板蓝根和黄芪提取液与IBV感作后对鸡胚EE值和EE指数的影响

为研究板蓝根和黄芪复方提取液对鸡传染性支气管炎病毒（IBV）致鸡胚矮小化的影响,将IBV分别与不同浓度提取液感作后接种于9日龄鸡胚,孵育,分别测定接种病毒、药液和病毒与药液混合液后48h、72h、96h、120h、144h和168h鸡胚的体重与卵重的比值（EE值）和试验组EE值与空白对照组平均EE值的比值（EE指数）的变化。结果表明,浓度为1．00g／ml、0．50g／ml的板蓝根和黄芪提取液对IBV致鸡胚矮小化具有显著的抑制作用。     

鸡传染性支气管炎病毒对新城疫病毒的干扰作用观察

为观察鸡传染性支气管炎病毒（IBV）HN99株对新城疫病毒（NDV）增殖的干扰作用,该试验采用不同浓度的IBV标准株M41和地方株HN99与鸡新城疫病毒（NDV）分别按不同接种顺序同胚增殖,利用病毒血凝试验（HA）测定NDV的效价,观察IBV对NDV的干扰作用,从而为检测IBV地方株HN99提供方法,也为同胚增殖两种病毒提供一系列的数据参考。试验结果表明,鸡传染性支气管炎病毒地方株HN99对NDV的干扰作用与其浓度和接种顺序有关。     

板蓝根和黄芪提取液与IBV感作后对鸡胚EE值和EE指数的影响

为研究板蓝根和黄芪复方提取液对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)致鸡胚矮小化的影响,将IBV分别与不同浓度提取液感作后接种于9日龄鸡胚,孵育,分别测定接种病毒、药液和病毒与药液混合液后48h、72 h、96 h、120 h、144 h和168 h鸡胚的体重与卵重的比值(EE值)和试验组EE值与空白对照组平均EE值的比值(EE指数)的变化.结果表明,浓度为1.00 g/ml、0.50 g/ml的板蓝根和黄芪提取液对IBV致鸡胚矮小化具有显著的抑制作用.     

鸡传染性支气管炎病毒M41株鸡胚增殖工艺研究

为研究鸡传染性支气管炎病毒(IBV)M41标准毒株在鸡胚上的最佳生产工艺,试验用IBV M41株分别以不同剂量接种同一胚龄不同鸡胚、不同胚龄普通鸡胚,以及IBV M41株接种普通鸡胚后不同培养时间收获鸡胚尿囊液,比较不同培养条件下制备病毒液的产量及病毒效价。结果显示:IBV M41株接种无传染性支气管炎病毒母源抗体的SPF鸡胚最佳病毒接种剂量为104.5EID50,接种含有IBV母源抗体的普通鸡胚最佳病毒接种剂量为105.1EID50,最佳接种胚龄为11日胚龄,最佳收毒时间为48 h。按照此工艺制备疫苗,免疫SPF鸡,IBV抗体效价均符合规程标准。研究结果为用鸡胚高效、大量生产IBV M41株病毒抗原进而生产合格的IB疫苗提供了数据支持。     

一株鸡传染性支气管炎病毒的鉴定及S1基因序列分析

将分离到的一株疑似鸡传染性支气管炎病毒接种SPF鸡胚增殖,通过致鸡胚矮小化试验、红细胞凝集试验、对新城疫病毒增殖干扰试验、动物回归试验及RT-PCR分子鉴定,结果证实该病毒为鸡传染性支气管炎病毒(IBV)。应用MEGA5分析软件,与Gen Bank上IBV常见疫苗株、流行毒株和部分参考株进行序列比对,其S1基因序列与近年来我国流行毒株同源性较高,为95%~99%,与传统疫苗株H120、H52、M41和W93同源性较低,仅为77%~79%。     

禽腺病毒W株Hexon基因的分子特征及其致鸡胚侏儒化研究

从河南焦作某发生心包积液和肝肿大为病变特征的病鸡群采集肝脏组织,经分离、纯化、PCR鉴定和测序分析,确定病原为I群C种血清4型禽腺病毒(FAdV-4),命名为W株。该W株的ELD_(50)为10~(-3.576)/0.2 mL,Hexon基因全长2 814 bp,A、T、G、C碱基数和含量分别为654个(23.24%),514个(18.27%),679个(24.13%)和967个(34.36%)。Hexon基因编码蛋白的分子量为106.7 ku,共含有937个氨基酸,其中疏水氨基酸439个(46.80%),中性氨基酸265个(28.25%),亲水氨基酸233个(24.84%)。W株Hexon基因推导的氨基酸序列与FAdV-4 JSJ13株相比,在第181、939位2个氨基酸位点存在缺失;与FAdV-4 PK-01株相比,在第194、371、376位3个氨基酸位点存在突变;与FAdV-4 ON1株相比,有25个氨基酸位点存在突变。将W株经绒毛尿囊膜途径接种10日龄SPF鸡胚,与未接种病毒的对照组相比,接种W株病毒组在接种后第3天EE值均呈现显著性差异(P<0.05),第6天呈现极显著性差异(P<0.01),从而确定EE值和EE指数可以作为反映FAdV-4对鸡胚致侏儒作用的重要指标。     

鸡传染性支气管炎H120、W93株活疫苗生产工艺的改进

分别以鸡传染性支气管炎病毒(In-fectiousbronchitisvirus,IBV)H120株、W93株不同病毒量接种10、12日龄SPF鸡胚,并改变后孵化温度生产抗原液,接种后不同时间收获胚液,根据鸡胚的早死率以及胚液的收获量、病毒滴度,选择最佳的生产工艺。结果表明,IBVH120株、W93株以102.7EID50/0.1mL的病毒量接种12日龄鸡胚尿囊腔,在34.5℃孵育35h,可较为显著地降低早死胚率,提高产毒量,且抗原液病毒滴度符合疫苗制备规程的要求。     

不同来源鸡传染性支气管炎病毒M41株病毒特性的分析比较

为了比较2株不同来源的鸡传染性支气管炎病毒(M41)毒株的生物学特性、免疫原性及S1基因同源性.将TONG-IBV和MOU-IBV分别接种10日龄SPF鸡胚,观察鸡胚病变特点、计算病毒含量(EID50)、制备灭活疫苗进行免疫抗体效价检测,进行S1基因测序分析.试验结果表明:接种TONG-IBV株后鸡胚出血较严重,蜷缩程...     

新城疫病毒La Sota株和鸡传染性支气管炎病毒M41株低免疫鸡胚同胚培养研究

为研究新城疫病毒(NDV)La Sota株和鸡传染性支气管炎病毒(IBV)M41株在低免疫鸡胚中进行同胚接种培养的可行性,通过将不同稀释倍数的La Sota株和M41株接种同一低免疫鸡胚,分别测定收获尿囊液La Sota株和M41株含量,确定最佳的稀释倍数以及适宜的培养温度和培养时间。结果显示:La Sota株和M41株以10 000∶5 000的比例稀释,培养96 h病毒含量和收获量最佳,La Sota株含量可达到109.17EID50/0.1 m L,HA效价为1∶1 024,M41株含量可达到106.50EID50/0.1 m L。接种后孵育温度为36.5℃时,每胚收获量比37℃培养增加了1.0～1.2 m L。按照此工艺生产病毒制备疫苗免疫SPF鸡,NDV和IBV抗体均符合国家标准要求。试验探索并优化了La Sota株和M41株在低免疫鸡胚中同胚接种的培养条件,为大规模抗原生产提供数据支持。     

鸡传染性支气管炎病毒的分离和鉴定

为掌握发病鸡场的致病原,将临床病料接种SPF鸡胚分离得到一株病毒,通过胚体病变特征、血凝试验、RT-PCR检测、动物回归试验等对该病毒进行了鉴定,结果显示:病料处理接种鸡胚后48~144 h内鸡胚全部死亡,剖检死亡鸡胚可见胚体存在蜷缩、发育矮小等特异性病痕,收获的鸡胚尿囊液无血凝性,RT-PCR检测为鸡传染性支气管炎病毒阳性,动物回归试验中接种的SPF雏鸡可复制出现鸡传染性支气管炎的典型症状。     

鸡传染性支气管炎病毒HN99株S1基因的克隆与序列测定

根据基因库中收录的鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)S1基因的序列 ,设计了一对引物并采用RT -PCR扩增了鸡传染性支气管炎病毒HN99株的S1基因 ,扩增产物进行了克隆、测序 ,获得了IBVHN99株S1基因片段 ,其大小为1 739bp(含前导序列 ) ,其核苷酸序列与H1 2 0、H52、M41、Gray、Holte的S1基因核苷酸序列同源性较低 ,分别为 79.1 %,79.2 %,77.3%,77.8%,79 .4%,有大量的点突变并伴有基因插入和缺失 ;IBVHN99株的S1基因推导的氨基酸与H1 2 0、H52、M41、Gray、Holte株氨基酸的同源性分别为80 .1 %,79.9%,79.5%,78.5%,78.5%,经S1基因系统进化分析 ,提示IBVHN99株与其它各毒株的亲缘关系较远 ,初步证实IBVHN99株为一新的IBV毒株     

鸡传染性支气管炎病毒M41株种毒的冻干鉴定

为制备合格的鸡传染性支气管炎病毒M41株种毒,将M41株毒种接种SPF鸡胚进行传代培养,收获尿囊液、分装、冻干,并对冻干毒进行了无菌检验、支原体检验、剩余水分测定、真空度测定、外源病毒检验、病毒含量测定、特异性检验、致病性试验。结果表明,该冻干毒种各项检验均符合规定,可作为研究用种毒。本研究可为其他禽源病毒种毒的制备提供借鉴。     

Pathogenicity of embryo-adapted serotype 2 OH strain of infectious bursal disease virus in chickens and turkeys

The pathogenicity of serotype 2 OH strain of infectious bursal disease virus (IBDV) to specific-pathogen-free (SPF) chicken embryos and 2-wk-old SPF chickens and turkey poults was investigated. The virus was pathogenic for chicken embryos after five passages as evidenced by pathologic changes in inoculated embryos. The embryo-adapted virus was not pathogenic for 2-wk-old SPF chickens and turkey poults as indicated by lack of clinical signs, gross or microscopic lesions in the bursa of Fabricius of inoculated birds. Bursa-to-body-weight ratios of the inoculated chickens and turkey poults were not significantly different from those of uninoculated controls. Virus-neutralizing antibodies to serotype 2 IBDV were detected in inoculated chickens and turkeys. Results of this study indicated that the embryo-adapted serotype 2 OH IBDV isolate that is pathogenic for chicken embryos is infectious but not pathogenic in chickens and turkeys.     

一株肾型鸡传染性支气管炎病毒的初步分离鉴定

从哈尔滨市某肉鸡养殖场疑似传染性支气管炎的病死鸡中分离到1株肾型IBV,并对其进行鸡胚矮小化、血凝性、电镜下特征、新城疫干扰试验、致病性等生物学鉴定和N基因的RT-PCR鉴定。结果表明,该病毒分离株在鸡胚上传至第四代(F)4开始出现死亡或侏儒胚;病毒不凝集鸡红细胞;透射电镜下可见多呈球形、直径约80～120nm的病毒粒子,具有冠状病毒的典型形态特点;该病毒可干扰新城疫LaSota株在鸡胚中的增殖;将分离毒第4代尿囊液接种于6日龄雏鸡,7d后开始出现死亡,死亡率高达67%(6/9),病死鸡剖解后可见肾脏明显肿大、苍白,具有传染性支气管炎的典型病变;分离毒第5代尿囊液经N基因特异性RT-PCR获得大小约438bp的目的片断。初步确定所分离病毒为肾型IBV。     

提高鸡传染性支气管炎病毒血凝抗原滴度途径及抗原灭活

将７株传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）标准株（Ｍ４１、Ｈ１２０、Ｈｏｌｔｅ、Ｇｒａｙ、Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ、Ｉｏｗａ６０９和Ｔ株）和６株分离株（ＮＩＢＶ、ＧＩＢＶ、Ｍ、ＳＨ、Ｊ和Ｈ株）分别接种于鸡胚，收获尿囊液，经浓缩后，用魏氏梭菌培养液处理，制备血凝抗原。其中，Ｈ１２０株血凝滴度最高，Ｔ、Ｍ、Ｊ和Ｈ株无血凝性。应用含有不同滴度ＩＢＶ母源抗体的鸡胚增殖病毒制备抗原，效价与用ＳＰＦ鸡胚增殖病毒制备的抗原效价一致。尿囊液经反复冻融后再制备抗原会使血凝价降低。抗原分别用甲醛、高碘酸钠、硼氢化钾和ＳＤＳ灭活，其中甲醛灭活效果最理想。抗原对氯仿敏感，对乙醚稳定。适宜浓度的Ｎａ＋、Ｍｇ２＋可显著提高抗原的血凝性     

Detection of avian infectious bronchitis viral infection using in situ hybridization and recombinant DNA

A recombinant DNA probe with specificity for the 3' end of genomic RNA from the Ark 99 strain of infectious bronchitis virus (IBV) was found to hybridize with extracted RNA of three strains with the Ark serotype, as well as the Mass41, Holl52, Gray, JMK, Conn, Fla and SE17 strains of IBV. Viral infection was detected in the cytoplasm of chicken embryo kidney cells inoculated with Mass41, Ark99, SE17 or two recent field isolates of IBV using in situ cytohybridization and a biotinylated probe. In vivo infections were detected in individual cells of tracheas and lungs 2,4, and 6 days after inoculation of chicks with Mass41 and Ark99. In situ hybridization of Ark99 infected tissue sections using 32P-dATP labelled probe indicated that more viral replication was present in the trachea on day 4 than either days 2 or 6; whereas more viral RNA was found in the lungs on day 6 than days 2 or 4 after inoculation.     

鸡胚中人工感染网状内皮增殖病病毒的检测

为了模仿禽网状内皮增生病毒(REV)垂直感染鸡胚,在1和3日龄的发育SPF鸡胚人工接种不同剂量的REV,并继续孵化至12日龄.在将发育鸡胚制成成纤维细胞单层后,再用抗REV单克隆抗体11B118作间接荧光抗体反应检测REV.结果表明,从所有人工感染REV的鸡胚12日龄制备的成纤维细胞中均能在培养48h检测出REV.该方法可用于检测生产弱毒疫苗的SPF鸡胚及其相应细胞有无REV的污染.