6株芽孢杆菌的生物学特性比较研究

以实验室分离保存的6株芽孢杆菌为材料,对其主要生物学特性进行了研究,包括产酶活力,对NaCl、牛胆盐、人工胃液和人工肠液的耐受性及对抗生素的敏感性。结果显示,枯草芽孢杆菌1、凝结芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌均能产生较高活性的中性蛋白酶和淀粉酶;2株枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌能耐较高浓度的NaCl;枯草芽孢杆菌2、凝结、纳豆和蜡样芽孢杆菌对牛胆盐的耐受性较强;除地衣芽孢杆菌外,其他5株芽孢杆菌对胃液和肠液的耐受性较好;6株芽孢杆菌均对常用饲用抗生素敏感。结果表明,枯草1、凝结、蜡样芽孢杆菌是优良的候选益生菌菌株。     

广西猪源益生菌的分离鉴定与生物学特性研究

为了解广西地区猪粪便与微生态发酵饲料中益生菌的存在情况及合理开发和利用猪源益生菌,本试验共采集了15份猪粪便样品和5份益生菌发酵饲料并对其进行益生菌的分离,研究益生菌的形态学特性、生理生化特性及16S rRNA分子序列,进行生长曲线、耐胆盐试验、温度敏感试验、模拟胃肠道耐受试验、耐药性试验、体外抑菌试验、小鼠安全性试验、体内/外抑菌试验,对分离菌株进行生物学特性的研究分析。结果显示,本试验共分离鉴定出6种、29株益生菌,分别为1株屎肠球菌(C2)、2株乳酸肠球菌(C1、C3)、3株植物乳杆菌(R20、R30、R37)、4株干酪乳杆菌(R41～R44)、7株枯草芽孢杆菌(K1～K7)和12株蜡样芽孢杆菌(Y1～Y12)。从中筛选出6株具有生长性能好、耐胆盐、耐高温、对胃肠道耐受、体外抑菌能力强的益生菌:乳酸肠球菌C1、屎肠球菌C2、植物乳杆菌R20、干酪乳杆菌R41、枯草芽孢杆菌K1和蜡样芽孢杆菌Y3。将筛选出的具有优良特性的菌株进行小鼠安全性试验,结果表明,在10~9 CFU/mL浓度下灌胃6株益生菌对小鼠是安全无毒害的。与此同时,C2、R20、R41、Y3能极显著提高小鼠日增重(P0.01),K1能显著提高小鼠日增重(P0.05)。体内抑菌试验结果表明,C2、R20、K1能降低沙门氏菌G21感染的小鼠的死亡率,有一定程度的体内抑菌作用。各项试验结果表明,R20和K1可作为猪源益生菌的选择菌株。     

广西猪源益生菌的分离鉴定与生物学特性研究

为了解广西地区猪粪便与微生态发酵饲料中益生菌的存在情况及合理开发和利用猪源益生菌,本试验共采集了15份猪粪便样品和5份益生菌发酵饲料并对其进行益生菌的分离,研究益生菌的形态学特性、生理生化特性及16S rRNA分子序列,进行生长曲线、耐胆盐试验、温度敏感试验、模拟胃肠道耐受试验、耐药性试验、体外抑菌试验、小鼠安全性试验、体内/外抑菌试验,对分离菌株进行生物学特性的研究分析。结果显示,本试验共分离鉴定出6种、29株益生菌,分别为1株屎肠球菌（C2）、2株乳酸肠球菌（C1、C3）、3株植物乳杆菌（R20、R30、R37）、4株干酪乳杆菌（R41~R44）、7株枯草芽孢杆菌（K1~K7）和12株蜡样芽孢杆菌（Y1~Y12）。从中筛选出6株具有生长性能好、耐胆盐、耐高温、对胃肠道耐受、体外抑菌能力强的益生菌：乳酸肠球菌C1、屎肠球菌C2、植物乳杆菌R20、干酪乳杆菌R41、枯草芽孢杆菌K1和蜡样芽孢杆菌Y3。将筛选出的具有优良特性的菌株进行小鼠安全性试验,结果表明,在10⁹ CFU/mL浓度下灌胃6株益生菌对小鼠是安全无毒害的。与此同时,C2、R20、R41、Y3能极显著提高小鼠日增重（P<0.01）,K1能显著提高小鼠日增重（P<0.05）。体内抑菌试验结果表明,C2、R20、K1能降低沙门氏菌G21感染的小鼠的死亡率,有一定程度的体内抑菌作用。各项试验结果表明,R20和K1可作为猪源益生菌的选择菌株。     

牛瘤胃微生物的分离鉴定与生化特性分析

【目的】 通过对瘤胃液中分离所得的菌株进行研究，为益生菌制剂的制备提供基础数据。【方法】 采集10头健康荷斯坦奶牛的瘤胃液，通过涂布、特性培养、纯化等步骤获得单一菌株，提取细菌DNA，进行16S rDNA的PCR扩增。通过16S rDNA基因测序鉴定后进行序列比对并构建系统发育树，确定菌株种类。对不同种类的细菌进行0~48 h的培养测定其生长特性，并进行耐酸碱和耐胆盐试验。【结果】 通过涂布分离菌株得到20株分离菌，经PCR扩增后测序发现20株菌属于7种不同的菌，大致确定L7为解淀粉芽孢杆菌、K7为枯草芽孢杆菌、S7为嗜麦芽窄食单胞菌、C2为地衣芽孢杆菌、M7为马链球菌、F7为弗氏酸柠檬杆菌、T7为吉氏库特菌。通过生长曲线可以看出，7株菌分别在24~36 h达到最快生长期。M7和K7对酸有较强的耐受性，而S7、C2和F7对酸性较为敏感，C2对碱的耐受性最强，而T7对胆盐的耐受性最强，S7对胆盐最不耐受。【结论】 本研究从瘤胃中分离得到的7个菌株对酸碱和胆盐具有不同程度的耐受性，以及最适生长周期。     

猪源芽孢杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

从自然生长的健康猪肠道中分离到13株芽孢杆菌,通过生理生化试验初步鉴定其中9株为枯草芽孢杆菌,2株为巨大芽孢杆菌,1株为地衣芽孢杆菌,1株为凝结芽孢杆菌;对这13株芽孢杆菌分别进行了耐酸性试验、耐胆盐试验、体外抑菌试验和动物安全性试验。结果表明,其中1株地衣芽孢杆菌B7株和1株枯草芽孢杆菌B9株均有较强的耐酸、耐胆盐能力,对致病性大肠杆菌具有较好的体外抑制能力,且均安全无毒,可作为动物用益生菌制剂的候选菌种。     

猪源枯草芽孢杆菌的分离鉴定及其生物特性研究

为研究和开发动物新型微生态制剂,改变抗生素滥用、药物残留等现状。通过热处理从健康猪肠道内容物、粪便、土壤中分离芽孢杆菌,结合形态特征、生理生化特性及16S rRNA序列分析进行鉴定;对菌株耐胆盐性、酸性耐受性及产酶情况等特性进行研究。结果表明,分离到11株芽孢杆菌,经细菌形态学、生理生化特征和16S rRNA序列分析的结果显示,3株为枯草芽孢杆菌;特性研究结果证实菌株SR-096具有较好的耐胆盐性、酸性耐受性和产脂肪酶、淀粉酶、蛋白酶和纤维素酶的能力。说明枯草芽孢杆菌SR-096具有较强的抗逆性和潜在的益生性能,为研制微生态制剂提供了优良的菌种参考。     

几种商用益生芽孢杆菌特性的比较研究

为比较几种商用益生芽孢的菌株特性,为芽孢杆菌的选育提供理论基础,本试验收集整理了15种药用(Y1~Y6)和饲用益生芽孢杆菌(S7~S15)产品,对其芽孢杆菌进行分离鉴定,分别从产淀粉酶、纤维素酶和蛋白酶等酶活特性,抗菌活性,耐酸和耐0.3%胆盐稳定性,抗生素敏感性,耗氧及生长速率测试等方面对芽孢杆菌特性进行了比较研究。结果显示,分离的15株芽孢杆菌均能产蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶,但不同菌株产酶能力差异较大,S9菌株表现出较高的产蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶活力;所有分离的芽孢杆菌均能对金黄色葡萄球菌及藤黄微球菌产生显著抑制活性,但只有7株芽孢杆菌(Y2、Y6、S7、S9、S10、S11、S12)可对大肠杆菌产生抑制作用,尤其是S9菌株综合抗菌能力最强。S9、Y2和S8的营养体细胞具有较高的耐酸能力,S9、Y2菌株在0.3%胆盐环境中存活率超过90%。15株芽孢杆菌中有3株饲用来源菌株(S10、S12、S13)表现出对红霉素的耐受,S10菌株对四环素耐受。此外,S9菌株具有较快的耗氧速率和生长速率。上述结果表明,S9菌株(解淀粉芽孢杆菌)的益生特性更为优良,本试验结果可为芽孢杆菌益生菌的选育及活性评价提供参考依据。     

几种商用益生芽孢杆菌特性的比较研究

为比较几种商用益生芽孢的菌株特性，为芽孢杆菌的选育提供理论基础，本试验收集整理了15种药用（Y1~Y6）和饲用益生芽孢杆菌（S7~S15）产品，对其芽孢杆菌进行分离鉴定，分别从产淀粉酶、纤维素酶和蛋白酶等酶活特性，抗菌活性，耐酸和耐0.3%胆盐稳定性，抗生素敏感性，耗氧及生长速率测试等方面对芽孢杆菌特性进行了比较研究。结果显示，分离的15株芽孢杆菌均能产蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶，但不同菌株产酶能力差异较大，S9菌株表现出较高的产蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶活力；所有分离的芽孢杆菌均能对金黄色葡萄球菌及藤黄微球菌产生显著抑制活性，但只有7株芽孢杆菌（Y2、Y6、S7、S9、S10、S11、S12）可对大肠杆菌产生抑制作用，尤其是S9菌株综合抗菌能力最强。S9、Y2和S8的营养体细胞具有较高的耐酸能力，S9、Y2菌株在0.3%胆盐环境中存活率超过90%。15株芽孢杆菌中有3株饲用来源菌株（S10、S12、S13）表现出对红霉素的耐受，S10菌株对四环素耐受。此外，S9菌株具有较快的耗氧速率和生长速率。上述结果表明，S9菌株（解淀粉芽孢杆菌）的益生特性更为优良，本试验结果可为芽孢杆菌益生菌的选育及活性评价提供参考依据。     

猪源嗜酸乳杆菌的分离鉴定及益生特性研究

为丰富猪源益生菌资源,研制品质更好及效果更强的猪用微生态制剂,研究从健康仔猪粪便中分离获得9个菌株,通过对菌株形态及生理生化特征得到2株疑似嗜酸乳杆菌菌株,分别命名为L102和L106,通过16S rDNA分析表明,菌株L102和L106均为嗜酸乳杆菌;并对2株菌的益生特性进行研究,结果表明,2株菌均有较强的抑菌能力,菌株L102对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门菌的抑菌圈直径均超过22 mm,菌株L106的抑菌圈直径则超过15 mm。但2株菌对酸及胆盐的耐受性一般,用p H 3.0液体培养基处理2 h,菌株L102存活率为77.40%,菌株L106存活率为59.20%;胆盐质量分数为0.30%时,菌株L102存活率为28.20%,菌株L106存活率为18.70%。     

奶牛阴道分泌物中枯草芽孢杆菌的分离鉴定及抑菌效果分析

从奶牛阴道分泌物中分离出一株细菌,经过菌落形态特征、生理生化鉴定初步判定为芽孢杆菌属;根据16S rRNA基因序列及其同源性分析结果,证实分离得到的Y4菌株是枯草芽孢杆菌,与GenBank上的枯草芽孢杆菌16S rRNA基因序列同源性为99.6%。对此菌株进行抑菌试验,发现该菌株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和链球菌有较好的抑菌效果。该研究为将来研制益生菌制剂防治奶牛生殖道疾病提供了物质基础。     

牦牛源枯草芽孢杆菌分离培养与鉴定

为得到稳定性高、抗逆性强的枯草芽孢杆菌，试验从健康牦牛的新鲜粪便中分离、纯化枯草芽孢杆菌，分离出4株枯草芽孢杆菌。之后进行形态学鉴定、多项生化鉴定、琼脂糖凝胶电泳试验。结果表明，革兰氏染色为蓝色棒状或杆状菌，生化鉴定符合枯草芽孢杆菌生化反应，确定为枯草芽孢杆菌，编号为BS-1,BS-2,BS-3,BS-4。通过耐胆盐、耐高温等耐受性试验，结果显示，BS-3整体耐受特性最好，在4株菌株中稳定性最高、抗逆性最强。结合试验目的，推断BS-3作为枯草芽孢杆菌益生菌制剂潜力较高。     

双峰驼源乳酸菌的分离鉴定与生物学特性分析

为筛选具有优良生物学特性的双峰驼源乳酸菌株,对阿拉善双峰驼十二指肠黏液定殖菌通过MRS培养基的选择性培养、形态特征观察、生化及16S rRNA基因测序等方法进行鉴定,并对对其生长曲线、产酸、耐胆盐、耐药性等生物学特性进行分析。结果表明,成功分离的4株乳酸菌B1、B2、B3及C1分别为唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)、卷曲乳杆菌(lactobacillus crispatus)、约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)和戊糖片球菌(Pediococcus pentosans)。其中,4株菌对胃酸pH 3.0的耐受结果为B1、B2和C1高于B3;最佳培养时间均为12 h～16 h之间,而C1在24 h内的累计产酸量最高,对胆盐的耐受性也最高;4株菌最为敏感的抗生素分别为B1和C1为氯霉素、B2为青霉素、B3为红霉素。从双峰驼十二指肠分离到4株乳酸菌,对进一步研究其对肠道黏膜免疫的调节奠定了基础。     

四株猪源乳杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

本试验旨在筛选优质猪源乳杆菌,为养猪生产过程中微生态制剂的开发奠定基础。通过16S r RNA分析鉴定,本试验从健康成年猪粪中成功分离出四株猪源乳杆菌,并对这四株菌的生长性能、生理生化特性、耐酸、耐高温、耐胆盐和耐药性进行了综合测试。结果表明：ZLgz1227具有最优的综合性能,其耐胆盐性能最强,过胃存活率分别高于其他三种菌株110.56%、44.3%、4.98%。研究表明这四株菌都有制成益生菌制剂的潜能,为实际生产提供一些后备益生菌菌株参考。     

猪源性芽孢杆菌的筛选与鉴定

为从滇南小耳猪的粪便中分离筛选到有良好益生特性的芽孢杆菌,笔者首先从猪粪样中高温初筛芽孢杆菌,分离纯化后再进行耐酸、耐胆盐、耐高盐、抑制致病菌等实验,利用生理生化特征和16S rDNA的序列分析技术对菌株进行菌种鉴定。从滇南小耳猪粪便中所分离到的1、6、7号菌株为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌,具有耐酸、耐胆盐、耐高盐、抑制有害菌生长等特性,对当地埃希氏大肠杆菌有一定抑制作用。本实验所筛选到的3种芽孢杆菌具有进一步开发为益生菌的可能性,为进一步研究该类细菌的生物学特性等奠定了基础。     

牛源抗氧化芽孢杆菌的分离鉴定及生物特性研究

【目的】从奶牛瘤胃中分离具有抗氧化能力且耐受性好的芽孢杆菌,为牛源益生菌作为抗氧化添加剂使用提供理论依据及参考。【方法】采集3头成年荷斯坦奶牛瘤胃内容物,通过细菌分离纯化、形态观察、生化检测及16S rDNA分子检测进行鉴定,同时检测筛选菌株的超氧自由基和羟自由基清除率、耐酸、耐胆盐能力及对抗生素的耐药性。【结果】从奶牛瘤胃液中共获得了12株菌,通过特异性培养基与革兰氏染色共筛选出5株芽孢杆菌(X-1～X-5)。对5株芽孢杆菌进行分子鉴定,确定X-1为热噬淀粉芽孢杆菌,X-2为短小芽孢杆菌,X-3为解蛋白芽孢杆菌,X-4为枯草芽孢杆菌,X-5为沙福芽孢杆菌。抗氧化能力检测结果显示,5株菌均具有一定的抗氧化能力,X-5菌株抗氧化能力最高,超氧自由基和羟自由基清除率分别达到73.81%和73.54%。当pH为2.5时,5株芽孢杆菌存活率均在25%以上;胆盐浓度为0.6%时,5株芽孢杆菌存活率均在60%以上,说明菌株具有良好的耐受性。药敏试验结果显示,试验分离出来的大多数菌株对氧氟沙星、呋喃妥因、红霉素等高度敏感;对头孢呋辛、头孢噻肟、链霉素等耐受;对卡那霉素、环丙沙星、氨苄西林等中度敏感。...     

驴源枯草芽孢杆菌分离鉴定及生物学特性

为分离驴源具有抑菌活性的优良芽孢杆菌,本试验通过分离培养和形态观察,从健康驴新鲜粪便样品中分离芽孢杆菌,采用牛津杯法初步筛选具抑菌活性目标菌株,并进行生理生化和分子鉴定,研究其产酶活性、抑菌活性、耐酸性和耐胆盐性能、药物敏感性。结果显示：筛选到两株对金黄色葡萄球菌有强抑制作用的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）,编号分别为LV1和LV2。两菌株具有很强的耐酸、耐胆盐特性,能产淀粉酶、纤维素酶和蛋白酶,并对检测用9种抗生素都敏感。结果表明,两株驴源枯草芽孢杆菌LV1和LV2具备良好的抑制金黄色葡萄球菌、产酶和耐酸、耐胆盐等益生活性,可作为研发驴用微生态制剂的潜在益生菌菌株。 [关键词] 驴|枯草芽孢杆菌|金黄色葡萄球菌|微生态制剂     

猪肠源型枯草芽孢杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

为了筛选具有优良生物活性的猪肠源型枯草芽孢杆菌，差异化开发出功能性微生态制剂，试验以高温孵育的健康猪肠道内容物为分离基质，金黄色葡萄球菌为指示菌，通过胆盐耐受性分离、指示菌的对峙培养和产酶试验进行菌株筛选，并综合菌株形态特征及16S rDNA基因序列进行鉴定。另外，采用琼脂扩散法对菌株发酵上清液进行抑菌谱及温度、胆盐、pH值、人工胃液和肠液的耐受性及溶血性的考察。结果表明：肠道内容物中有多株可以抑制指示菌和产酶的细菌，其中有2株不仅具有较好的抑菌性能，而且同时具有蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶和木聚糖酶的活性，其中N65菌株的抑菌性能和产酶活性最好。N65菌株与枯草芽孢杆菌的亲缘关系最近，综合其形态特征鉴定为枯草芽孢杆菌。N65菌株发酵上清液对金黄色葡萄球菌、产气荚膜梭菌、无乳链球菌、大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌均有较好的抑制效果，抑菌谱广，而且具有良好的温度、胆盐、pH值及人工胃液和肠液的耐受性，并且溶血率低，无溶血风险。说明猪肠源型枯草芽孢杆菌N65具有较好的抗逆、抑菌、产酶等益生特性，具有开发为饲用抗生素替代类功能性微生态制剂的潜力。     

西藏牦牛源枯草芽孢杆菌的分离培养及鉴定

从西藏健康牦牛的新鲜粪便中分离、纯化枯草芽孢杆菌,并筛选出耐受性最好的菌株,并进行形态学观察、生化试验、PCR扩增、电泳检测、16s rRNA序列测定、构建进化树并进行同源性分析,对通过鉴定的枯草芽孢杆菌进行耐肠液、耐胆盐、耐高温等耐受性试验。结果显示:分离出疑似枯草芽孢杆菌4株,革兰氏染色为阳性;芽孢染色液染色菌体为蓝色,芽孢不着色。菌体呈椭圆到柱状,芽孢位于菌体中央或次极端。16s rRNA测序有4株枯草芽孢杆菌,与标准株序列同源性高达99.6%,分别命名为Yak-KC1,Yak-KC5,Yak-KC6,Yak-KC7,该4株菌对肠液、胆盐、高温均具有一定的耐受性,Yak-KC7的耐受性最佳,具有进一步开发为益生菌的潜能。     

四种牛源益生菌的分离鉴定

为了确定牛奶中的益生菌种类,给奶牛微生态制剂益生菌菌种的选择提供参考,试验选取体况良好、无乳房炎、产奶性能优良的荷斯坦奶牛和新生犊牛,采集其新鲜奶样和粪样,应用MRS溴甲酚紫选择性培养基和革兰氏染色对分离株进行初步鉴定,提取菌株DNA检测16S rRNA基因并测序,对分离株进行分子生物学鉴定。结果表明:所得菌株中有球菌和杆菌,革兰氏染色呈阳性,得到的12株菌株分别为约氏乳杆菌2株、布氏乳杆菌4株、粪肠球菌5株和屎肠球菌1株。这些牛源益生菌可用于研制益生菌微生态制剂。     

鸡源产谷氨酸芽孢杆菌耐受稳定性研究

试验利用已有具有产谷氨酸的5株芽孢杆菌为试验菌株,研究其耐受稳定性,以利于该芽孢杆菌在动物饲料中添加应用。通过测定该5株芽孢杆菌第1代、第20代在不同p H值的酸和不同浓度胆盐的培养液中的生长情况,对试验芽孢杆菌进行耐受稳定性进行研究。结果显示,5株后备芽孢杆菌经过20代培养,表现出不同的耐受性。其中,第1代芽孢杆菌中J2、I3、C34在p H=1.5时的存活率为23.92%~46.43%;第20代芽孢杆菌中J2、I3、C34在p H=1.5时的存活率为16.41%~54.73%。在0.3%浓度的胆盐中,第1代芽孢杆菌中J2、I3、C34的存活率为54.07%~91.51%;在0.3%浓度的胆盐下,第20代芽孢杆菌中,J2、I3、C34的存活率为10.53%~92.25%。通过以上结果指出芽孢杆菌J2在不同p H值和胆盐浓度下稳定性最高,并具有传代稳定耐受性,可以作为微生态制剂后备菌深入研究。