影响籼稻成熟胚愈伤组织植株再生频率的几个因素

以优良籼稻品种的成熟胚为材料,探讨不同浓度ABA、愈伤组织继代次数、培养时间以及干燥处理等因素对籼稻成熟胚愈伤组织再生能力的影响。结果表明：（1）在分化培养基上添加3.0～5.0 mg/L ABA对促进胚性愈伤组织的形成及胚状体发生,提高植株再生能力有显著作用。（2）继代3次、培养20～30 d的成熟胚愈伤组织,质量较好,分     

S-3307对水稻花药愈伤组织诱导、分化及其壮苗的效应

研究了植物生长延缓剂S-3307对水稻花药培养的效应.在诱导培养基中,低浓度(≤1mg/L)的S-3307可以明显提高愈伤诱导率和绿苗分化率,高浓度(≥10mg/L)的S-3307却致花药发黄,几乎不能生长.在分化培养基中添加低浓度(≤1mg/L)S-3307,有助于绿苗分化率成倍提高,当S-3307的浓度为1mg/L时,绿苗分化率达到最大值,同时白苗分化率显著降     

超甜玉米自交系幼胚高效成株系统的建立

以超甜玉米自交系S1、S2、S3和粤甜3号等为材料,建立了超甜玉米高效再生系统。研究结果显示,超甜玉米基因型、幼胚的大小是影响胚性愈伤组织生成的主要因素,幼胚长度在0.5-1.2mm之间时,胚性愈伤组织的诱导频率最高。培养基中蔗糖浓度和细胞分裂素浓度对胚性愈伤组织的分化和小植株再生频率有重要影响,低浓度的蔗糖（20g/L）和6-BA（2mg/L）获得的再生频率较高。继代培养中ABA处理可使愈伤组织的再生频率提高1.68倍,IBA浓度在3.0mg/L,可以明显提高小植株生根。     

玉米幼胚再生体系的建立

为建立高效稳定的玉米再生体系,以玉米幼胚为受体材料,研究了基因型对胚性愈伤组织诱导率的影响以及适宜玉米幼胚生长的诱导培养基、继代培养基、分化培养基及生根培养基。结果表明,基因型可显著影响胚性愈伤组织诱导率,H99×A188的诱导率最高(45.28%);N6培养基适合用于胚性愈伤组织的诱导同时也适合继代培养;激素组合为MS+6-BA 1.0 mg/L+KT 2.0 mg/L的分化培养基出苗率和转化率最高,易成活;1/2MS培养基附加IBA1.0 mg/L和1.0 g/L活性炭适合于生根培养。     

几个温敏不育水稻品种组织培养特性的研究

以我国特有的温敏不育系籼稻品种安农S-1,及其转育的不育系安湘S和香125S为实验材料,对愈伤组织的诱导、继代和再生体系的建立进行了研究.结果表明:不同水稻品种和不同的外植体种类愈伤组织的诱导存在比较明显的差别:对成熟种子来说,安农S-1的愈伤组织诱导率最高;而对幼胚而言,香125S的诱导率最高.不同的水稻品种所适用的培养基不同,形成的愈伤组织的状态也存在差别,香125S所适用的培养基种类比较广泛,形成的胚性愈伤组织状态最好,也最容易形成.在愈伤组织的分化阶段,添加3 mg/L 6-BA 1 mg/L NAA分化成苗率最高;随继代时间的延长,愈伤组织的再生率下降,形成的幼苗的状态也存在明显的差别.     

玉米优良自交系成熟胚愈伤组织诱导

玉米是重要的粮食作物和饲料作物,建立稳定、高效的玉米转化体系无疑具有重要的理论意义和应用价值。试验对自交系492、自交系26及自交系758的成熟胚愈伤组织诱导和植株再生的条件进行了摸索。结果表明在诱导培养基中添加4mg/L的2,4-D,可显著提高成熟胚愈伤组织诱导率;在继代培养基中添加10mg/L的AgNO_3、150mg/L的L-半胱氨酸,玉米成熟胚的胚性愈伤组织诱导率高。     

低酚陆地棉直接体细胞胚胎发生和植株再生

选用低酚陆地棉无菌苗下胚轴为材料进行全固体组织培养,直接诱导获得了胚性愈伤组织,并进一步分化为再生植株.结果表明,激素是影响棉花直接体细胞胚胎发生的重要因素.MSB培养基中添加2,4-D有利于愈伤组织的形成,却不能直接诱导获得胚性愈伤组织.MSB培养基中添加IBA和BA也不能直接诱导获得胚性愈伤组织.MSB培养基附加适当浓度的IBA和KT能直接诱导出胚性愈伤组织.最适激素组合(1.0 mg/L IBA,0.5 mg/L KT)能使诱导棉花下胚轴产生大量胚性愈伤组织,并且在3个月内就可肉眼观察到不同发育时期的胚.MSB培养基中附加1.0 g/L谷氨酰胺和0.5 g/L天门冬酰胺有利于胚萌发成苗.本研究建立了简便高效的棉花直接体细胞胚胎发生和植株再生培养体系,从胚性愈伤组织诱导到植株再生约需5～6个月时间.     

大蕉幼雄花易碎胚性愈伤组织长期继代培养及其植株再生

大蕉未成熟雄花接种到胚性愈伤组织诱导培养基中,4～5个月后可诱导出胚性愈伤组织,并可在继代培养基上长期增殖。这些继代培养了6年多的松软易碎的胚性愈伤组织转移到含有0.2 mg/L 6-BA的分化培养基中,可诱导出芽,得到了53株再生植株,这些再生植株可进一步扩大繁殖。组织学切片证明长期继代培养的愈伤组织维持了胚性的状态。     

提高水稻愈伤组织再生频率的研究

以长时间继代的水稻成熟胚愈伤组织为试验材料,研究激素配比、继代方式、干燥处理和添加物对分化的影响。结果表明,分化培养基中加3 mg/L BA对分化有利;继代培养基中加入3 mg/L ABA,以麦芽糖代替蔗糖,或以甘露醇代替部分蔗糖在一定程度上可以改善愈伤组织状态,提高分化率;干燥处理能明显提高愈伤组织分化率;分化培养中添加一定浓度的AgNO3和CuSO4有利于愈伤组织分化。     

龙芽楤木愈伤组织诱导及胚状体发生初探

以楤木幼茎及根为试材,添加不同种类和浓度的激素,进行愈伤组织诱导、胚状体发生及幼苗分化。结果显示,幼茎在MS+2,4-D1.0mg/L培养基上愈伤组织诱导率最高。愈伤组织在MS+BA1.0 mg/L + NAA0.04 mg/L培养基上胚状体形成最多,幼苗分化率达92.5%,并能保持旺盛的再生能力。     

玉米成熟胚胚性愈伤组织的诱导、高频再生及转化的研究

以玉米自交系CML295、CML304和18-599R的成熟胚为外植体, 结合幼胚离体培养方法, 探讨并优化了成熟胚来源的胚性愈伤组织诱导及继代培养方法。对其愈伤组织的形态和组织切片的研究结果显示, 继代过程可产生良好的Ⅱ型胚性愈伤组织。在分化培养中分别获得68.6%、75.4%和84.8%的高频再生率, 每愈伤组织块成苗数分别为2.45、2.43和2.75。利用基因枪法转化pCAMBIA1301质粒后的GUS瞬时表达效率分别为57.9%、62.5%和73.1%, 转化pCAMBIA1303质粒后检测GFP的瞬时表达效率分别为23.3%、40%和45.5%。以上3种基因型成熟胚来源的愈伤组织转化率与其对应的幼胚来源的胚性愈伤组织转化率相似。这一技术体系为玉米的遗传改良和功能基因组研究提供了重要的技术平台。     

农杆菌介导玉米遗传转化影响因子的研究

以东北春玉米自交系7922、340、78599、921及美国杂交种H99等幼胚愈伤组织为受体,利用农杆菌介导法转化Bt(CryIA.)基因,研究菌液预处理、愈伤组织状态、侵染培养基、侵染时间及共培养条件等因素对转化频率的影响。根据转化愈伤组织的除草剂(Basta)抗性筛选结果评估转化率,表明继代培养3￣5d的愈伤组织适于转化,其中以继代5d的7922愈伤组织转化率最高,为46.6%;不同基因型对农杆菌转化率存在差异,H99的抗性愈伤组织率为34.57%,7922为26.27%、340为21.36%、78599和921抗性愈伤组织率仅为8.02%和6.78%。基因型间差异显著;浸染培养基中加入(AS100￣200mg/L)抗性愈伤转化率明显提高;菌液浓度OD6000.5￣0.6、侵染时间5￣10min、共培养时间3d最佳。     

玉米自交系18-599(白)转化受体体系的建立和转barnase基因植株的获得

以抗病优质综合性状优良的玉米自交系18-599（白）为试材,优化其遗传转化受体体系,并进行了barnase基因的转化。结果表明,在基于N6和MS培养基的8个方案中,N6-4培养基是转化受体系统建立的最佳培养基;幼胚的最佳接种长度为1.6 mm;用于转化的幼胚愈伤组织继代次数最好控制在5次之内。利用18-599（白）优化受体体系进行了barnase基因的基因枪转化,用除草剂Basta作筛选剂,其致死浓度为8 mg L^-1,3轮筛选的Basta浓度依次为6、8和6 mg L^-1。对转化植株的分子检测和大田不育性状观察表明,获得了转barnase基因的雄性不育18-599（白）转化植株。     

转双价抗虫基因Bt-pta玉米植株的获得

以7922、8902、4112、340和853为受体材料,研究不同基因型的愈伤组织诱导与再生芽苗的关系,其中7922芽苗率为76.4%;8902、4112、340芽苗率分别为8.2%、12.7%和0%和11.8%,结果显示7922主要以体胚发生为主,芽苗率高,是遗传转化的良好受体材料。且胚性愈伤组织随着继代次数的增加变异率随之增加,应尽量减少继代次数以提高转化率。研究进一步利用PDS-100型基因枪将包含抗除草剂基因（bar）、苏云金杆菌毒蛋白基因（cryIA(a)）和半夏凝集素基因（Pinellia ternata agglutinin, PTA ）的聚合载体p3300-bt-pta导入7922的胚性愈伤组织,经PPT（3mg/L）筛选,获得抗性愈伤组织和再生植株。从获得的28株再生植株中筛选获得22株具有除草剂抗性的植株,PCR分析表明有7株同时含有Bt、PTA、Bar 三个基因,共整合的频率为31.8%,结果表明将多价抗性基因同时导入玉米获得多抗的转基因玉米材料是可行的,这为通过转基因聚合育种培育创造同时抗鳞翅目害虫和同翅目害虫的玉米品种奠定了基础。     

玉米自交系愈伤组织的诱导、RAPD分析及扫描电镜观察

以玉米不同自交系的幼胚为材料,用诱导培养基进行培养,以获得愈伤组织.结果发现所有自交系幼胚均可诱导出白色或黄白色的愈伤组织,但其再生能力差异显著,这主要取决于基因型和培养基种类.自交系7922、340幼胚的再生频率高达85.5%和78%.植株再生途径也有所不同,8902、Mo17、4112和846以器官发生途径为主,340、7922、921、853和     

外源脱水应答转录因子CBF4基因转化玉米的获得

用PCR方法克隆了拟南芥脱水应答转录因子CBF4基因,以逆境诱导表达基因rd29A的启动子为驱动,构建了逆境诱导表达载体pBAC146。用基因枪转化法转化玉米优良自交系的幼胚和胚性愈伤组织,轰击后的愈伤组织经过筛选、分化和植株再生过程,共获得36棵转基因植株。经PCR、PCR-Southern和Southern检测表明,外源目的基因已成功整合到部分转基因玉米株系的基因组中。人工干旱处理下,抗旱生理指标测定显示,一个转基因株系的脯氨酸含量和叶绿素含量比野生型对照提高一倍,间接表明转基因株系的抗旱能力在某种程度上有所提高。     

新陆早42号体细胞胚发生和植株再生

 以新陆早33号为对照研究新疆主栽品种新陆早42号的体细胞胚胎发生。研究表明,所用4种激素组合均能有效诱导愈伤组织,但二者仅在经过IBA 1.0 mg·L^-1+KT 0.5 mg·L^-1和2,4-D 0.1 mg·L^-1+KT 0.1 mg·L^-1两种激素组合诱导初生愈伤后,才能胚胎发生。新陆早42号在IBA 1.0 mg·L^-1+KT 0.5 mg·L^-1培养基上46 d就开始胚胎发生;新陆早33号则不能直接胚胎发生,需继代到MSBP培养基上培养48 d才有胚胎发生。经2,4-D 0.1 mg·L^-1+KT 0.1 mg·L^-1组合培养的愈伤均需要继代到MSBP培养基上培养才能胚胎发生,新陆早42号和新陆早33号胚胎发生的最早时间分别是71 d和81 d。胚性愈伤在铺有滤纸的MSBF培养基上分化成胚并发育成再生植株。新陆早42号在140 d有根系发育良好的能嫁接植株（株高 7～8 cm）,而新陆早33需180 d。即成功建立了新陆早42号的再生体系,且其胚胎发生能力和再生能力均优于对照。     

Agrobacterium-mediated Cry1A(b) gene transfer in Punica granatum L. cv. Kandhari Kabuli using different In Vitro regeneration pathways

Three different regeneration systems, viz. regeneration through callus cultures using embryonic explant, direct regeneration using shoot bud/nodal segments as explant and regeneration through cell suspension culture using cotyledonary explant (for the induction of transgenic callus for suspension culture) were evaluated to see their effect on transfer of Cry1A(b) gene to Punica granatum L. cv. Kandhari Kabuli through Agrobacterium mediated transformation. Pre-conditioning and co-cultivation durations had a marked effect on transformation frequency of different explants. Out of different explants used (embryo, shoot bud, and cotyledon) for different regeneration systems cotyledonary explant showed highest putative transformation frequency (13.54%) inducing callus on selective medium for carrying out cell suspension culture to regenerate transgenic shoots. Despite of the highest transformation frequency obtained from the cotyledon explant, the plating efficiency of the transgenic cells generated through the transgenic callus (callus formed from the cotyledonary explant) during cell suspension culture was found to be very low (0.7%). Thus the plating efficiency has also played worth mentioning role in the regeneration of transformants following cell suspension culture. Among the three regeneration systems, regeneration through callus cultures using embryonic explant was found to be best for regeneration of transformants. The highest per cent regeneration of 23.33 was obtained from the putative transgenic embrogenic calli. Successful genetic transformation in the transformed plantlets was confirmed by PCR analysis. The transformation system thus developed is valuable and may be used to produce insect resistant trees.     

Optimization of mature embryo-based high frequency callus induction and plant regeneration from elite wheat cultivars grown in China

We have developed an efficient procedure for plant regeneration of elite wheat cultivars using mature embryos. Firstly, we established the optimal combination of basal media, inoculation method and pretreatment method using biostatistical methods. The results indicated that the combination of MS medium and longitudinally bisected mature embryos showed the highest culture efficiency, whereas the pretreatment method had no significant effects on callus induction or plant regeneration. A 70% primary callus induction rate was achieved on MS medium containing 2 mg/l 2,4‐d for all tested cultivars. Primary calli were then transferred onto the subculture medium to initiate embryogenic calli. Supplementation of the subculture medium with the appropriate combination of phytohormones (2.0 mg/l 2,4‐d , 0.5 mg/l BA and 0.1 mg/l NAA) significantly enhanced embryogenic callus production. The addition of AgNO₃ (10 mg/l) in regeneration medium promoted plant regeneration, whereas CuSO₄ stimulated root formation. The use of this protocol achieved successful plant regeneration in eight tested cultivars. The culture efficiency ranged from 15.3% to 36.8%, suggesting this regeneration system may be an effective alternative for wheat genetic transformation.