鸭疫里氏杆菌鸭源致病性大肠埃希氏菌和鸭沙门菌的RAPD研究

以4株不同血清型的鸭疫里氏杆菌、5株不同血清型的鸭源致病性大肠埃希氏菌和5株同一血清型的鸭沙门为研究对象，分别提取基因组DNA，利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对其基因组DNA进行了分析。结果，从20条随机引物中筛选出了38条能在这3种菌中有较好多态性的随机引物，8个有效引物共扩增出了102个DNA片段，其中14个菌株共有的谱带仅有1条，显示多态性的片段有101个，占99．0％；对RA的4个菌株扩增出的谱带数为51条，共同片段有12条，多态性片段39条，占76．5％；对沙门菌的5个菌株扩增出的条带数为46条，共同片段为13条，多态性片段33条，占71．79／6；对大肠埃希氏菌的5个菌株扩增出的条带数为48条，共同片段4条，多态性片段44条，占91．7％。在8条引物中进一步筛选出1条引物G12，其图谱中535bp的条带为鸭疫里氏杆菌所特有，330bp的条带为沙门菌所特有，1227bp的条带为大肠埃希氏所特有，表明G12可作为分子标记用来鉴别这3种细菌。     

血清1、2、4、5型鸭疫里默氏杆菌的RAPD

以37℃摇震培养舜口烛缸厌氧培养，从12种培养基中选择出鸭疫里默氏杆茼的最优培养基和培养条件。以血清1、2、4、5型的鸭疫里默氏杆菌代表株A1、A2、A3、A4为研究对象，培养增殖后分别提取基因组DNA，利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术，对其基因组进行了DNA分析。从20条随机引物中筛选出8条随机引物，这8条引物对4种血清型的鸭疫里默氏杆菌的扩增图谱有较好的多态性，可作为分子标记鉴别4种不同血清型的鸭疫里默氏杆菌，同时还筛选出能在4个血清型的鸭疫里默氏杆菌代表株均出现相同的特征条带，而对照茼大肠杆菌、沙门氏茼无该条带的随机引物，从而为鸭疫里默氏杆菌病的分子诊断打下了一定基础。     

美洲狼尾草不育系、恢复系及杂种F_1的RAPD分析

利用 RAPD技术对美洲狼尾草不育系 2 3A、2 3DA、85 DA,恢复系 3B- 6及其相应的 3个F1杂交种基因组 DNA进行了多态性分析 ,摸索出一套适合美洲狼尾草 DNA提取、PCR扩增方法。对随机选取的 2 7个引物进行扩增 ,结果有 5个引物扩增出多态性条带 ,其中引物S369扩增的条带不仅重复性好 ,而且清晰 ,为美洲狼尾草亲本材料及其杂交种鉴定和纯度分析提供了一种快速、准确的检测手段。     

美洲狼尾草不良系、恢复系及杂种F1的RAPD分析

利用RAPD技术对美洲狼尾草不育系23A，23DA，85DA，恢复系3B－6及其相应的3个F1杂交种基因组DNA进行了多态性分析，摸索出一套适合美洲狼尾草DNA提取，PCR扩增方法，对随机选取的27个引物进行扩增，结果有5个引物扩增出多态性条带，其中引物S369扩增的条带不仅重复性好，而且清晰，为美洲狼尾草亲本材料及其杂交种鉴定的纯度分析提供了一种快速，准确的检测手段。     

使用DNA特异基因标记--W316bp鉴定平湖王浆高产意蜂的研究初报

选择浙江平湖5个养蜂场,每个养蜂场各任取5群工蜂蛹分别提取纯化DNA,以随机引物W(5’-CGGCCCCGGT-3’)进行PCR扩增并对其扩增产物进行电泳,染色,获得平湖不同群浆意蜂的DNA多态性图谱。结果发现25个样品有5个样品的DNA多态性图谱中,代表优良浆意蜂的W316bp条带没有出现,为阴性,而其余20个样品的DNA多态性图谱中均出现了清晰的W316bp条带,为阳性。     

宁夏滩羊体大品系遗传标记的研究

研究首先采用RAPD技术,利用混合基因池(DNA pool)法,对滩羊体大品系、普通品系进行DNA多态性分析。从100种具有10个碱基的随机引物中,筛选出84种引物在滩羊群体基因组中共扩增出358条带,其中22种引物扩增产物表现为多态(占22%),且扩增出32条有差异的条带,占总带数的8．94%(32/358);62种引物的扩增产物表现为单态(占62%)。滩羊体大品系的特异性条带5个,而普通品系的特异性条带7个。这些特异标记可以用来鉴定滩羊的2个品系。滩羊体大品系和普通品系间的遗传距离为0．136±0．087,表明2个品系之间的亲缘关系很近。     

应用随机扩增多态性进行山羊致病性大肠杆菌的分子多态性分析

为了解山羊致病性大肠杆菌广西分离株的分子多态性,应用随机扩增多态性方法(RAPD)对山羊致病性大肠杆菌进行分型研究.从8条随机引物中筛选出4条能在10株大肠杆菌中具有较好多态性扩增的随机引物,4条随机引物共扩增出18条DNA片段,10个菌株无共有带谱,显示出良好的扩增多态性.菌株Nx31与Nx32曾被认为是同一菌株的两次分离,但是在RAPD分析中,两株细菌的带谱存在明显的差别,表明RAPD比传统的血清学分型具有更高的分辨性.     

五个品种(系)鸡的RAPD亲缘关系分析

本试验用DNA池法从40条随机引物中筛选出29条多态性、重复性好的引物,对贵州黄鸡、兴黔黄鸡、乌骨鸡三个培育品种(系)和地方品种兴义矮脚鸡及引进选育品种矮脚黄鸡共五个品种(系)进行随机扩增多态亲缘关系分析。结果表明,29条引物共扩增出稳定、清晰、重复性好的条带190条,其中多态性片段127条,在300bp￣3000bp之间。单个引物扩增出的RAPD条带在4￣13条之间,平均为6.55条。五个品种(系)间的亲缘关系符合它们的育种背景[1,2,3]。     

应用RAMP标记分析长白山地区中国林蛙的遗传多样性

应用随机扩增徽卫星多态性DNA（RAMP）标记技术对长白山地区中国林蛙60个个体间遗传多样性进行了分析。以便为中国林蛙种质资源的保护和利用以及物种分化研究提供基础资料。结果表明：120个RAMP引物中。有14个引物组合可扩增出清晰且具多态性的条带。这14个引物组合共扩增出107条带,其中105条具有多态性,多态条带比率为98．13％。每个引物可扩增出3～10条多态性条带,平均7．5条。多态条带比率、Shannon多样性指数（I）以及Nei氏基因多样度（h）均显示长白山地区中国林蛙具有较为丰富的遗传多样性。RAMP标记遗传相似性系数（岱）变异范围为0．4860～0．8505,平均值为0．6634,以GS平均值0．6634为闻值,可将所有供试材料划分为10类,其中大部分个体归为同一类,群体内并没有形成较明显的遗传分化。     

新浦东鸡DNA指纹的随机扩增多态分析

利用随机扩增多态DNA指纹分析技术,由12个随机引物中筛选出3个具有多型的引物对28只新浦东鸡的基因组DNA指纹进行研究.结果表明3个引物共扩增出27条DNA片段,多型条带24条,其多型频率为0.593;其中H05引物扩增出DNA片段7条,其多型频率为0.259,G04引物扩增出DNA片段11条,其多型频率为0.408;V15引物扩增出DNA片段9条,其多型频率为0.333,3个引物扩增的DNA片段长度为489～1940bp.各位点的片段共享度分别是0.856,0.716和0.674;杂合度为0.549,0.695和0.727;平均百分差异为0.144,0.284和0.326;平均百分差异均值为0.251.     

海南岛红毛丹种质资源DNA指纹图谱构建

分别利用筛选出的多态性高、谱带清晰的8条ISSR标记和18对SRAP标记对海南岛69份红毛丹种质资源进行PCR扩增,8条ISSR引物共检测到425个多态性条带,其中品种(系)特异条带47个,平均位点多态性信息含量(PIC)值为0.928,可鉴别的种质资源数25～67份;18对SRAP引物共检测到894个多态性条带,其中品种(系)特异条带69个,平均位点多态性信息含量(PIC)值为0.936,可区分的种质资源数为17～63份。综合各项指标利用ISSR16和ISSR5引物21个条带用于构建红毛丹种质DNA指纹图谱,该图谱可有效区分69份红毛丹种质资源。同时该DNA指纹图谱还可为下一步红毛丹种质资源鉴定、利用、品种权保护和分子育种等提供了理论依据。     

SRAP标记对8份假俭草材料的鉴定分析

应用SRAP分子标记技术对6个假俭草(Eremochloa ophiuroides)优良品系和2个引进品种进行扩增扫描,从分子的角度对8份材料进行鉴定。结果表明:31对SRAP引物在8份材料中扩增出576条清晰的谱条,其中多态性条带359个,多态性比率为62.33%,8份材料间的遗传相似系数变异范围为0.6962~0.8177,平均遗传相似系数为0.7388。31对SRAP引物中有1对引物Mel8Em17可以将所有材料区分开来,应用该引物的扩增谱带构建了参试材料的DNA指纹图谱,可将不同材料从DNA水平上加以区分。     

应用RAMP标记分析水貂与彩貂种属间的遗传多样性

对标准黑褐色水貂、蓝宝石貂、咖啡色貂3个品种的89个个体进行了RAMP分析。结果表明,品种间遗传差异明显,多态性高。14个引物组合扩增出的81条DNA片段中,75条具有多态性,多态比例为92.59%,每个引物组合可扩增4～8条多态性条带,平均5.78条。多态条带比率、Shannon多样性指数以及Nei氏基因多样度（h）均显示水貂与彩貂品种较〖JP2〗为丰富的遗传多样性。Nei遗传距离、Gst基因分化系数显示水貂与彩貂品种间遗传分化程度不高,遗传变异主要来自种群内。     

玳瑁遗传多样性的RAPD分析

应用RAPD技术分析了玳瑁的遗传多样性。用20个随机引物对中国南海海域玳瑁7个个体的基因组DNA进行了PCR扩增,共扩增出1 351条DNA片段,平均每个个体扩增出193条条带。在检测到的193条条带中,多态性条带为69条,多态性条带百分比为35.8%,条带大小在200 bp～3 000 bp之间,7个个体间遗传距离为0.082 9～0.1813,平均遗传距离为0.132 7±0.029 9,表明中国南海海域玳瑁的遗传多样性水平较低,应加强该区域玳瑁种质资源的保护。采用类平均聚类法（NJTREE）构建了7个个体相互关系的分子聚类图,表明该7个玳瑁个体没有形成种群的分化。     

应用AFLP分子标记对6个家蚕品种的鉴定

利用AFLP分子标记技术对浙江省生产上应用的 6个家蚕品种 (包括正反交 )进行了DNA指纹分析 ,筛选出E AAC/M CTT、E ACA/M CAA、E ACC/M CTT、E AGG/M CAA及E AGG/M CTT 5对引物。这 5对引物在 6个家蚕品种中共扩增出 15 7条带 (平均每对引物扩增 31 4条带 ) ,其中有多态性带 5 4条 (平均每对引物扩增多态性带 10 8条 ) ,多态性比例为 34 4 %。通过这些多态性条带的不同组合 ,可明确将供试的 6个家蚕品种加以区分 ,并作为 6个家蚕品种鉴定的依据。     

沙田柚芽变品种真龙柚的分子标记鉴定

真龙柚是沙田柚的优变芽系选育而成。为了进一步确定芽变系性状的可遗传性,对沙田柚和真龙柚及其无性系子代6个样品进行了RAPD和SSR分析。结果显示：8个RAPD引物共扩增出43条稳定清晰条带,其中5条具有多态性,多态性比率为11.63%,平均每个引物扩增5.37条带;26对SSR引物共扩增出34条带,只有5条带具有多态性,多态性比率为14.71%。结果表明：真龙柚与沙田柚的遗传距离为0.063,它们之间在DNA水平上存在遗传差异,说明真龙柚是由遗传物质改变引起的,非环境因素控制,具有可遗传性,通过RAPD和SSR技术可以有效鉴定,RAPD引物A07、A05和SSR引物SS15、TAA27均能将真龙柚和沙田柚鉴别出来。     

利用随机扩增多态性DNA指纹技术对猪链球菌进行基因分型

通过优化反应条件和筛选随机引物，应用100条随机引物对分离的20株猪链球菌做随机扩增多态性DNA（RAPD）分型研究。结果表明，有27条引物呈现良好的多态性和稳定性，可产生稳定，复杂的指纹图谱。采用SPSS10.0软件分析了不同菌株之间的遗传距离，绘制出了菌株间的亲缘关系树状图，结果，20株猪链球菌被分为4个聚类群。     

应用RAPD技术分析禽多杀性巴氏杆菌广西分离株的DNA多态性

应用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术，以随机引物单条或成对组合的方式对9株禽巴氏杆菌(PM)广西分离株和3个参考株的DNA进行了多态性分析。结果显示，在选用的20个引物中，有4对引物(4条引物成对组合)扩增的条带为1～16条，其长度在90～2600bp。相似指数分析显示，PM广西分离株GX2与GX4的相似指数最高，为0．97；GX7与B26T1200的相似指数最低，为0．21，C48—1标准强毒株与PM广西分离株间的相似指数为0．33～0．64。表明广西当地的流行株呈现多样性，与PM标准强毒株存在差异。     

利用SRAP标记研究紫花苜蓿和黄花苜蓿种质资源遗传多样性

利用SRAP分子标记对31份苜蓿材料遗传多样性进行研究,探究不同地域来源的苜蓿种质的遗传变异和亲缘关系。筛选出24对引物,经PCR扩增后获得320条片段,其中多态性片段有287条,每对引物组合均能扩增出7～17多态性条带,平均为11.96条多态性条带;采用类平均法(UPGMA)Nei氏遗传距离进行聚类,将31份苜蓿材料聚成5类,但个别同一地域来源的苜蓿品种被归到不同的类型中,表明试供苜蓿材料具有较高的异质性。     

四川几个山羊品种(群体)与岩羊RAPD分析

以两组40个随机引物，筛选出16个重复性好的多态引物。对四川5个山羊品种、藏山羊两个生态类型、3个杂交群体和岩羊共计113只个体，进行随机扩增多态DNA(RAPD)分析。结果表明：16个引物扩增出67条带，其中54条带呈现多态。多态率为80．60％。山羊各群体共有条带为23条，山羊和岩羊共有条带为13条。岩羊有4条特异带。不同引物所扩增出的片段在各群体中分布频率不同。山羊群体间相似系数为0．8216—0．9362，其中，安哥拉山羊与建昌黑山羊杂交后代F2和F3之间相似系数最大。为0．9362。山羊各群体与岩羊相似系数为0．4996—0．5064。山羊群体间的遗传距离为0．0638—0．1784。山羊各群体与岩羊的遗传距离为0．4936—0．5403。高原型藏山羊与山谷型藏山羊间的遗传距离小(0．1005)、相似系数大(0．8995)。序列为TTCCGAACCC引物扩增出的片段为750bp，仅在高原型藏山羊中出现，可作为区分这两个生态类型的遗传标记。