鸡新城疫卵黄抗体的制备及对鹅疑似副粘病毒病治疗效果的研究

鸡新城疫由于其流行范围广,危害大,而备受关注。目前,对于散发新城疫多采用卵黄抗体治疗。本文阐述了鸡新城疫卵黄抗体制备工艺,并对制备出的卵黄抗体在鹅疑似副粘病毒病治疗的效果进行研究。     

鸡新城疫卵黄抗体的制备及对鹅疑似副粘病毒病治疗效果的研究

鸡新城疫由于其流行范围广,危害大,而备受关注。目前,对于散发新城疫多采用卵黄抗体治疗。本文阐述了鸡新城疫卵黄抗体制备工艺,并对制备出的卵黄抗体在鹅疑似副粘病毒病治疗的效果进行研究。     

猪流行性腹泻病毒3种抗原卵黄抗体的制备

【目的】探讨猪流行性腹泻病毒(PEDV)3种不同抗原制备的卵黄抗体对PEDV的中和能力,为抗猪流行性腹泻卵黄抗体的制备提供新的方法和理论基础。【方法】根据PEDV S糖蛋白基因设计引物扩增PEDVS534基因(636~789位氨基酸)和PEDV COE基因(499~638位氨基酸),并构建原核表达质粒pET32a-PEDV S534和pET32a-COE,分别转化表达菌株BL21(DE3)进行诱导表达。以原核表达的PEDV S534蛋白、COE蛋白以及PEDV灭活病毒为抗原,分别免疫产蛋鸡并制备卵黄抗体,通过病毒中和试验评价各卵黄抗体的中和效力。【结果】成功表达了PEDV S534蛋白和COE蛋白,Western-Blotting分析显示,2种蛋白均具有很好的免疫原性;制备的3种特异性卵黄抗体均具有一定的病毒中和能力,PEDV S534蛋白特异性卵黄抗体的中和效价为1∶12,COE蛋白特异性卵黄抗体的中和效价为1∶25,而PEDV灭活病毒的卵黄抗体中和效价达到1∶120。【结论】PEDV灭活病毒的中和能力最强,其次为COE蛋白特异性卵黄抗体,PEDV S534卵黄抗体的中和能力较弱。     

鸭病毒性肝炎高免卵黄抗体的研制

用DVH弱毒疫苗和DVH油乳剂苗免疫健康高产蛋鸡制备高免卵黄抗体,研究了高免卵黄抗体治疗雏鸭DVH的疗效。结果表明,高免卵黄抗体治疗DVH的疗效取决于卵黄抗体的中和效价、治疗时间和免疫途径。卵黄抗体的中和效价应达28.5以上,并且在感染DVH 24 h以内对雏鸭进行肌肉注射,免疫效果最好。     

鸭病毒性肝炎多价卵黄抗体的研制

选取4株不同地区分离的适应鸡胚的鸭肝炎病毒作为疫苗株制备灭活苗,免疫试验鸡制备卵黄抗体。鸡胚中和试验表明,第三次免疫后15天,抗体中和效价(PD50)都在29以上,卵黄抗体保护雏鸭试验显示,本试验制备的卵黄抗体有着显著的预防效果,并大大提高攻毒后雏鸭的存活率。     

鸭病毒性肝炎高免卵黄抗体的研制

用DVH弱毒疫苗和DVH油乳剂苗免疫健康高产蛋鸡,可以制备高免卵黄抗体.高免卵黄抗体治疗雏鸭病毒性肝炎疗效的试验表明,用卵黄抗体治疗DVH的疗效取决于卵黄抗体的中和效价及治疗的时间.卵黄抗体的中和效价应达28.5以上,并且在感染DVH24 h以内对雏鸭进行肌肉注射,免疫效果为最适宜.     

心包积液-肝坏死综合征高免卵黄抗体的研制

采取心包积液-肝坏死综合征病鸡的肝脏匀浆冻融,接种SPF鸡胚,制备尿囊液灭活水苗,用两种免疫程序对产蛋鸡进行免疫,用琼脂扩散试验检测其卵黄抗体水平,制备高免卵黄抗体。经中和试验和临床试验,结果显示高免卵黄抗体对该病的预防和治疗效果明显。     

犬瘟热高免卵黄抗体的制备及防治试验

用鸡胚成纤维细胞培养犬瘟热病毒制备油乳剂灭活苗,多次免疫蛋鸡制备卵黄抗体。经临床治疗试验证实卵黄抗体可有效治疗犬瘟热早期感染,治愈率达85．7％。为生产异源动物抗体提供参考。     

抗重组猪三十九肽胆囊收缩素卵黄抗体的制备

制备重组猪三十九肽胆囊收缩素(GST-CCK39),以其为抗原免疫28周龄的蛋鸡,用水稀释脱脂处理,聚乙二醇(PEG)一步法制备高效价卵黄抗体,并用免疫琼脂扩散试验、ELISA、Dot-ELISA检测其效价及特异性。结果表明,免疫琼脂扩散测得特异性抗体效价达1∶16以上,ELISA效价达1∶12 800以上;Dot-ELISA显示所获得卵黄抗体具有较强的特异性;高效价,特异性的卵黄抗体可维持50 d以上。表明用重组蛋白GST-CCK39免疫蛋鸡后能获得效价高、特异性强的卵黄抗体。     

鸡PLA2基因的克隆与原核表达及PLA2蛋白卵黄抗体的制备

【目的】克隆并原核表达鸡PLA2基因,小量制备鸡PLA2卵黄抗体,为大规模制备PLA2卵黄抗体作为饲料添加剂提供参考。【方法】提取鸡胰脏总RNA,利用RT-PCR方法获得鸡PLA2基因,将其克隆至pGEX-4T-1原核表达载体中,构建表达载体pGEX-4T-1-PLA2,转入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达GST-PLA2融合蛋白。将GST-PLA2融合蛋白免疫青年蛋鸡,每次0.3mg/只,共免疫4次,收集鸡蛋,提取卵黄抗体,采用West-ern Blotting检测抗体的特异性。【结果】成功克隆出了鸡PLA2基因,构建了pGEX-4T-1-PLA2原核表达载体,并诱导表达了分子质量为44.59ku的GST-PLA2融合蛋白。GST-PLA2融合蛋白免疫蛋鸡后获得了卵黄抗体,经West-ern Blotting检查,制备的卵黄抗体具有很好的特异性。【结论】构建了表达鸡PLA2基因的表达系统,并成功的制备了抗鸡PLA2的卵黄抗体。     

鸡PLAM2基因的克隆与原核表达及PLA2蛋白卵黄抗体的制备

【目的】克隆并原核表达鸡PLA2基因,小量制备鸡PLA2卵黄抗体,为大规模制备PLA2卵黄抗体作为饲料添加剂提供参考。【方法】提取鸡胰脏总RNA,利用RT-PCR方法获得鸡PLA2基因,将其克隆至pGEX-4T-1原核表达载体中,构建表达载体pGEX-4T-1-PLA2,转入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达GST-PLA2融合蛋白。将GST-PLA2融合蛋白免疫青年蛋鸡,每次0.3mg/只,共免疫4次,收集鸡蛋,提取卵黄抗体,采用West-ern Blotting检测抗体的特异性。【结果】成功克隆出了鸡PLA2基因,构建了pGEX-4T-1-PLA2原核表达载体,并诱导表达了分子质量为44.59ku的GST-PLA2融合蛋白。GST-PLA2融合蛋白免疫蛋鸡后获得了卵黄抗体,经West-ern Blotting检查,制备的卵黄抗体具有很好的特异性。【结论】构建了表达鸡PLA2基因的表达系统,并成功的制备了抗鸡PLA2的卵黄抗体。     

肠毒素型大肠杆菌F18菌毛对产蛋鸡免疫的原性

提取猪源肠毒素型大肠杆菌(ETEC)标准株和临床分离株F18菌毛,并制备弗氏佐剂苗,分别免疫产蛋母鸡后用间接ELISA法定期检测母鸡卵黄抗体和血清抗体效价.结果表明:无论标准株还是分离株,F18菌毛对产蛋鸡均具有良好的免疫原性,卵黄抗体效价最高可达1∶25600,血清抗体效价高于卵黄抗体效价,最高可达1∶51200.     

猪流行性腹泻病毒卵黄抗体的研制

选取猪流行性腹泻病毒感染组织制备灭活苗,免疫蛋鸡制备卵黄抗体,3次免疫后琼扩抗体效价达到1:32;经动物实验证实,卵黄抗体可有效抵抗猪流行性腹泻病毒强毒的攻击,试验为猪流行性腹泻病毒的有效防控奠定基础。     

卵白抗体防治新城疫的试验

笔者用制备卵黄抗体的方法制备新城疫（ＮＤ）卵白抗体，与卵黄体抗体比较，ＨＩ效价高１个滴度，保护试验保护率为１００％，发生ＮＤ的８５６４０只病鸡进行治疗试验，其保护率达９３．６％。     

抗番鸭细小病毒卵黄抗体的制备

[目的]有效预防和治疗番鸭细小病毒病。[方法]用番鸭细小病毒连续免疫产蛋母鸡3次,收集鸡蛋,并制备出高免卵黄抗体。通过琼脂扩散试验对制备的卵黄抗体进行效价测定,用雏番鸭进行中和与治疗试验。[结果]制备的卵黄抗体琼扩效价达到1∶32,能有效中和番鸭细小病毒对雏番鸭的致病性,对发病的雏番鸭有很好的治疗作用。[结论]该研究为番鸭细小病毒的预防和治疗提供了一种有效的生物制品。     

抗犊牛支原体肺炎卵黄抗体的制备

以灭活的支原体免疫高产母鸡,用分离、匀浆的方法制备高效价卵黄抗体,并应用间接血凝检测鸡卵黄中免疫球蛋白(Immunoglobulin of egg yolk,IgY)的活性。结果显示灭活的支原体能诱导鸡产生高效价的抗体,且效价高达4.096×103,经上述简单、实用的路线,制备出了高纯度的IgY。卵黄是一种含量高、经济的特异性抗体源,可为犊牛支原体肺炎的防治提供新的途径。     

抗人轮状病毒IgY的制备

利用能引起婴儿腹泻的轮状病毒制备灭活疫苗,免疫产蛋母鸡,并用ELISA法检测抗体活性。结果表明:母鸡在免疫后第11 d卵黄中出现特异性抗体,加强免疫后抗体活性迅速升高,免疫35~42 d达到高水平,3次免疫后活性较长时间不下降。经硫酸铵两步沉淀法从鸡卵黄中分离抗人轮状病毒卵黄免疫球蛋白(抗HRV-IgY),透析纯化IgY测得抗体蛋白含量达14 mg/m l蛋黄液。     

卵黄抗体五种提取工艺比较及初步应用

为了得到较优的卵黄抗体提取工艺,试验改良了辛酸法、水稀释法、氯仿法、硫酸铵沉淀法与聚乙二醇沉淀法5种提取方法。IPGT诱导表达重组猪致病性大肠杆菌(Escherichia coli)毒素STxB蛋白(rSTxB),与佐剂71VG乳化制备免疫原免疫蛋鸡,利用改良的聚乙二醇沉淀法提取高免卵黄抗体,采用SDS-PAGE电泳检测抗体纯度,通过Western blot检测卵黄抗体和血清抗体效价。结果表明,辛酸法、水稀释法、氯仿法、硫酸铵沉淀法、聚乙二醇沉淀法提取效率分别为96.00、81.99、155.50、65.34、46.00 mg/mL,其中聚乙二醇沉淀法的提取纯度最高。重组STxB蛋白分子量大小约25 kDa,血清中抗体效价最高达到64 000倍,卵黄抗体最高稀释倍数为16 000倍。综合评估,聚乙二醇的提取法相对较优,且提取的卵黄抗体具有良好的免疫活性。     

鸡新城疫卵黄荧光抗体的制备及其应用

本试验以鸡新城疫强毒株,采用大剂量连续强化免疫的方法免疫产卵母鸡,获得了含有高效价抗新城疫抗体的鸡卵。在室温条件下,用硫酸葡聚糖钠沉淀的方法,从免疫鸡卵黄液内提取出高效价的、比较纯净的IgG。以异硫氰酸荧光素标记提纯的卵黄IgG所制成的荧光抗体,对人工感染的鸡胚、鸡只和细胞培养物染色检查的结果表明,卵黄荧光抗体具有特异性强、制备方法简便、成本低廉、保存期长而不改变染色性能等优点。因此,本试验所研创的荧光抗体制备法具有广泛的应用和推广价值。     

抗传染性法氏囊病与鸡新城疫高免卵黄抗体的研制

试验通过4种不同的免疫程序,对鸡进行传染性法氏囊病与鸡新城疫免疫接种,并利用琼脂扩散试验及病毒的红细胞凝集抑制试验检测抗体效价及分析,确定制备抗传染性法氏囊病与鸡新城疫高免卵黄抗体的最佳免程序为一免为1倍剂量,10后进行二免,免疫剂量为2倍剂量,并根据效价结果,适当增加一次免疫,其免疫剂量为4倍量。同时利用收集的卵黄制备出高免卵黄抗体,通过临床应用试验,有很好的治疗效果。