猪源益生菌体外抗猪传染性胃肠炎病毒作用的研究

为研究猪源益生菌抗猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的作用,并分析其可能的抗病毒机制,本研究在体外细胞感染猪睾丸细胞(ST)模型上,采用MTT比色法、TCID50法、间接免疫荧光法以及半定量RT-PCR法评价益生菌抗TGEV的作用.MTT试验中,在3种作用方式(益生菌预处理细胞,再接入病毒;益生菌与病毒同时接入细胞;病毒先感染细胞,再接入益生菌)下,所选益生菌对TGEV感染细胞均有抑制作用:益生菌预处理细胞后,再感染病毒,细胞存活率升高;益生菌与病毒体外相互作用后接入细胞,病毒对细胞的侵害能力下降;病毒感染细胞后再接入益生菌,益生菌抵抗TGEV感染细胞的能力相对较弱.间接免疫荧光试验和半定量RT-PCR试验分别采用益生菌预处理细胞,再接入病毒以及益生菌和病毒体外作用后同时接入细胞两种方式来检测益生菌对TGEV感染细胞的抑制作用,结果与MTT结果一致.实验结果表明所选的3株益生菌及其代谢产物均能够抑制TGEV感染细胞,但菌株间存在差异.不同的作用方式对TGEV感染细胞的抑制作用也有所差异,其中益生菌预处理组的抑制作用最强,病毒感染细胞后再用益生菌进行处理组的抑制作用最弱.     

一株仔猪肠道益生菌的鉴定及其体外抗TGEV增殖的初步研究

为了研究从健康7日龄仔猪盲肠中筛选出的一株益生菌菌株的体外抗传染性胃肠炎病毒(TGEV)的活性,并初步分析其抗病毒机制,试验采用形态观察、16S rRNA基因扩增,并结合MTT法观察细胞病变情况对其进行了研究。结果表明:分离鉴定的益生菌属于植物乳杆菌(暂命名为LP-1),不同接入顺序的培养上清液对TGEV增殖均有抑制作用,其中培养上清液预处理组效果优于后处理组,培养上清液与TGEV同时作用组效果最差。说明培养上清液对TGEV在体外培养猪睾丸(ST)细胞模型上的增殖能产生抑制作用,并与其不同接入顺序有关。     

猪氨基肽酶N病毒结合受体核心区对TGEV在ST细胞中复制影响的研究

为研究与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)结合的猪氨基肽酶N (pAPN)受体核心区对TGEV复制以及细胞功能的影响，本研究检索并分析p APN与TGEV的结合位点，结果显示，敲除p APN aa668～aa963对其酶活性无影响。因此，利用CRISPR/Cas9技术构建p APN与TGEV结合位点敲除细胞系，经PCR和western blot鉴定结果显示，正确构建一株敲除p APN aa668～aa963的ST细胞系，即敲除p APN 15-21外显子，命名为KO-ST-15。采用CCK-8和细胞划痕方法检测KO-ST-15细胞的增殖和细胞迁移活性，结果显示，敲除p APN 15-21外显子对ST细胞增殖和迁移活性均无显著影响。利用RT-q PCR和IFA检测KO-ST-15感染TGEV后病毒复制拷贝数和N蛋白的表达，结果显示，敲除p APN 15-21外显子可极显著抑制TGEV在ST细胞系中的复制(P<0.001)。利用RT-q PCR检测KO-ST-15感染TGEV后炎症相关基因转录水平变化，结果显示，TGEV感染后KO-ST-15中的IL-6、IL-8和NLRP3 (NOD-...     

蚀斑克隆技术纯化猪传染性胃肠炎病毒分离株

为了研究猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)体外分离纯化方法,试验采用蚀斑技术对TGEV进行克隆纯化,建立了TGEV蚀斑形成方法,并利用该方法对含有TGEV的混合感染病毒进行3次克隆筛选,并对纯化后的病毒进行了一系列检测试验。结果表明:纯化后的病毒产生的蚀斑大小一致且RT-PCR检测TGEV阳性率为100%;对不同代次细胞毒进行RT-PCR检测结果均为阳性;间接免疫荧光试验中,病毒组有特异性荧光产生;直接负染法可看到典型的病毒结构,证明该克隆毒株在ST细胞上能够稳定增殖;纯化后的病毒效价有所提高。说明试验初步建立的TGEV蚀斑形成方法可用于分离毒基础生物学特性及病毒相关应用研究。     

中药成分对新城疫强毒感染DF1能力的影响

将安全浓度范围内5种浓度的黄芩苷、氧化苦参碱和三七总皂苷等10种中药成分与鸡新城疫强毒(F48E8)分别以3种方式加入到单层鸡胚成纤维细胞(DF1)中,然后用MTT法测定OD值,以评价各中药成分的抗病毒感染能力。结果黄芩苷、氧化苦参碱、三七总皂苷、菊花总黄酮抑制作用较强。这些单个中药成分为中药抗病毒复方研究提供了理论基础。     

7种中药成分对新城疫病毒感染鸡胚成纤维细胞能力的影响

将氧化苦参碱、甘草酸、黄芪多糖、栀子苷、绿原酸、虎杖苷和木犀草素等7种中药成分稀释成安全浓度范围内的高、中、低3种浓度,分别与NDV以3种方式加入到培养成单层的CEF的培养体系中,用MTT法测定NDV感染细胞能力的变化.结果表明,先加中药后加病毒时,氧化苦参碱、甘草酸、黄芪多糖的高、中浓度、栀子苷高浓度显著抑制病毒感染细胞;先加病毒后加中药时,氧化苦参碱的高、中浓度、黄芪多糖的中、低浓度显著抑制病毒感染细胞;中药与病毒同时加入时,氧化苦参碱的高、中浓度,黄芪多糖的高、中、低浓度和甘草酸高浓度显著抑制病毒感染细胞.绿原酸、虎杖苷和木犀草素3种中药成分无论是哪种加药方式均无抑制NDV感染细胞的作用.     

浒苔多糖体外抗猪传染性胃肠炎病毒研究

为研究浒苔多糖体外抗猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)的效果,用水煮醇沉法从浒苔中提取浒苔多糖粗品,细胞维持液倍比稀释后,以猪睾丸细胞(ST)为细胞模型,采用细胞病变效应(CPE)试验,通过直接杀灭、抑制病毒复制和阻断病毒吸附3个方面进行研究。结果表明,浒苔多糖对ST细胞最大安全浓度为1.57mg/mL;浒苔多糖在体外对TGEV作用2h的最小杀灭浓度为0.2mg/mL,作用4h的最小杀灭浓度为0.1mg/mL;浒苔多糖浓度越高对TGEV复制的抑制作用越明显,TGEV感染细胞时间越长,对TGEV复制的抑制作用越低,抑制TGEV复制的最小浓度为1.57mg/mL;浒苔多糖对TGEV吸附ST细胞阻断作用的最小浓度与浒苔多糖作用于ST细胞的时间有关,2h为0.393mg/mL,4h为0.2mg/mL。浒苔多糖在体外对TGEV具有直接杀灭和阻断吸附的作用,为浒苔多糖抗病毒功能提供了理论依据。     

猪传染性胃肠炎病毒LY86株N基因序列分析及病毒在猪睾丸细胞上的增殖特性研究

为探究猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)LY86株与其他不同来源TGEV毒株之间在分子生物学上的差异及其在猪睾丸(ST)细胞上的增殖特性,分别进行了TGEV LY86株N基因的序列分析,以及病毒株以不同感染复数(MOI)感染ST细胞的毒价测定。结果显示:TGEV LY86株与其他17株TGEV参考毒株核苷酸序列同源性在97.2%~99.8%,特别是与M6、M60、TS、H、H16及JS2012毒株之间均存在很高的同源性;感染复数直接影响TGEV LY86株在ST细胞上的增殖效率,过高或过低的感染复数均可导致较低的TGEV增殖效价;当以MOI=0.001接毒时,感染后48 h所收获的病毒毒价最高,达10~(6.20±0.23)TCID_(50)/0.1 mL。本研究对分析TGEV的遗传变异规律与感染特征、优化疫苗生产工艺等具有重要的参考意义。     

中药治疗肝癌的研究进展

<正>随着对中药深入的研究,科研人员越来越认识到中药在预防及治疗肝癌方面的突出贡献,本文将对其作用机制进行深入的阐述。中药治疗肝癌的作用机制:1)抑制肝癌细胞通过研究中药柴胡提取物柴胡皂苷(SSd)对肝癌细胞HepG-2的抑制作用发现中药柴胡提取物柴胡皂苷对肝癌细胞生长抑制明显。通过研究大黄素、苦参素、黄连素和黄芩苷中药提取物对小鼠肝癌移植瘤的作用发现大黄素、苦参素、黄连素和黄芩苷组在浓度128μg/mL     

硫酸化朱砂七多糖的制备及药效

建立并优选硫酸化朱砂七多糖(sulfated polysaccharide from Polygonum ciliinerve,sPCP)的制备条件,探讨硫酸化修饰对朱砂七多糖(polysaccharide from Polygonum ciliinerve,PCP)药效的影响。本研究应用正交试验筛选氯磺酸-吡啶法制备sPCP的最佳条件,体外试验研究sPCP的抑菌活性,采用CCK-8法结合实时荧光定量PCR(real-time PCR)研究sPCP对猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)在猪睾丸细胞(swine testis,ST)上增殖的抑制作用,并采用ELISA法测定了sPCP对猪外周血细胞因子IL-2和TNF-α含量的影响。试验表明,sPCP最佳制备条件氯磺酸∶吡啶为1∶8,反应温度95℃,反应时间1 h,产物硫酸基取代度为4.31;sPCP能抑制大肠埃希菌和志贺菌,效果优于PCP;在安全浓度范围内,sPCP对TGEV在ST细胞上增殖具有显著的抑制作用(P0.01),能显著提高猪外周血细胞因子IL-2和TNF-α含量(P0.01),效果均优于PCP(P0.01)。结果表明,筛选出了sPCP的最佳制备条件,且硫酸化修饰能有效提高PCP的药效。     

猪毛色遗传的研究进展

本文概述了猪的毛色类型、猪的毛色遗传模式,着重综述了猪毛色基因分子基础的研究进展,指出存在问题并就未来发展方向做了思考。     

不同样本商品蜂蜜中硒含量的测定

用硝酸和高氯酸消化蜂蜜,使硒游离出来,在微酸性环境下,硒和2,3-二氨基萘(DAN)生成有较强荧光的物质,用环己烷萃取,在激发波长378nm,荧光波长518nm处测定其荧光强度。蜂蜜中硒含量范围:0.10～0.82μg/g。表明:蜂蜜应视为天然富硒营养品。     

鸡败血支原体垂直传播模式及其阻断方法

以国际标准强毒Ｒ株人工感染非免疫产蛋鸡,定时扑杀,分别从鼻窦、眶下孔、气管、肺、气囊、卵巢和输卵管分离ＭＧ,并收集感染鸡所产蛋分离ＭＧ。结果表明,人工感染４８小时后上、下呼吸道及肺已被全面感染,９６小时气囊已被感染,１２０小时输卵管已能分离到ＭＧ,卵巢始终分离不到ＭＧ。人工感染鸡自１４４小时便能在其所产蛋中分离出ＭＧ。药物治疗能在７２小时内消除感染,油乳剂苗则需２４天后逐渐降低蛋内ＭＧ分离率,药物卵内注射、种蛋药浴、高温处理均能杀死卵内ＭＧ,但以研制的种蛋浸泡剂药浴效果为最好。     

乳酸杆菌益生作用机制的研究进展

乳酸杆菌作为益生菌广泛用于人和动物。本文综述了乳酸杆菌改善宿主健康的机制。乳酸杆菌可通过产生抗菌物质如乳酸、过氧化氢、细菌素,或者通过竞争营养或肠道黏附位点来抑制致病菌;通过诱导黏附素的分泌或阻止细胞凋亡而增强肠道的屏障功能,从而保护肠道。文章重点讨论了乳酸杆菌表面成分（表面蛋白、脂磷壁酸和肽聚糖）与肠道受体（Ｃ型凝集素受体、Ｔｏｌｌ样受体和 Ｎｏｄ样受体）,阐述了他们结合后启动免疫调节信号,调控肠道免疫功能以发挥改善健康作用的机制。     

两种绿头鸭肌肉营养成分分析及评价

本试验旨在研究两种绿头鸭（白羽绿头鸭和绿头鸭）肌肉营养组成和价值,为绿头鸭肉产品的开发利用提供基础数据和理论依据。选择白羽绿头鸭和绿头鸭60只（每个品种各30只,公母各半）,依照国家标准测定胸肌粗蛋白质、粗脂肪、胆固醇含量及氨基酸、脂肪酸、微量元素和维生素的组成和含量,并对胸肌进行氨基酸评价及脂肪酸营养价值评价。结果显示,白羽绿头鸭肌肉粗蛋白质含量显著低于绿头鸭（P<0.05）;两种绿头鸭肌肉中均检测到17种含量大于0.01%的氨基酸,其中白羽绿头鸭肌肉苏氨酸、组氨酸、丝氨酸和脯氨酸含量显著高于绿头鸭（P<0.05）,赖氨酸、谷氨酸和精氨酸含量显著低于绿头鸭（P<0.05）;检测到13种含量均大于0.01%的脂肪酸,其中白羽绿头鸭硬脂酸和油酸含量显著低于绿头鸭（P<0.05）;检测到9种矿物质元素（钠、镁、钾、钙、锰、铁、铜、锌和硒）,两种绿头鸭差异不显著（P>0.05）;检测到8种维生素,白羽绿头鸭肌肉维生素B₁含量显著高于绿头鸭（P<0.05）,维生素D和维生素E含量显著低于绿头鸭（P<0.05）。两种绿头鸭肌肉氨基酸比例接近世卫组织推荐的理想模式,富含人体所需的矿物质元素和维生素,具有广阔的开发利用前景。     

Comparison of four techniques of arthrocentesis of the lateral compartment of the femorotibial joint of the horse

Reasons for performing study: Clinical experiences indicate that centesis of the lateral compartment of the femorotibial joint is often unsuccessful. Objective: To determine the accuracy of 2 published and 2 unpublished techniques of centesis of the lateral compartment of the femorotibial joint. Hypothesis: It was hypothesised that a drug can be administered into the lateral compartment of the femorotibial joint via a diverticulum of this joint that surrounds the medial aspect of the long digital extensor tendon and that this technique is more accurate than described techniques of centesis of this compartment. Methods: Twenty‐four stifles of 12 horses were divided equally into 4 groups and a radiocontrast medium injected into the lateral compartment of the femorotibial joint of each group using a hypodermic needle inserted: 1) caudal to the lateral patellar ligament and proximal to the tibial plateau, 2) caudal to the long digital extensor tendon and proximal to the tibial plateau, 3) between the long digital extensor tendon and bone of the extensor groove of the tibia or 4) directly through the long digital extensor tendon until it contacted bone. Twelve veterinary students who had no experience using any of these techniques performed the injections. Accuracy of each technique was determined by examining radiographs obtained after injecting the contrast medium. Results: The most successful technique for arthrocentesis was by inserting a needle through the long digital extensor tendon. This approach was successful in all attempted cases, whilst other techniques had lower rates of success. Conclusions: The lateral compartment of the femorotibial joint can be accessed accurately by inserting a needle through the long digital extensor tendon as it lies within the extensor groove. Other techniques may not be as accurate for clinicians inexperienced in arthrocentesis of the lateral compartment of the femorotibial joint.     

商会自治的基石——商会自治规范研究

在现代法律秩序中,商会自治规范是制定法的基础和必要的补充,甚至在某些方面替代了制定法;商会自治规范主要包括商会组织规范、行为规范、惩罚规范以及争端解决规范等;其效力仅及于其内部成员;商会自治规范和制定法之间存在冲突,但也存在整合的基础。     

Prevalence of diseases of the spinal cord of cats

A retrospective review of records of 205 cats with histologically confirmed disease of the spinal cord was performed to identify the prevalence of disease in this nonrandomly selected population of cats. Clinical records were reviewed, and age, duration of neurologic illness, and clinical and histopathologic findings in cats with spinal cord disease were abstracted. Disease processes were classified into 7 categories and 23 groups. The most common diseases affecting the spinal cord of cats were feline infectious peritonitis (FIP), lymphosarcoma (LSA), and neoplasia of the vertebral column secondarily affecting the spinal cord. Information on age, onset and duration of clinical signs, and lesion localization at the postmortem examination in cats belonging to the 7 categories of disease were analyzed to create a practical list of differential diagnoses. Cats were also subcategorized into 3 groups based on their age at death. FIP was the most common disease of cats younger than 2 years of age. LSA and vertebral column neoplasia were the most common diseases affecting cats between 2 and 8 years of age. Vertebral column neoplasia was the most common disease affecting cats older than 8 years of age. Results of this histopathologic study showed that FIP and LSA were the most common disease processes affecting the spinal cord of cats. However, at least 21 other groups of diseases and their relative prevalence were identified.     

高效液相色谱法测定鸡肉中土霉素残留量的不确定度评定

根据JJF1059-1999《测量不确定度评定与表示》建立了高效液相色谱法测定鸡肉中土霉素残留测量的不确定度评定方法,评定过程包括建立测量程序、分析不确定度来源、对不确定度分量进行量化。将不确定度归类为两大类。随机效应导致的不确定度可以通过一系列具有统计意义的重复观测值进行A类评定;系统效应导致的不确定度通过各测量器具、设备的说明书、校准证书提供的参数进行B类评定。本方法鸡肉中土霉素残留量的相对合成标准不确定度约为3.9%。     

几个柑橘品种实生苗的抗旱性评价研究

以5个金柑属品种、枳壳、软枝酸橘及广西土柠檬实生苗为材料，进行复水成活率、旱害指数、叶片相对含水量、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）、丙二醛（MDA）、脯氨酸等生理指标及隶属函数的综合分析，为柑橘抗性砧木品种选育提供参考。结果表明：胁迫20d复水后的成活率融安滑皮金柑和长寿金柑最高，为100%，软枝酸橘最低，为88.9%；随着干旱胁迫加剧，各品种的旱害指数呈上升趋势，长寿金柑的旱害指数最低，为0.25，软枝酸橘的旱害指数最高，为0.61；从叶片相对含水量的结果来看，长寿金柑的变化幅度最小，软枝酸橘的变化幅度最大，在第18d时分别为61.19%和37.85%；3种保护酶之间相互协同作用减轻植株受害程度，其活性变化幅度与丙二醛和脯氨酸的含量变化相似。利用隶属函数法综合分析，得出各品种的抗旱性强弱依次为长寿金柑>枳壳>融安滑皮金柑>融安金柑>山金柑>广西土柠檬>金枣>软枝酸橘。