BA-Dot-ELISA检测牛结核乳清抗体的研究

本研究建立了快速检测牛乳中结核病抗体的ＢＡ－Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ方法。用该法检测２８份结核变反阳性牛乳清，阳性率为７８．５７％，比常规ＥＬＩＳＡ（６４．２８％）高。用该法检测布鲁氏菌病牛乳清无交叉反应，但对５份副结核变反阳性牛乳清出现了一定的交叉反应。     

酶联免疫吸附试验检测姜片虫感染者血清抗体

超声粉碎制备姜片吸虫成虫冷浸抗原,以1:3500工作浓度包被酶标板;采用Kato—Katz氏定透法普查姜片吸虫病,对虫卵阳性者用ELISA法测定血清抗体,同时测定健康居民的血清和其他吸虫病患者血清,以评价ELISA法检测姜片虫病血清抗体的敏感性、特异性和交叉反应性。按常规ELISA方法操作,目视与酶标仪判断结果。普查2 189人中姜片吸虫卵阳性者168例;168例中165例ELISA阳性,ELISA与Kato—Katz氏定透法的阳性符合率98.21％;健康居民血清147份,阳性6份,阳性率4.08％;与血吸虫病交叉阳性为9.38％,肺吸虫病交叉阳性为5.36％。应用此法检测姜片虫感染者血清抗体具有敏感性高、特异性强和交叉反应率低等特点,可代替粪检法广泛用于姜片吸虫感染的检测。     

牛巴泰病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

本研究以牛巴泰病毒(BATV)NM/12株作为诊断抗原,初步建立了BATV间接酶联免疫吸附试验(ELISA)的检测方法,并对反应条件进行初步优化。结果表明,该方法对赤羽病毒阳性血清、牛布鲁氏杆菌阳性血清、牛病毒性腹泻阳性血清无交叉反应,仅与BATV阳性血清发生特异性反应,表明其特异性较强;经敏感性试验测定,阳性血清1∶640倍稀释时检测仍为阳性,显示其敏感性高。应用该方法对内蒙古自治区、黑龙江省和吉林省的523份牛血清进行牛巴泰病毒血清流行病学调查,总阳性率为10.7(56/523),阳性检出率与临床普遍使用的中和试验符合率为100%。本试验建立的间接ELISA方法具有较高的敏感性和特异性,为牛群抗体检测和BATV流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。     

牛分技杆菌胞浆特异蛋白质抗原的制备和检测

将牛分枝杆菌Mycobacterium boyis S_(10)株培养于苏通培养基,经低温高速离心,超声波裂解,Sephadex G200柱层析,获得3个峰,制备到3种胞浆蛋白质抗原,经同奶牛结核病分枝杆菌阳性血清。阴性血清及各种分枝杆菌高免牛血清的ELISA检测,并与牛PPD,聚合OT等抗原做了比较,以第二峰的胞浆蛋白质抗原的特异性为最好。     

牛羊肝脏中HEV抗原免疫组化检测法与血清ELISA检测法的比较

【目的】比较牛羊肝脏中HEV抗原免疫组化法与血清ELISA法,验证免疫组化抗体符合率。【方法】用免疫组化法与血清ELISA法共检测牛血清和肝脏样品各87份,羊血清和肝脏样品各84份;比较牛羊肝脏中HEV抗原免疫组化法与血清ELISA法检测结果,"2检验。【结果】检测牛血清抗HEV-IgG抗体检测结果显示,阳性率达21.84%。制作免疫组化染色切片检测结果显示,阳性率达19.54%。羊血清抗HEV-IgG抗体检测结果显示,阳性率达14.29%。制作免疫组化染色切片检测结果显示,阳性率达11.90%。两种检测方法比较统计学分析表明,牛组"2=0.50,P>0.05,羊组"2=0.50,P>0.05,牛羊各组结果均不显著。【结论】免疫组化染色方法可以替代复杂的血清ELISA法,用于屠宰牛羊肝脏中HEV抗原的检测。     

间接Dot—ELISA检查猪细小病毒抗原的研究

本研究首次成功地建立了检测PPV抗原的间接斑点酶联免疫吸附试验(Dot—ELISA)标准化程序,在所确定的最适条件下,对纯化PPV抗原的最低检出量为2.5ng/dot,其敏感性为血凝试验(HA)的125倍,但稍低于银加强胶体金检测法(SECGA)。PPV阳性猪血清的特异性阻断试验及与猪瘟病毒,猪伪狂犬病病毒,猪巴氏杆菌的交叉反应试验证明,该方法对PPV抗原的检测具有特异性。以该方法检测PPV人工感染兔样本和自然感染猪样本,PPV抗原的阳性检出率分别为肾样本100％(17/17)、81.82％(9/11),肝样本100％(16/16)、56.52％(13/23)。20份随机样本的间接Dot—ELISA检测结果与病毒分离和鉴定结果相符。 试验证明间接Dot—ELISA对PPV感染的检测具有简单、快速、经济、敏感性高、特异性强、重复性好和便于推广应用等优点,适用于大批量抗原样本的检测,是PPV感染快速诊断和流行病学调查的有效方法。     

牛布鲁氏菌间接ELISA抗体检测方法的建立

【目的】建立高通量牛布鲁氏菌间接ELISA诊断方法,为科学高效诊断牛布鲁氏菌病提供技术手段。【方法】以提纯的猪布鲁氏菌S2株脂多糖(LPS)作为包被抗原,采用棋盘滴定法确定了抗原包被浓度、包被液、抗原包被时间、封闭液、样品稀释液、血清稀释倍数、兔抗牛酶标抗体稀释液、兔抗牛酶标抗体稀释浓度、最佳TMB底物反应时间等参数,初步建立了牛布鲁氏菌间接ELSIA方法。并用上述条件初步建立的方法对176份牛布鲁氏菌病阳性血清和132份牛布鲁氏菌病阴性血清进行检测。检测结果经SPSS17.0软件分析,构建受试者工作特征曲线(ROC)及曲线下面积,确定敏感性和特异性;通过Youden指数确定阴阳性判定的临界点。使用质控阴、阳性血清评价试剂盒的批内和批间重复性。用本研究建立的ELISA试剂盒及商品化试剂盒同时对临床上1 200份牛血清样本进行比对检测,比较其符合率。【结果】通过棋盘法确定的试剂盒中各组分的最佳条件为:抗原包被浓度为10μg·m L-1,最适包被液为碳酸盐缓冲液,最佳包被时间为2—8℃、16 h,最适血清稀释度为1﹕50,最佳封闭液为含有3%明胶的PBST,最佳样品稀释液为含有0.5%蔗糖的PBST,最佳兔抗牛酶标抗体稀释液为含有5%马血清的PBST,最佳兔抗牛酶标抗体工作浓度为1﹕20 000,最佳TMB底物反应时间为15 min。按上述条件建立的间接ELISA方法检测176份牛布鲁氏菌病阳性血清和132份牛布鲁氏菌阴性血清,并统计结果后使用SPSS17.0软件分析该方法受试者工作特征曲线(ROC)线下面积为0.98。最佳判定临界点为样本OD值/阳性OD值(S/P)×100%=20%。在此临界值上时,敏感性为97.7%,特异性为95.5%。对1 200份临床样本的比对检测显示,本研究建立的间接ELISA方法与进口商品化试剂盒的总符合率为96.25%。【结论】建立了特异性和敏感性良好的牛布鲁氏菌间接ELISA抗体检测方法。     

PCR检测鸡类乙型肝炎病毒的研究

本课题从河南省部分地区收集鸡血清312份,首先用人乙型肝炎病毒表面抗原、表面抗体、e抗原、e抗体、c抗体等试剂盒,ELISA法分别检测312份血清结果血清样品阳性数分别为:HBs—Ag18份、HBs—Ab16份;HBe—Ag14份,HBe—Ab2份;HBc—Ab零份.其中10份血清样品为两种抗原阳性即双阳性.取经过“两对半”系统检测有“十” 的26份血清和阴性血清4份,人阳性血清4份作为对照,进行PCR扩增分析.结果鸡血清HBV—DNA阳性21份,人血清样品4份阳性.以上结果说明鸡群中类乙型肝炎病毒和人乙型肝炎病毒有相同的核酸型,均为DNA型.也表明鸡群中存在着一种与人乙肝病毒抗原密切相关的共同抗原成分.这一研究成果在兽医学、医学、HBV流行病学、公共卫生学上具有非常重要的意义.这在国内属首次报导.     

羊伪结核抗体间接ELISA检测方法的建立

【目的】建立羊伪结核棒状杆菌抗体的间接ELISA检测方法。【方法】分别用不同浓度的伪结核棒状杆菌菌体抗原和培养上清可溶性抗原包被酶标板,用脱脂奶粉封闭酶标板,设置封闭时间分别为1.0,1.5和2h,再用不同稀释度的血清(1∶100,1∶200,1∶400和1∶800)与之反应,以此优化间接ELISA反应条件,确定阳性结果判定的临界值。对间接ELISA方法的特异性和重复性进行考察,并在此基础上对采集的临床样本进行检测。【结果】选用伪结核棒状杆菌菌体为包被抗原,最佳包被抗原菌体密度为OD600=0.08,血清的最佳稀释度为1∶400,封闭时间为2h,阳性血清的临界值为0.329。该抗体检测方法可特异性地检测出伪结核阳性血清,羊口疮阳性血清、羊痘阳性血清、乳房炎阳性血清均呈阴性反应;组内,组间变异系数10%。该方法对临床样本的检测结果与实际患病状况一致。【结论】成功建立了伪结核抗体间接ELISA检测方法,该方法特异性强、重复性好,可用于临床诊断和批量血清学检测。     

胶体金免疫层析法检测猪旋毛虫病试验

用胶体金免疫层析试纸条检测10份猪旋毛虫病阳性样品,结果均为阳性;检测18份猪蛔虫病、12份猪囊虫病、11份猪细颈囊尾蚴病阳性样品和10份健康猪阴性样品,结果全部呈阴性;检测6份人工感染猪旋毛虫病阳性血清抗体滴度,结果与ELISA方法相一致。用该试纸条诊断旋毛虫病,特异性高,敏感性强,重复性和稳定性好,方法简便,快速实用。     

斑点免疫金银试验(Dot-IGSS)检测牛结核血清抗体的研究

建立了斑点免疫金银试验(Dot-IGSS)检测牛结核血清抗体的方法。应用此方法检测141头份结核变态反应阳性牛血清,其阳性检出率为64．5％(91／141),同时检测124头份变态反应阴性牛血清,其阳性检出率为14．5％(18／124)。经阻断试验、交叉试验及重复试验,证明了牛结核Dot-IGSS具有较好的特异性。     

杭州市奶牛结核病流行情况调查

结核病是由结核杆菌引起的人畜共患慢性传染病。采用牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验,2003—2006年对杭州市奶牛结核病感染情况进行调查,4年间共检牛52 160头,检出阳性牛590头,平均阳性率为1.13%。2004—2005年杭州市奶牛结核病发生主要集中在临安市和建德市。从奶牛结核病流行趋势分析,2004—2006年奶牛结核病平均阳性率(1.42%),高于2000—2003年的水平(0.28%)。存栏20头奶牛以下的养殖户结核病发生率(33.33%),明显高于养殖规模场(22.41%)。     

牛日本血吸虫病抗体检测试纸条的研制及初步评价

为了建立一种检测牛日本血吸虫病的快速诊断技术,试验以乳胶微球标记的兔抗牛IgG抗体作为免疫探针,以血吸虫可溶性抗原为检测线,羊抗兔IgG为质控线,研制了牛日本血吸虫病抗体检测试纸条。对该试纸条进行了效价、敏感性、特异性、非特异性、保存期、批内批间可重复性及符合率等各项试验,结果表明试纸条的效价为1∶2;对于实验感染日本血吸虫28 d和 35～56 d的病牛血清,试纸条的敏感性分别为20%（2/10—检出阳性份数/检测数）和100%（30/30）;用于检测健康牛血清的特异性为100%（20/20—检出阴性份数/检测数）,检测东毕吸虫、肝片吸虫、锥虫病牛血清,未见交叉反应现象;对于粪孵确诊为血吸虫病阴、阳性的牛血清,试纸条与粪孵法的阴阳性符合率均为100%;与IHA阴阳性符合率也均为100%;试纸条批内批间可重复性好,2～8℃保存的试纸条有效期达15个月。用试纸条检测实验感染血吸虫牛治疗前后体内不同时期血清抗体的水平,发现牛感染血吸虫后第5周的血清均可检测出血吸虫抗体,在治疗后第16～24周血吸虫抗体消失。     

牛结核病监测与分析研究

[目的]掌握牛结核病的感染情况及其感染原因,逐步控制包括人在内的结核病的发病率,帮助奶牛养殖业持续健康发展.[方法]2010年下半年对乌鲁木齐周边地区部分牛用“提纯结核菌素皮内变态反应”方法进行了结核病监测.[结果]对监测结果数据进行统计分析显示:此次共监测牛1 052头,其中检出结核阳性牛5头,阳性率为0.47;.[结论]牛结核病零星散发,应做好检疫和扑杀工作.     

应用牛型结核菌素检查鹿结核病的初探

利用牛型结核菌素(OT)、提纯结核菌素(PPD)进行变态反应的方法,对鹿做了3个不同组合的试验。得出了以OT点眼法检查鹿结核病为主的结论,为结核病鹿的检疫、净化病鹿场提供了可行的方法。     

布鲁氏菌病不同初筛方法及诊断试剂检测差异性分析

[目的]应用布鲁氏菌病4种初筛方法及11种商品化诊断试剂检测新疆地区采集的207份牛、羊血清学样品,分析结果差异,对方法及产品进行评价.[方法]以英国参考实验室APHA竞争性ELISA试剂盒检测结果为标准,确定布鲁氏菌病牛阳性血清78份、阴性57份,羊阳性血清52份、阴性20份.应用RBT抗原(Ⅰ)、(Ⅱ),FPA抗原...     

广西猪牛羊鸡戊型肝炎血清流行病学调查分析

[目的]全面掌握了解广西各地猪、牛、羊、鸡戊型肝炎(HE)的感染状况及其流行特点.[方法]采用双抗原夹心ELISA检测来自广西各地猪(850份)、牛(392份)、羊(428份)、鸡(352份)共2022份血清中的抗HEV抗体,并比较不同地区、不同动物间抗HEV抗体阳性率的差异.[结果]4种主要畜禽的血清总抗HEV抗体阳性率为44.76%(905/2022),其阳性率大小排序为:猪(77.53%)>牛(27.81%)>羊(21.03%)>鸡(13.35%);不同地区的畜禽血清抗HEV抗体阳性率都是以猪群的最高,均在59.00%以上.而从不同地区的4种畜禽血清总抗HEV抗体阳性率来看,以南宁市的最高(61.94%)、河池市的最低(30.93%).[结论]广西的猪、牛、羊、鸡群中均存在HEV感染,且猪在传播HEV方面起主导作用.     

牛病毒腹泻病毒(BVDV)E2重组蛋白ELISA检测方法的初步建立

[目的]为牛病毒性腹泻病毒抗体快速检测提供敏感、特异检测方法.[方法]重组质粒pET-(1-345)转化宿主菌BL21(DE),以IPTG进行诱导表达,使外源基因获得了较高水平的表达; Westem一blot检测表达产物反应原性,同时进行特异性检测;将收集的纯培养物进行超声波裂解后以His bind kit蛋白质纯化试剂盒纯化回收目的蛋白,再以纯化后的目的蛋白作为包被抗原进行方阵滴定试验,确定目的蛋白作为包被抗原的最佳稀释度.[结果]重组蛋白表达可达菌体蛋白总量的19.7;,且具有较好的反应原性和特异性,以此方法建立的间接ELISA方法对收集的约43头份血清样品进行检测, 检测阳性结果与进口试剂盒检测结果符合率达到93.55;.[结论]以BVDV E2重组蛋白作为抗原建立的间接ELISA检测方法是可行的,为其进一步的标准化莫定基础.     

苏丹油田管输原油降凝剂的研制及应用

针对苏丹原油高含蜡的特性，研制出了以乙烯一醋酸乙烯醋为主料，以丙烯酸高碳醇酯和胶质改性剂为辅料的降凝剂。通过对国内外多种原油降凝剂的对比评价试验，研制出的CNPCNo.9A降凝剂对苏丹油田含蜡原油的降凝效果非常显著，性能优于国外其它多种降凝剂，同英国Champion公司研制的WM1310降凝剂一起被GNPOC业主选择为现场用剂，并成功地应用于苏丹外输管道的生产中。     

6-BA对葡萄果实发育过程中糖积累及转化酶活性的影响

后:6-BA降低了总糖与葡萄糖的含量而提高了果糖的相对含量.