变异情况,并预测Cap蛋白细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte, CTL)表位,为新型PCV2疫苗研制和病毒净化提供参考依据。【方法】本研究对2019-2021年于湖南省6个地区收集的17份PCV2阳性组织样品进行PCV2全基因组序列扩增及测序分析,绘制系统进化树,利用生物信息学方法分析Cap蛋白氨基酸变异情况,并预测CTL表位。【结果】系统进化树显示,获得的17株PCV2全基因组序列中,1株PCV2a、7株PCV2b和9株PCV2d。Cap蛋白氨基酸序列比对分析发现,共有16个氨基酸残基突变位点位于病毒Cap蛋白表面,且有11个突变位点参与构象型表位的形成。此外,共预测出9个PCV2 Cap蛋白潜在的CTL表位,其中4个表位(16-24、28-36、136-144和179-187位氨基酸)在GenBank的1 610株PCV2不同基因型毒株中高度保守。通过TCR-pMHC复合物3D结构对4个保守性...     

猪圆环病毒2型Cap蛋白在杆状系统中的表达与纯化

猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)基因有两个主要的开放阅读框(open reading frame,ORF)。其中,ORF2编码病毒的主要结构蛋白核衣壳蛋白(Cap)。为了在昆虫细胞中表达Cap蛋白,本研究将重组穿梭质粒Bacmid-iel-ORF2经脂质体转染至昆虫细胞中,获得重组杆状病毒。经过噬斑克隆实验,获得稳定、高效表达Cap蛋白的重组杆状病毒,病毒滴度可达到1×109 pfu/m L。免疫印迹实验表明重组Cap蛋白可与PCV2阳性血清发生特异性反应,证明该重组蛋白具有良好的免疫活性反应。本研究为提高PCV2灭活疫苗病毒滴度及免疫原性奠定了基础。