鸡新城疫琼脂扩散试验方法的研究

用新城疫病毒(NDV)La Sota株接种的鸡胚含毒尿囊液,经灭活、透析和浓缩后,研制出琼脂扩散(AGP)抗原。应用AGP和HI试验同步检测不同免疫状态的鸡血清样品977份。试验表明,HI抗体效价≥16的被检血清,AGP阳性率为98.5％(268/272);HI抗体效价=8的,AGP阳性率为79.3％(142/179);HI抗体效价≤4的526份血清,AGP试验均为阴性。抗原经2次冻融,或在4℃和-3℃保存10个月以上,其效价未见降低。AGP抗原可用于ND的免疫监测和流行病学调查。     

鸡抗REV血清的制备与检定

用网状内皮组织增生症病毒（REV）HA9901株免疫SPF鸡,无菌采血制备鸡抗REV血清。通过ELISA、IFA、AGP、HI等方法对制备的血清进行检测,未检出禽类常见的其他17种（或亚型）病毒的抗体,该血清具有良好的特异性。通过测定,该血清用于间接免疫荧光试验（IFA）的效价为1：2000,用于IFA检测REV的染色效果与REV单抗（11818和11854的混合物）相当。试验结果表明,该批血清1000倍稀释可作为一抗,用于REV的间接免疫荧光检测。     

应用HI和AGP试验同步检测新城疫抗体的比较

鸡新城疫(ND)血凝抑制(HI)试验是监测鸡群免疫状态的常规血清学方法,主要用于检测鸡血清中的HI抗体。为避免捉鸡采血对产蛋鸡群的不良影响,一些研究者用卵黄代替血清来检测HT抗体。近年来,报道了ND琼扩(AGP)试验方法,並应用AGP试验检测ND沉淀抗体。从1987年以     

外源病毒检验用抗鸡传染性支气管炎病毒特异性血清的制备与检定

为制备外源病毒检验用抗鸡传染性支气管炎病毒(IBV)特异性血清,对300只3~4周龄的SPF鸡进行基础免疫和加强免疫;最后一次免疫21 d后,采血并分离血清;对血清经混合、分装、冷冻、真空干燥后,进行无菌检验、外源病毒检验、剩余水分测定、中和效价测定和特异性检验。结果表明:本研究制备的抗IBV特异性血清的无菌检验、外源病毒检验和剩余水分测定结果均符合现行《中华人民共和国兽药典》规定;血清中和效价为1:800,与IBV H120种毒株的中和指数为106.3,与鸡传染性法氏囊病毒B87株、鸡新城疫病毒La Sota株、鸡传染性喉气管炎病毒、鸡痘病毒、禽呼肠孤病毒S1133株的中和指数均不大于10;通过AGP、ELISA、HI等试验,确定该血清中不含其他禽源外源病毒抗体。本研究为鸡传染性支气管炎活疫苗或毒种的外源病毒检验提供了具有良好特异性和高效价的中和用血清。     

马动脉炎病毒血凝抑制试验研究及其应用

用马动脉炎病毒（EAV）免疫SPF豚鼠，4周后采血做血凝抑制试验（HI），其抗血清可以抑制血凝抗原对小鼠红细胞的凝集反应，抗原和抗血清在4℃感作24h后可以检测到最高的HI抗体效价，同时结果显示HI抗体与中和抗体产物呈正相关。对561份来自新西兰、吉尔吉斯、沙特阿拉伯及内蒙古、新疆的马血清用HI试验和微量血清中和试验（NT）进行EAV抗体检测，HI和NT阳性符合率为94．7％，血凝抑制抗体与中和抗体效价呈显著的正相关。     

间接血凝抑制试验检测血清和卵黄中鸡毒支原体抗体的研究

将13只正处于产蛋期的试验鸡在接种疫苗前后分别采血、分离血清；收集鸡蛋，分离蛋黄，并分别用16％NaCl、8％柠檬酸纳和氯仿处理后，检测鸡毒支原体(MG)间接血凝抑制(HI)抗体。结果表明：接种疫苗前的血清和16％NaCl、8％柠檬酸钠和氯仿处理卵黄抗体平均效价分别为4.7，4．4，4．1和4.2 log2；第一次接种疫苗后的血清和16％NaCl、8％柠檬酸纳和氯仿处理卵黄抗体平均效价分别为7．4、6．7、7．1、6．9log2；第二次接种疫苗后第1次采集的血清和16％NaCl、8％柠檬酸钠、氯仿处理卵黄抗体平均效价分别为10．4、9．6、10．1、9．710g2，第2次采集的血清和16％NaCl、8％柠檬酸钠、氯仿处理卵黄抗体平均效价分别为7．9、7.1、7．6和7．4log2。8％柠檬酸钠处理后的卵黄抗体效价最高，与血清抗体效价最接近。血清HI抗体效价与卵黄HI抗体效价具有良好的一致性和相关性，用卵黄可以代替血清进行HI试验。     

猪乙型脑炎间接ELISA与血凝抑制试验方法的比较

用血凝抑制试验和间接ELISA两种方法检测乙脑阳性血清均呈阳性反应,检测乙脑阴性血清均呈阴性反应。用间接ELISA对来自9个猪场74份送检血清进行了猪乙脑病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）抗体检测,并与血凝抑制试验（HI）进行对比,两种方法检测总符合率为85.1%(63/74),经统计分析,检测结果差异不显著(P＞0.05)。对来自无猪乙脑病猪场24头健康猪的血清进行检测,两种方法结果均为阴性,符合率为100%。对10份阳性血清进行检测,ELISA检测效价较HI效价高,表明ELISA比HI敏感。结果表明,ELISA与HI检测结果相符,前者更适用于猪血清中乙脑IgG抗体的大规模检测。     

琼脂扩散试验检测鸡新城疫抗体的研究

本文报告了用NDV—Lasota株经鸡胚增殖病毒,收集含毒的鸡胚尿囊液,用乙醚脱脂、透析浓缩制成琼扩(AGP)抗原,应用本抗原和HI试验同步检测435份待检血清,结果AGP与HI试验的阳性符合率为91.6％(241/202),阴性复合率为100％(114/114),     

抗鸡新城疫病毒特异性血清的制备与鉴定

为制备外源病毒检验用抗鸡新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的特异性血清,对300只3~4周龄的SPF鸡进行了基础免疫和加强免疫。最后一次免疫后21 d采血并分离血清,血清经混合、分装、冷冻真空干燥后,对其进行无菌检验、外源病毒检验、剩余水分测定、中和效价测定和特异性检验。结果表明,制备的抗NDV特异性血清无菌检验、外源病毒检验和剩余水分测定均符合现行《中华人民共和国兽药典》规定;血清中和效价为1∶2 089,与NDVLa Sota株毒种中和指数为108.2,与其它禽类病毒的中和指数均不大于10,通过AGP、ELISA、HI等试验确定血清中不含其他禽源外源病毒抗体。该研究为鸡新城疫活疫苗或毒种的外源病毒检验提供了具有良好特异性和高效价的中和用血清。     

外源病毒检验用抗鸡传染性法氏囊病病毒特异性血清的制备与检定

为制备外源病毒检验用抗鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV)的特异性血清,对300只3~4周龄的SPF鸡进行了基础免疫和加强免疫。最后一次免疫后21d采血并分离血清,血清经混合、分装、冷冻真空干燥后,对其进行了无菌检验、外源病毒检验、剩余水分测定、中和效价测定和特异性检验。结果表明,本研究制备的抗IBDV特异性血清无菌检验、外源病毒检验和剩余水分测定均符合《中华人民共和国兽药典》三部(二〇一〇年版)规定;血清中和效价为1:5747,与IBDV B87株毒种中和指数为104.3,与鸡新城疫病毒La Sota株、鸡传染性支气管炎病毒H120株、鸡传染性支气管炎病毒H52株、鸡传染性喉气管炎病毒、鸡痘病毒、禽呼肠孤病毒S1133株的中和指数均不大于10,通过AGP、ELISA、HI等试验确定血清中不含其他禽源外源病毒抗体。本研究为鸡传染性法氏囊病活疫苗或毒种的外源病毒检验提供了具有良好特异性和高效价的中和用血清。     

AE灭活疫苗ELISA抗体与攻毒保护效果试验

用禽脑脊髓炎灭活疫苗免疫28日龄SPF鸡10只,5只对照不免疫,免疫后21d采血分离血清,ELISA抗体效价检测,采血后马上进行攻毒,攻毒后观察统计发病情况,在试验鸡出现典型症状及攻毒后21d试验结束日,存活鸡全部采血测抗体,对比抗体与攻毒保护效果之间的关系。结果表明:攻毒前免疫鸡ELISA抗体阳性率为80%,攻毒保护效果80%,对ELISA抗体阳性鸡攻毒均有保护。     

三黄鸡禽流感免疫抗体消长变化规律的研究

对禽流感免疫抗体的消长变化进行了初步研究。将150只三黄鸡随机分为5组,用禽流感灭活油乳剂疫苗和禽流感灭活疫苗免疫试验组三黄鸡;14日龄时,对试验一、二、三、四组鸡进行首免,剂量为0.3mL/只;在35日龄时,对试验二、四组鸡进行二免,剂量为0.2mL/只;在21、28、35、42、49、56、63、70、77日龄采血,用血凝抑制(HI)试验测定各组三黄鸡血清中HI抗体效价。结果表明,禽流感灭活疫苗一次免疫即可使三黄鸡产生高效价的HI抗体,且持续时间较长;禽流感灭活油乳剂疫苗需要二次免疫才能使三黄鸡产生较高效价的HI抗体。     

一例鸡新城疫病毒和大肠杆菌混合感染的诊断

解剖5只送检的临床发病鸡及病死鸡,发现4只剖检鸡均有腺胃乳头出血、直肠和泄殖腔出血,喉头有大量粘液等病变,2只鸡的气囊出现混浊.采集病料,处理后接种10日龄SPF鸡胚,发现鸡胚在48h左右死亡,收集死亡鸡胚的尿囊液,用1%的鸡红细胞进行血凝试验(HA),结果HA效价为27左右,进一步用新城疫阳性标准血清进行血凝抑制试验(HI),实验表明HI为阳性;对肝脏病料中进行细菌分离培养,结果 18h后麦康凯琼脂平板上,长出红色的菌落群,经生化鉴定为埃希氏大肠杆菌.由此可断定,该鸡群混合感染了新城疫病毒和大肠杆菌.     

悬浮培养和鸡胚尿囊液抗原制备的H9亚型禽流感疫苗免疫效力比较试验

为了探讨悬浮培养和鸡胚尿囊液培养得到的H9亚型禽流感病毒(AIV)抗原制备的疫苗的免疫效力,试验用3株H9亚型AIV株分别接种微载体悬浮培养的MDCK细胞制备3种悬浮培养的细胞疫苗抗原,以3株H9亚型AIV株接种10日龄SPF鸡胚制备3种鸡胚尿囊液抗原,测定6种抗原液HA效价和鸡胚半数感染量(EID50);分别使用6种抗原液制备灭活疫苗,免疫21日龄SPF鸡,并在免疫后第21天采血测定HI抗体水平,采血后进行攻毒并在攻毒后第5天进行病毒分离试验。结果表明:两种方式制备的AIV抗原HA效价为7~9 lb,鸡胚半数感染量为1×106.9~7.9EID50,疫苗免疫后第21天用同源毒株作为工作抗原测定的免疫鸡HI效价差异不大,用异源毒株测定时有一定差异;两种方法得到的抗原制备的疫苗均能获得很好攻毒保护。     

金钱豹猫瘟热疫苗免疫后血清抗体水平的检测

金钱豹经2种猫瘟热灭活疫苗和1种弱毒疫苗免疫接种后,间隔不同的时间采血分离血清,用SPA-ELISA和HI两种方法测定猫瘟热血清抗体效价。结果猫瘟热灭活疫苗和弱毒疫苗均能有效诱导金钱豹产生较高效价的抗体,抗体持续时间相对较长。3种疫苗免疫效果比较显示,美国Fort Dodge猫三联灭活疫苗免疫效果最好。在猫瘟热血清抗体检测中,SPA-ELISA和HI的吻合率达到93%以上。     

三种检测禽流感抗体方法的比较

应用胶体金免疫层析法(GICA)、血凝抑制试验(HI)和琼脂扩散试验(AGID)三种方法同时检测所采集的342份鸡血清样品,并对三者的检测结果进行比较。结果发现,HI试验的阳性检出率最高(78.65%),其次为GICA(69.88%)和AGID试验(59.36%);GICA与HI的符合率为89.47%,与AGID的符合率为84.21%,HI与AGID的符合率为80.70%。结果表明,GICA比AGID试验更为敏感,且与HI试验有较好的符合率,可用于禽流感的血清学监测。     

兔病毒性出血症灭活疫苗效力检验替代方法研究

为了采用血凝抑制(HI)试验方法替代兔病毒性出血症灭活疫苗效力检验的免疫攻毒方法,试验在制备了HI试验用兔出血症病毒血凝(HA)抗原、阳性血清、阴性血清的基础上,研究了免疫攻毒保护与免疫血清HI效价之间的平行关系,并进行了替代方法的应用。结果表明,当免疫血清HI效价不低于1∶32时,两种方法的检验结果符合率为100%,证明了该替代方法的可行性,也为下一步修订兔病毒性出血症灭活疫苗效力检验方法提供了数据支持。     

传染性支气管炎病毒(M41株)HI试验抗原的特异性和敏感性试验

采用本研究室制备的3批传染性支气管炎病毒(IBV,M41株)HI试验抗原,分别对100份和80份不同鸡血清进行IBV HI抗体检测,同时用IBV ELISA抗体检测试剂盒进行检测,比较两种不同方法检测的特异性和敏感性。结果显示,特异性试验中80份SPF鸡血清,自制抗原检测均为阴性,IBV ELISA检测79份为阴性,10份其他鸡病血清,两种方法检测9份均为阴性,10份IBV阳性血清两种方法检测均为阳性;敏感性试验中,74份已知IB疫苗免疫或IBV M41株感染鸡血清IBV HI检测72份为阳性,阳性检出率为97.3%(72/74),IBV ELISA检测74份均为阳性,阳性检出率为100%(74/74),SPF鸡血清及其他鸡病血清,两种方法检测均为阴性,两种检测方法总符合率为97.5%,差异不显著(P0.05)。试验结果证明,本研究室自制抗原具有良好的特异性,特异性为100%,抗原同时具有良好的敏感性,但IBV ELISA方法的敏感性要高于IBV HI方法。     

抗独特型抗体检测H9亚型禽流感血清抗体

为了探讨用抗独特型抗体替代病毒或病毒亚单位检测H9亚型禽流感血清抗体的可行性,本试验分别用全病毒抗原和抗独特型抗体(Ab2)作检测原,通过琼脂免疫扩散试验(AGP)和间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测了鸡的血清样品。在AGP试验中,分别用Ab2和禽流感病毒(AIV)对10份血清样品检测的符合率为70%。在间接ELISA试验中,Ab2和AIV抗原对10份血清样品检测的符合率为90%。用Ab2间接ELISA试验检测出的血清阳性率(8/10)高于血凝抑制试验(6/10)和AGP试验(5/10)。结果表明,在一定的情况下Ab2可以用来代替具有污染环境风险的病毒抗原来检测抗病毒抗体。     

不同免疫途径对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响

为探讨不同免疫接种途径对鸡新城疫(ND)弱毒疫苗免疫效果的影响,我们将健康1日龄海兰蛋公鸡雏鸡(48只)随机分为滴鼻免疫组、肌肉注射免疫组、后海穴常规剂量免疫组和后海穴半剂量免疫组,每组12只.分别于第14日龄和28日龄接种新城疫IV系弱毒苗(LaSota株)1羽份/只,后海穴半剂量免疫组接种0.5羽份/只.分别于免疫前和免疫后7、14、21d和28d称重,无菌操作采血,分离血清,检测血清中的血凝抑制效价(HI).结果显示:与常规途径免疫组相比,后海穴常规剂量免疫组和后海穴半剂量免疫组可显著增强鸡血清NDV特异性HI效价(P＜0.05),且显著提高试验鸡只的日增重(P＜0.05);滴鼻免疫组与肌肉注射免疫组相比,虽然增加了HI效价,但统计学比较差异不显著(P＞0.05).试验结果说明后海穴接种鸡新城疫疫苗可显著提高鸡血清NDV的HI效价,提高鸡生产性能,同时节约疫苗用量.