鸡胚接种鱼腥草注射液抗新城疫病毒的研究

为了研究中药鱼腥草是否能抑制新城疫病毒的增殖,用鸡胚培养法和血凝试验,测定了鱼腥草对鸡新城疫病毒的抑制作用。试验共分为4组,第Ⅳ组接种病毒尿囊液与中药鱼腥草混合液,HA滴度0。第Ⅳ组接种新城疫病毒尿囊液与盐酸金刚烷胺混合液,HA滴度5 log2。第Ⅳ组接种新城疫病毒尿囊液与生理盐水混合液,HA滴度9 log2。第Ⅳ组不接种病毒尿囊液,不给药,HA滴度0。试验结果表明,鱼腥草对鸡胚无毒性作用;鱼腥草与病毒同时接种能完全抑制鸡新城疫病毒在鸡胚中的增殖。     

中药鱼腥草注射液鸡胚接种抗新城疫病毒的研究

用鸡胚培养法和血凝试验,测定了鱼腥草对鸡新城疫病毒的抑制作用。试验共分为4组,第1组接种病毒尿囊液与中药鱼腥草混合液,HA滴度0。第Ⅱ组接种新城疫病毒尿囊液与盐酸金刚烷胺混合液,HA滴度5 log₂。第Ⅲ组接种新城疫病毒尿囊液与生理盐水混合液,HA滴度9log₂。第Ⅳ组不接种病毒尿囊液,不给药,HA滴度0。试验结果表明：鱼腥草对鸡胚无毒性作用;鱼腥草与病毒同时接种鸡胚,能完全抑制鸡新城疫病毒在鸡胚中的增殖。     

鸡传染性支气管炎病毒HN104株的鉴定及S1基因的分子特征

2010年4月从河南省某疑似患鸡传染性支气管炎鸡场中分离到一株病毒。通过SPF鸡胚致侏儒实验,鸡红细胞凝集试验,干扰新城疫病毒增殖试验和RT-PCR试验确认该病毒为一变异的鸡传染性支气管炎病毒。该病毒尿囊液凝集鸡红细胞的HA价为0,经胰酶处理后为27;EID50（鸡胚半数感染量）为10－5.5/0.1 mL;能够显著干扰鸡新城疫病毒La Sota株在鸡胚中的增殖;动物回归试验结果显示该病毒可致SPF雏鸡出现肾脏肿大,呈花斑肾。其S1基因全长为1617 bp,经序列分析发现与鸡传染性支气管炎疫苗Massachusetts株、T株、4/91株亲缘关系较远低于78%。     

3种中药复方提取液对肉鸡生理、免疫指标的影响

为探讨复方中药提取液对肉鸡生理机能的影响,验证中药改善肉鸡生产性能的功效,研究以党参、黄芪、六神曲、麦芽、山楂等组方,设计3个中药复方(方Ⅰ、方Ⅱ和方Ⅲ),水提后浓缩,1日龄开始混饮健康肉鸡(0.5%),并进行免疫器官指数、血清蛋白、血清酶、新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)血清抗体滴度、白介素2(Interleukin-2,IL-2)、白介素3(Interleukin-3,IL-3)及平均日增重、料肉比、死亡率测定。结果显示,3个复方中药提取液对肉鸡免疫器官发育、血清蛋白及天冬氨酸转移酶(AST)、丙氨酸转移酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)含量没有影响(P0.05),方Ⅱ组肉鸡21、28日龄血清碱性磷酸酶(ALP)含量显著高于对照(P0.05);试验鸡21日龄时,3个复方中药组NDV抗体滴度显著高于对照(P0.05),28日龄时方Ⅰ组抗体滴度极显著高于对照(P0.01),方Ⅲ组抗体滴度显著高于对照(P0.05);方Ⅰ组IL-2活性在21日龄、28日龄时显著高于对照(P0.05),方Ⅲ组IL-2活性在21日龄时显著高于对照(P0.05),方Ⅰ组IL-3活性在28日龄时显著高于对照(P0.05);试验鸡28日龄时,方Ⅰ、方Ⅱ2组平均日增重高于对照,最高为方Ⅱ组72.72g/天,方Ⅰ、方Ⅱ2组料肉比低于对照,最低为方Ⅱ组2.08;死亡率最低为方Ⅰ组1%。上述结果表明,3个复方中药提取液安全性较高,对肉鸡生理机能均有一定改善作用,其中方Ⅰ在延缓血清抗体滴度降低速度,促进细胞因子分泌方面效果明显,而方Ⅱ在提高肉鸡生产性能方面效果较好。     

Ⅰ型鸭肝炎病毒（DHV-Ⅰ）在鸡胚中的增殖及感染力的测定

摘要：将Ⅰ型鸭肝炎病毒（DHV-Ⅰ）接种9日龄SPF鸡胚尿囊腔（0.2 mL/胚）进行增殖,制备鸡胚成纤维细胞（CEF）,并分别运用CELD50法和TCID50法测定DHV的感染力。结果表明,DHV-Ⅰ在SPF鸡胚内成功增殖,致死鸡胚具有典型临床症状和体表特征,所增殖病毒的CELD50和TCID50分别为10-5.6/0.2 mL和10-5.12/0.1 mL。     

IB(M41株)种毒代次和免疫原性的关系

评估不同代次IBV M41株种毒是否可以作为生产用种子。将M41株种毒用SPF胚连传8代,从中选出第3、第5、第7代,测定其EID50。并用此3代M41株鸡胚尿囊液制毒的油乳苗免疫易感鸡,以HI试验检测其抗体水平。3种疫苗免疫鸡均保护9/10以上,对照鸡全发病;对免疫后与免疫前HI抗体水平的比较表明,免疫后抗体平均滴度提高3倍以上。不同代次的M41毒株的免疫原性仍然保持良好,可以正常用来制造疫苗和建立种子批。     

实验性免疫应激对雏鸡血液激素与免疫功能的影响

将 2 0 0只 2周龄雏鸡随机分成试验组 (T)和对照组 (C)。以鸡新城疫 (ND)Ⅰ系疫苗作为免疫应激原 ,给T组雏鸡肌肉接种 2头份 /(mL·只 ) ,诱发免疫应激 ;C组不做任何处理。分别于接种后不同时间检测免疫应激对试验鸡血液激素水平和免疫功能的影响。结果 ,T组雏鸡血液中促肾上腺皮质激素 (ACTH)、皮质酮 (Cor)、甲状腺素 (T4 )显著 (P <0 0 5 )或极显著 (P <0 0 1)高于C组 ,血液中T淋巴细胞对PHA的反应性显著降低 ,血清总IgG先减少 ,后增多。血液中皮质酮与T淋巴细胞转化试验结果呈负相关、与血清IgG变化无相关性。提示发生免疫应激后 ,鸡血液中ACTH ,Cor ,T4 会发生明显变化 ;体液免疫功能先受到抑制 ,然后得到加强 ;细胞免疫功能受到抑制     

不同中药复方对蛋鸡ND免疫效果的影响

本试验通过对试验鸡的免疫器官指数和不同日龄新城疫（ND）抗体水平进行检测,来探讨3个不同中药复方对鸡群免疫功能的影响。选取7日龄健康蛋公雏鸡500只随机分10组,并于7d、21d用La-Sota活苗免疫,1-9组从第7天开始分别用3个不同中药复方按饲料量的0.5%、1.0%、1.5%添加,第10组为不添加任何药物对照组。用药组连续给药15d,各组分别于21、28、35、42、49、56、63d采血测定新城疫血凝抑制（HI）抗体水平以及免疫器官指数的变化。添加3个不同的中药复方,复方Ⅰ1.0%、Ⅱ1.0%均能使鸡抗体水平显著提高,35-63日龄抗体水平一直在8-9log2。复方Ⅲ1.5%组与对照组比较差异显著。21、35日龄各指数与对照组比较差异显著,其他日龄无显著差异。3个不同中药复方对对雏鸡的ND抗体水平和免疫器官指数均有一定的提高作用,其中复方Ⅰ1.0%剂量的效果为最佳。     

小花棘豆黄酮对绵羊瘤胃微生物数量的影响

探讨小花棘豆黄酮对绵羊瘤胃微生物数量的影响,为小花棘豆的综合利用提供参考。将12只和田羊随机分为4组,即对照组、试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组。试验组分别按10,30,50 mg／kg的剂量饲喂小花棘豆黄酮,试验持续35 d。试验前及试验后每隔7 d取瘤胃液,检测瘤胃液中微生物数量的变化。结果显示,与对照相比,试验羊瘤胃液中总细菌数均有不同程度的升高,其中从第21天开始试验Ⅰ组和试验Ⅱ组瘤胃液总细菌数均显著高于对照（P＜0．05）,但试验Ⅲ组与对照差异不显著（P＞0．05）;所有试验羊瘤胃液中厌氧真菌数和瘤胃原虫数均无明显变化,试验Ⅰ组和试验Ⅱ组瘤胃液纤维素降解菌数量无明显变化,试验Ⅲ组可降低白色瘤胃球和黄化瘤胃球菌数,但与对照差异不显著（P＞0．05）。结果表明,在日粮中适量添加小花棘豆黄酮对绵羊瘤胃微生物数量无不良影响。     

糖/尿素饲料舔块育肥西杂牛效果试验

为了验证糖/尿素饲料舔块促进秸秆饲料消化利用的效果,选择西杂公牛20头分4组进行45d的强度育肥,试验Ⅰ组饲喂舔砖十微贮草;试验Ⅱ组饲喂舔砖十普通麦草;试验Ⅲ组饲喂微贮草;对照组饲喂普通麦草。结果表明：试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组日增重分别较对照组高707g、505g和383g,提高550%、450%、344%。对照组与试验组经F检验增重差异均极显著（P＜0.01）。试验Ⅰ组较Ⅱ组多增重157g,提高22.2%,差异不显著（P＞0.05）。试验Ⅰ组较Ⅲ组多增重324克,提高60%,差异显著（P＜0.05）,增重效果明显。试验Ⅱ组比Ⅲ组多增重167g,提高30.9%,差异不显著（P＞0.05）。说明添加糖/尿素饲料舔块能够更好的促进秸秆饲料的消化利用。试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组平均每头牛每天比对照组分别净增纯收入2.56元、2.33元、1.58元,说明试验Ⅰ、Ⅱ组比试验Ⅲ组和对照组育肥牛增重快,经济效益十分显著。     

鸡传染性法氏囊病病毒的分离鉴定与培养特性研究

为研究鸡传染性法氏囊病病毒在不同宿主上的培养特性,从河南省某疑似感染鸡传染性法氏囊病病毒的鸡场采集病料,通过琼脂免疫扩散试验初步筛选出IBDV毒株,并将毒株回归易感鸡,在SPF鸡胚及DF1细胞上培养。结果显示：培养出的病毒作为抗原与标准阳性血清之间均出现阳性沉淀线;回归SPF鸡试验显示发病率达100%,死亡达60%,病死鸡只出现法氏囊肿大、出血甚至出现紫葡萄样;该毒株能引起鸡胚CAM增厚、胚体出血,引起DF1细胞变圆脱落;ELD50与TCID50分别为10-4.6/0.1 mL、10-5.5/0.1 mL。试验证实IBDV分离株,属于超强毒株,该毒株可以在鸡胚和DF1细胞上适应增殖,将其命名为HN12号分离株。     

麻花鸡副黏病毒ZH-1株F基因真核表达载体的构建

将麻花鸡副黏病毒ZH-1株毒种接种于11日龄SPF鸡胚,收集48～96h死亡的鸡胚尿囊液.参考已发表的鸡源副黏病毒F基因序列,设计并合成了一对特异性引物,用以扩增麻花鸡副黏病毒ZH-1株F基因,预期扩增的F基因片段包含完整的开放阅读框.通过RT-PCR扩增出麻花鸡副黏病毒ZH-1株F基因片段,琼脂糖凝胶电泳回收、纯化,得到F基因片段,经EcoR I和Sal I消化,将F基因克隆进入PCI-neo载体,转化大肠杆菌DHSa,挑选菌落,经限制性核酸内切酶Sal I和EcoR I双酶切及PCR鉴定,结果证明重组真核表达载体PCI-neo-F构建成功,为下一步在哺乳动物细胞vero细胞中表达打下良好的基础.扩增的F基因测序后,与其他禽副黏病毒1型F基因进行系统发育树的分析比较,为阐明麻花鸡副黏病毒ZH-1株的遗传背景奠定了基础.     

麻杏石甘汤中抗新城疫病毒有效成分的研究

新城疫是由新城疫病毒引起的禽传染性疾病。麻杏石甘汤方剂对目前生产中常发的呼吸道疾病有明显的治疗作用,也有抗病毒和抑菌作用。通过对麻杏石甘汤中4味药物的不同剂量比例组方,采用煎煮的方法提取药物有效成分。测定提取液对鸡胚的最大致死浓度和对红细胞的凝集作用;以药液的不同浓度直接作用于病毒,接种鸡胚检验病毒滴度的变化,观察发现8种配方都有抑制病毒的作用,其中麻黄是发挥抗病毒作用的主要成分。药物对病毒的抵抗作用与药物本身对红细胞的凝集作用没有直接的联系。     

新城疫病毒HN蛋白单克隆抗体的制备及其抗原捕捉ELISA方法的建立

为建立一种快速的新城疫病毒病原检测方法。本研究以原核表达的重组HN蛋白免疫7周龄BALB/c雌鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经间接ELISA方法筛选,成功获得了1株能稳定分泌抗新城疫病毒HN蛋白的McAb杂交瘤细胞,命名为4E8,4E8亚类鉴定为重链属于IgG2a,轻链属于κ链。以多克隆抗体作为包被抗体、单克隆抗体4E8作为检测抗体,通过双抗夹心ELISA各个反应条件的优化,建立检测新城疫病毒抗原捕捉ELISA方法。该方法对EDSV、ITLV、IBV、IBDV不发生交叉反应,其敏感性比HA试验要高4倍以上,与RT-PCR相比较,符合率、敏感性和特异性分别为95.6%、93.3%、96.1%。本研究建立的NDV AC-ELISA有良好的重复性、敏感性和特异性,可应用于新城疫病毒感染的早期诊断。     

几种中药在鸡胚上对鸡常见病毒的作用效果试验

本实验用水煎法从中药桑叶、茵陈蒿、马齿苋中提取全成分,用醇提法从中药野菊花中提取有效成分,并以其为实验药物,观察在10--12日龄鸡胚上对禽流感病毒（AIV）、新城疫病毒（NDV）、鸡传染性支气管炎病毒（IBV）的作用效果。结果表明,在安全浓度范围内,几种中药对以上病毒均具有一定的阻断和抑制作用。其中,茵陈蒿全成分提取液对AIV和NDV的阻断和抑制作用较为突出。     

新城疫病毒诱导黄粉虫抗病毒肽的效果分析

目的：观察鸡新城疫病毒（NDV）诱导黄粉虫是否产生抗鸡新城疫病毒肽。方法：先用鸡胚培养鸡新城疫病毒以扩增病毒,然后提取病毒液备用,接着用鸡新城疫病毒液接种刺伤黄粉虫幼虫,2～3天后提取黄粉虫体内的抗病毒物质,测定其血凝效价和鸡新城疫病毒诱导鸡胚发病抑制试验结果。结果 ：黄粉虫抗病毒肽在血凝抑制试验中的效价为1∶64;在鸡新城疫病毒诱导鸡胚发病抑制试验中有一定效果,但不明显。