巴西橡胶树离体茎段培养研究

[目的]诱导橡胶树茎段腋芽分化增殖,为橡胶树栽培提供大量优良的新型无性系种植材料。[方法]以橡胶树优良单株带芽茎段作外植体,以MS为基本培养基,研究不同激素配比的培养基对橡胶树腋芽分化增殖的影响。[结果]以多茵灵2．0g／L＋青霉素400．0mg／L预处理＋O．1％HgCl2表面消毒,污染率降至29％;以MS＋6一BA2．0mg／L为启动培养基,腋芽萌动率达85％。以MS＋6-BA3．0mg／L＋NAA0．1mg／L为生长增殖培养基,萌动腋芽生长发育正常。[结论]多菌灵和抗生素预处理,可以明显降低外植体污染率和死亡率。6-BA对腋芽的萌动和生长起重要作用,而添加2,4一D则抑制腋芽萌发及生长。     

巴西橡胶树树根组织培养外植体消毒研究

[目的]寻找一条降低橡胶树树根组织培养中外植体污染的有效途径。[方法]对巴西橡胶树树根进行组织培养,取林段断根处理30d后的新根为外植体,采用1g／L多茵灵、0．1％HgCl2和不同浓度益培隆对其进行了消毒试验。[结果]在常规消毒前先采用1g／L多茵灵对外植体处理2．5h,再用75％乙醇消毒308及0．1％HgCl：消毒6min,然后接种到添加0．1％益培隆的固体愈伤诱导培养基上,培养30d后外植体污染率下降至44．59％,存活率达25．60％。[结论]为降低橡胶树树根组织培养中外植体污染提供了理论依据。     

砧木-接穗互作对巴西橡胶树产量及茎围生长的影响

迄今为止,巴西橡胶树[Hevea brasiliensis(Willd.ex Adr.de Juss.)Muell.-Arg.]仍以人工芽接繁殖的无性系作为主要种植材料。然而,即使是同一无性系,由于所用砧木材料不同,其生势及产量往往也会表现出很大的差异。本研究通过双列分析就砧木-接穗互作对橡胶无性系生势及产量的影响进行了分析研究。试验采用裂区设计,重复4次,试验材料包括按6×6部分双列组配模式所得到的36个不同砧穗组合的芽接无性系。各种砧木和接穗一般及特殊配合力的分析结果显示,砧木PB235及IAN873不但产量性能高,而且一般配合力也相对较强。由于采用未经选择的实生苗作砧木时无性系的干胶产量及一般配合力均很低,故该材料不宜用作无性系砧木。就生势而言,几种参试砧木的表现基本相似,并无显著差异。     

巴西橡胶树的离体微繁殖

以取自巴西橡胶树Hevea brasiliensis Muell．Arg．）种子实生苗的腋芽为外植体，利用含1．0mg／LKT，1．0mg／L2，4-D，20g／L蔗糖，以及4g／L琼脂粉的Ms培养基成功获得腋芽无菌苗。将其转入附加S．0Fng／LNAA，3．0me4LIBA，50g／L蔗糖，以及4g／L琼脂粉的MS培养基可进一步诱导生根。试验中我们还发现，尽管从叶片及腋芽外植体均能诱导出大量愈伤组织，但最终均未能实现体细胞胚胎发生及植株再生。采用合适的培养基能够诱导腋芽外植体离体萌发并生根，这一结果表明，通过进一步的研究和探索，完全有可能借助该途径建立巴西橡胶树的高效离体微繁体系。     

砧木-接穗互作对巴西橡胶树产量及茎围生长的影响

迄今为止,巴西橡胶树[Hevea brasiliensis (Willd.ex Adr.de Juss.)Muell.-Arg.]仍以人工芽接繁殖的无性系作为主要种植材料.然而,即使是同一无性系,由于所用砧木材料不同,其生势及产量往往也会表现出很大的差异.本研究通过双列分析就砧木-接穗互作对橡胶无性系生势及产量的影响进行了分析研究.试验采用裂区设计,重复4次,试验材料包括按6×6部分双列组配模式所得到的36个不同砧穗组合的芽接无性系.各种砧木和接穗一般及特殊配合力的分析结果显示,砧木PB 235及IAN 873不但产量性能高,而且一般配合力也相对较强.由于采用未经选择的实生苗作砧木时无性系的干胶产量及一般配合力均很低,故该材料不宜用作无性系砧木.就生势而言,几种参试砧木的表现基本相似,并无显著差异.     

巴西橡胶树抗氧化胁迫基因——超氧物歧化酶基因的遗传转化及植株再生

本研究采用农杆菌介导法成功实现巴西橡胶树（Hevea Brasiliensis Muell．Arg）的遗传转化及植株再生。试验中以橡胶树未成熟花药的愈伤组织为转化材料，并通过与含有巴西橡胶树超氧物歧化酶基因（HbSOD）表达载体的根癌农杆菌进行共培养最终获得转基因植株。所用表达载体为CaMV 35S启动子控制下的组成型质粒表达载体．其中带有GUS（β-葡糖醛酸酶，uidA）报告基因，nptⅡ（新霉素磷酸转移酶）选择性标记基因，以及HbSOD（巴西橡胶树超氧物歧化酶）目的基因。为了进一步优化转化体系，试验中还就共培养时间，共培养基成分。以及卡那霉素浓度等因子对转化效果的影响进行了系统性的比较研究和分析。其结果显示，在卡那霉素浓度为300mg／L的培养基上存活的转化愈伤呈现出强烈的GUS阳性反应。之后，这些转化愈伤在含有2．0mg／L精胺及0．1mg／L脱落酸的MS2培养基上再生出体细胞胚胎。然后。成熟胚胎在附加0．2ms／L赤霉酸、0．2mg／L细胞分裂素。以及0．1mg／L吲哚-3-乙酸的MS4培养基上得以继续萌发并进一步发育成小植株。试验中所得转化频率为锄。转化植株在形态上与非转化植株相似。GUS组织学分析显示，GUS基因在转基因植株的胚胎及叶片中均得到表达。PCR（多聚酶链式反应）扩增及基因组Southern印迹杂交分析进一步证实了转基因植株基因组中uidA、nptⅡ及HbSOD基因的存在。     

高产速生的橡胶树新一代种植材料——自根幼态无性系 中国热带农业科学院生物技术研究所热带作物生物技术国家重点实验室

橡胶树是异花授粉植物,实生树的橡胶产量株问差异甚大,平均产量不到芽接树的1/3。目前,生产上大部分种植芽接树(但砧木对接穗的影响达15%-40%),只有少部分缺乏种胶知识的胶农种植实生树。为了获得更高的橡胶产量,培育高产无性系的扦插苗成了各国橡胶树栽培育种研究者的共同课题。国内外大量研究资料表明;巴西橡胶树老态枝条扦插生根率极低。本研究组采用花药培养体细胞植株与离体微体繁殖结合的技术路线,率先解决了培育高产速生橡胶树自根幼态无性系这一世界难题。创立了分阶段昼夜多次变温的培养方法,改良了培养基,使花药植株诱导率从2%～2…     

甘薯茎尖培养与脱毒技术研究

以红姑娘2号甘薯为材料,研究6-BA、NAA、GA,不同配组对茎尖培养的影响,并采用温水钝化法及适宜的茎尖大小来提高红薯病毒脱毒率,用指示植物法对再生植株无性系进行病毒检测。研究结果表明,培养基中的6-BA、NAA、GA,不同浓度配比对红姑娘2号甘薯茎尖培养不定芽、不定根的诱导有明显的影响。在诱导产生愈伤组织和丛芽阶段,培养基MS＋6-BA1．0mg／L＋NAA0．01mg／L＋GA30．1mg／L效果较好。而1／2MS＋NAA0．2mg／L是红姑娘2号试管苗的适宜生根培养基。通过指示植物法检测90个无性系,平均脱毒率为96．7％。     

早实核桃保花保果技术研究

[目的]筛选出有效的早实核桃保花保果技术措施。[方法]以2年生早实优良品种云新核桃为试材,采用田间试验的方法,选择营养元素和激素等共7种,每种设置3种浓度梯度,以清水为对照,研究不同营养元素和激素对核桃坐果率的影响。[结果]喷施蔗糖可以显著提高核桃坐果率,当浓度达到3g／L时,坐果率达到29．9％;尿素浓度以5g/L为佳,核桃坐果率比对照提高60．4个百分点;KH2PO4浓度为1、3、5g/L时,核桃坐果率分别比对照提高20．2、3．O、25．0个百分点;硼砂喷施浓度5g/L效果较好,核桃坐果率可达51．2％,比对照提高36．0个百分点;GA3作为保果试剂效果不明显;2,4-D浓度为35mg／L时,核桃坐果率比对照提高11.9个百分点;油菜素喷施浓度以65mg／L效果较好。[结论]喷施蔗糖（3g／L）、尿素（5g／L）、KH2PO4（5g／L）、硼砂（5g/L）和2,4-D（35mg／L）均能明显提高坐果率,以尿素效果最为显著,喷施GA3和油菜素效果不明显。     

巴西橡胶树SSR反应体系的优化

以巴西橡胶树无性系针选2号为试验材料,对橡胶树SSR-PCR反应的5个主要因素:TaqDNA聚合酶、Mg2 、引物、DNA模板及dNTPs进行优化试验。筛选出了各反应因素的最佳水平,建立了橡胶树SSR-PCR最佳反应体系(20μl):TaqDNA聚合酶0.8U;Mg2 浓度为1.5mmol/L;引物浓度0.5μmol/L;模板DNA含量50ng;dNTPs浓度0.25mmol/L。并利用此反应体系,用引物1对14个巴西橡胶树品种进行SSR分析,8%的非变性聚丙稀酰胺凝胶电泳检测显示不同品种间DNA谱带多态性丰富。结果证明,此反应体系是稳定可靠的。这为下一步进行的遗传多样性分析、指纹图谱构建等研究奠定基础。