金银花、山银花绿原酸类提取物体外抗NDV作用研究

为研究比较价格差异较大的金银花和山银花的体外抗病毒作用,分别提取金银花和山银花绿原酸类活性成分,利用Vero细胞体外培养系统,通过观察细胞病变效应（CPE）,并用MTT法检测细胞活性来评价和比较金银花和山银花绿原酸类提取物体外抑制新城疫病毒（NDV）对细胞的感染作用。结果表明：在安全浓度范围内,金银花和山银花绿原酸类提取物均具有显著的抗病毒作用,体外对NDV分别具有明显的阻断作用、抑制作用和中和作用,且两者之间的抗病毒效果差异不显著。本试验为价格相对便宜的山银花在一定领域部分代替金银花提供了实验依据。     

板蓝根多糖的提取及其对猪细小病毒的体外作用

用水煮醇沉法提取板蓝根多糖,通过观察PK-15细胞病变效应（CPE）来评价板蓝根多糖的不同加药方式体外对猪细小病毒（PPV）的阻断和抑制作用。结果表明板蓝根多糖在对细胞的安全浓度范围内,对猪细小病毒有明显的阻断作用和抑制的作用,最小的阻断浓度为2.09μg/ml,最小的抑制浓度为4.19μg/ml。     

新城疫病毒诱导黄粉虫抗病毒肽的效果分析

目的：观察鸡新城疫病毒（NDV）诱导黄粉虫是否产生抗鸡新城疫病毒肽。方法：先用鸡胚培养鸡新城疫病毒以扩增病毒,然后提取病毒液备用,接着用鸡新城疫病毒液接种刺伤黄粉虫幼虫,2～3天后提取黄粉虫体内的抗病毒物质,测定其血凝效价和鸡新城疫病毒诱导鸡胚发病抑制试验结果。结果 ：黄粉虫抗病毒肽在血凝抑制试验中的效价为1∶64;在鸡新城疫病毒诱导鸡胚发病抑制试验中有一定效果,但不明显。     

鸡胚接种鱼腥草注射液抗新城疫病毒的研究

为了研究中药鱼腥草是否能抑制新城疫病毒的增殖,用鸡胚培养法和血凝试验,测定了鱼腥草对鸡新城疫病毒的抑制作用。试验共分为4组,第Ⅳ组接种病毒尿囊液与中药鱼腥草混合液,HA滴度0。第Ⅳ组接种新城疫病毒尿囊液与盐酸金刚烷胺混合液,HA滴度5 log2。第Ⅳ组接种新城疫病毒尿囊液与生理盐水混合液,HA滴度9 log2。第Ⅳ组不接种病毒尿囊液,不给药,HA滴度0。试验结果表明,鱼腥草对鸡胚无毒性作用;鱼腥草与病毒同时接种能完全抑制鸡新城疫病毒在鸡胚中的增殖。     

中药紫草注射液对鸡胚接种后抗新城疫病毒的研究

为研究紫草对新城疫病毒的抑制作用。用鸡胚培养法和血凝试验,测定了4组试验中药紫草对鸡新城疫病毒的作用效果。结果显示：第Ⅰ组接种病毒尿囊液与中药紫草混合液,HA滴度0;第Ⅱ组接种病毒尿囊液与盐酸金刚烷胺混合液,HA滴度4 log2;第Ⅲ组接种病毒尿囊液与生理盐水混合液,HA滴度8 log2;第Ⅳ组不接种病毒尿囊液、不给药、HA滴度0。第Ⅰ组与第Ⅲ组差异极显著(P<0.01),第Ⅱ组与第Ⅲ组差异显著(P<0.05)。试验表明,紫草对鸡胚无毒性作用;紫草与病毒同时接种鸡胚,能完全抑制鸡新城疫病毒在鸡胚中的增殖。     

2010-2011年河南省部分地区H9亚型禽流感、新城疫

为了解河南省H9亚型禽流感、新城疫和鸡传染性支气管炎的流行情况。从河南省15个地市发病鸡场采集病鸡组织样品309份,采用鸡胚尿囊腔传代接种法分离病毒,并利用血凝试验(HA)、血凝抑制试验(HI)和RT-PCR试验对分离毒株进行鉴定。结果表明,3类病毒的总检出率为26.54%,其中NDV、IBV和AIV(H9)的检出率分别为11.00％、3.88％和11.65％。2010年10月NDV和IBV检出率均最高,分别为30.00％、15.00％,2011年1月AIV(H9)检出率最高,为43.24％。2类病毒混合感染的检出率达3.24％。表明2010年7月-2011年4月H9亚型禽流感、新城疫以及鸡传染性支气管炎在河南省部分地区普遍流行,且存在一定程度的混合感染。为有效预防和控制河南省3种主要疫病提供了科学依据。     

禽用疫苗病毒浓缩技术的研究

采用FILTRON中型盒式超滤系统,分别选用截留分子量为30,50,100及300 K 4种不同孔径的超滤膜,对NDV,AIV,EDS76V,IBV及IBDV共5种病毒抗原液进行了浓缩试验研究。结果显示,这4种孔径的超滤膜均可用于上述5种病毒液的浓缩,其病毒的截留率可达99.9%~100%;采用各种病毒浓缩液、未浓缩病毒液及超滤液制成各种相应浓缩苗、未浓缩苗及超滤液乳剂免疫试验鸡。试验证明,浓缩苗明显优于未浓缩苗,在病毒浓缩过程中均未出现有效抗原成分的丢失,其抗原性也未发生变化。     

中药鱼腥草注射液鸡胚接种抗新城疫病毒的研究

用鸡胚培养法和血凝试验,测定了鱼腥草对鸡新城疫病毒的抑制作用。试验共分为4组,第1组接种病毒尿囊液与中药鱼腥草混合液,HA滴度0。第Ⅱ组接种新城疫病毒尿囊液与盐酸金刚烷胺混合液,HA滴度5 log₂。第Ⅲ组接种新城疫病毒尿囊液与生理盐水混合液,HA滴度9log₂。第Ⅳ组不接种病毒尿囊液,不给药,HA滴度0。试验结果表明：鱼腥草对鸡胚无毒性作用;鱼腥草与病毒同时接种鸡胚,能完全抑制鸡新城疫病毒在鸡胚中的增殖。     

中药加味四君子汤与镉对鸡肝脏ATP酶活性的颉颃效应

为探讨中药加味四君子汤对镉致鸡肝脏ATP酶活性抑制的颉颃作用。选公鸡300只,随机分成对照组、中药组（加味四君子汤组）、加镉组、中药加镉组（加味四君子汤镉组）,分别饲养15,30,45,60天时,分别处死鸡,检测肝脏ATP酶的活性。结果表明,镉可使鸡肝脏ATP酶的活性显著降低（P<0.05或P<0.01）,而中药加镉组ATP酶的活性均高于加镉组,但都低于中药组。表明灌服中药加味四君子汤能有效颉颃镉对肝脏ATP酶活性的抑制作用,提高肝组织的能量代谢。     

银翘天甘中药制剂抗鸡体内大肠杆菌试验研究

为观察银翘天甘中药制剂抗鸡体内大肠杆菌的效果,将15日龄雏鸡用O2型大肠杆菌攻毒并开展预防和治疗实验。预防试验是用15日龄雏鸡O2型大肠杆菌攻毒同时口服银翘天甘中药制剂0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL,1次/天,连用10天,测定发病率、死亡率和保护率;治疗试验是先用O2型大肠杆菌攻毒并建立疾病模型后口服上述药物,2次/天,连用10天,以头孢噻肟钠作为阳性对照,测定治愈率、有效率和死亡率。预防试验结果表明,银翘天甘中药制剂组实验动物死亡率均极显著低于感染对照组（P<0.01）;中、高剂量组对实验动物的保护率超过85%;在18日龄时,给药组实验动物发病率均极显著低于感染对照组（P<0.01）。治疗试验结果表明：银翘天甘中药制剂实验组感染雏鸡死亡率显著低于头孢噻肟钠阳性对照组（P<0.05）;中、高剂量组治愈率显著高于阳性对照组（P<0.05或P<0.01）,高剂量组有效率显著高于阳性对照组（P<0.05）。由此表明,口服银翘天甘中药制剂能够有效预防和治疗鸡大肠杆菌病。     

新城疫病毒抗恶性肿瘤研究进展

新城疫病毒属于副粘病毒科Rubulavirus属禽副粘病毒-1型(APMV-1)毒株，新城疫是一种急性、热性、败血性和高度接触性传染病。新城疫病毒通过溶瘤作用、诱导肿瘤细胞凋亡和分泌细胞因子等方法选择性杀伤肿瘤细胞。目前，传统的手术、化疗、放疗等治疗模式虽然能有效治疗部分肿瘤，但并不能全面降低肿瘤的复发率和死亡率。根据国内外研究报道，对新城疫病毒的概况以及该病毒溶瘤作用、抑瘤佐剂作用等抗恶性肿瘤机制展开了综述。     

H5N1型禽流感病毒HA基因克隆及序列分析

为从分子生物学角度进一步研究H5N1型禽流感主要抗原HA基因,探究H5N1 HA基因的遗传变异情况及其蛋白结构,根据GenBank中登录的H5N1型禽流感HA基因的序列利用Primer 5.0设计引物扩增HA基因,将其克隆到pMD18-T载体后进行鉴定,对鉴定正确的重组质粒pMD-H5N1-HA进行测序分析。应用生物信息学软件对禽流感病毒HA基因进行系统进化树分析、氨基酸序列同源性分析、保守区分析,磷酸化位点和序列重复区分析及HA蛋白二级、三级结构的预测。核苷酸序列测定结果表明：HA基因长1661 bp,共编码326个氨基酸;生物信息学分析结果表明：HA基因在种间具有较高保守性,HA基因的氨基酸序列与其他地方性禽流感H5N1病毒株HA基因的序列同源性最高可达99.7%,且为高致病性毒株;HA蛋白的二级、三级结构预测结果显示：HA蛋白多为α螺旋和β转角结构,无规则卷曲,是亲水性蛋白。该结果为禽流感病毒的分子病毒学研究奠定了基础。     

H7N7亚型禽流感病毒血凝素B细胞和Th细胞表位预测及初步鉴定

摘　要 　目的 预测H7N7亚型禽流感病毒血凝素(Hemagglutinin,HA)B细胞和Th细胞相关抗原表位,并对所获表位的抗原性进行初步鉴定。方法 根据禽流感流行趋势,从GeneBank下载H7N7禽流感病毒HA氨基酸序列,使用生物信息学方法,对所下载序列进行预测与分析,获得H7N7亚型禽流感病毒血凝素B细胞和Th细胞相关抗原表位。通过H7亚型禽流感病毒阳性血清,初步验证所选表位抗原性。结果 获得了5个H7N7亚型禽流感病毒候选B细胞和Th细胞表位,经过间接ELISA方法分析,其中HA165~178,HA180~193,HA241~255表序列相对保守,与流行的H7N7亚型禽流感病毒HA相应区域具有较好的一致性,同时具有与H7型禽流感病毒阳性血清抗体结合能力,预示了其成为功能表位的可能。结论 所筛选的表位具有成为H7N7亚型禽流感病毒HAB细胞和Th细胞相关抗原表位的可能,为H7N7亚型禽流感表位疫苗的研究奠定基础。     

新城疫病毒HN蛋白单克隆抗体的制备及其抗原捕捉ELISA方法的建立

为建立一种快速的新城疫病毒病原检测方法。本研究以原核表达的重组HN蛋白免疫7周龄BALB/c雌鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经间接ELISA方法筛选,成功获得了1株能稳定分泌抗新城疫病毒HN蛋白的McAb杂交瘤细胞,命名为4E8,4E8亚类鉴定为重链属于IgG2a,轻链属于κ链。以多克隆抗体作为包被抗体、单克隆抗体4E8作为检测抗体,通过双抗夹心ELISA各个反应条件的优化,建立检测新城疫病毒抗原捕捉ELISA方法。该方法对EDSV、ITLV、IBV、IBDV不发生交叉反应,其敏感性比HA试验要高4倍以上,与RT-PCR相比较,符合率、敏感性和特异性分别为95.6%、93.3%、96.1%。本研究建立的NDV AC-ELISA有良好的重复性、敏感性和特异性,可应用于新城疫病毒感染的早期诊断。     

用平板式超滤机浓缩鸡新城疫病毒及法氏囊病毒试验效果观察

采用ＵＦ１型工业平板式超滤机对鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）及法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）进行了初步的浓缩试验。该设备浓缩工艺简单、效率高,浓缩液ＨＡ效价与未浓缩液比较按浓缩比率相应上升。用浓缩液与未浓缩液制成灭活疫苗免疫鸡,均可获得１００％抵抗ＮＤ及ＩＢＤ的保护力,以浓缩苗免疫的ＮＤＨＩ抗体及ＩＢＤ中和抗体滴度明显高于未浓缩苗。试验表明,浓缩苗安全有效,并优于未浓缩苗。     

中国禽流感病毒毒株信息管理系统设计及实现

为满足国家禽流感参考实验室对中国禽流感毒株信息计算机化管理的需要,通过系统的需求分析,建立了毒株信息数据标准和数据结构模型,在此基础上设计出系统结构,开发出中国禽流感病毒毒株信息管理系统。系统的主要功能包括：信息录入、信息维护、信息查询及统计分析、报表系统以及系统安全等。该系统的开发和应用,实现了参考实验对信息计算机化管理的要求,为中国禽流感毒株信息的管理和利用提供了有效工具。