屠宰生猪体内猪链球菌2型带菌情况调查

应用猪链球菌2型定型PCR方法,对从福建省3个屠宰场采集的临床健康的生猪鼻咽拭子样本共121份进行了检测,同时对阳性样本进行了细菌分离鉴定及毒力基因检测。结果显示：121份样本中有17份为阳性,检出率为14．0％（17／121）,其中福州地区检出率为10．9％（7／64）,宁德地区检出率为11．8％（4／34）,莆田地区检出率为26．1％（6／23）。3株分离菌cps2J基因PCR特异性扩增产物大小均为675bp,其核苷酸序列与Genebank中猪链球菌2型参考菌株的同源性高达98％～100％,毒力基因型为gdh^＋／cps2J^＋／mrp^＋／ef^-／sly^-／fbps^＋／orf2^＋。调查结果表明,福建省福州、宁德、莆田等地区生猪群中均存在猪链球菌2型携带者,所分离到的3个猪链球菌2型菌株其毒力基因型为新的基因型。     

东莞某屠宰场猪链球菌检测及分离鉴定

【目的】猪链球菌（Streptococcus suis,SS）是一种重要的猪病原菌,也是一种人兽共患病病 原体。其中猪链球菌 2 型（SS2）致病力最强,不但引起猪的急性败血症、脑膜炎、关节炎甚至死亡,也可 导致人的感染和死亡。为评估屠宰场猪链球菌的传播风险,对东莞某屠宰场进行猪链球菌的采样检测和分离 鉴定。【方法】采集 40 头猪的关节液和扁桃体进行 PCR 检测和猪链球菌分离,分离菌分别进行形态学和生 理生化鉴定、16S rDNA PCR 扩增、分型 PCR 检测和抗生素敏感性试验。【结果】 对 40 头猪的关节液和扁桃 体提取 DNA 进行 PCR 检测,在 40 份关节液中,猪链球菌阳性率为 22.5%,但未检出猪链球菌 2 型阳性;在 40 份扁桃体样品中,猪链球菌阳性率为 32.5%,其中猪链球菌 2 型阳性率为 7.5%。从 40 头猪的扁桃体和关 节液共 80 份样品中分离出 3 株猪链球菌, PCR 结果表明,3 株分离菌中 1 株为猪链球菌 4 型,基因型为 epfmrp+gdh+gapdh+fbps-orf2+sly-;其他 2 株为猪链球菌 9 型,基因型分别为 epf-mrp+gdh+gapdh+fbps-orf2+sly- 和 epf-mrp-gdh+gapdh+fbps-orf2+sly+。药敏试验表明,3 株猪链球菌菌株对青霉素 G、林可霉素、多粘菌素 B 和磺胺异恶唑耐药,对恩诺沙星、环丙沙星、大观霉素和阿莫西林敏感。【结论】该屠宰场猪群中存在猪链球 菌的隐性感染,提示存在猪链球菌 2 型感染人的风险。     

猪胸膜肺炎放线杆菌山东分离株的血清型与Apx毒素型研究

 从山东省不同地区采集的85份具有严重呼吸道症状病死猪的肺脏、气管和扁桃体进行胸膜肺炎放线杆菌（APP）的分离鉴定，采用凝集试验和PCR方法对分离菌株进行血清型和APX毒素型的检测。结果从山东省不同地区分离到20株分属5个血清型的APP，其中，血清7型6株、血清5型5株、血清3型4株、血清4型3株、血清8型2株，血清7型、5型为优势血清型。不同地区分离的APP血清型不同，同一地区也存在不同的血清型。PCR检测结果表明，不同血清型的 APP共含有4种溶血毒素(Apx)，其中，血清3、4、8型APP含ApxⅡ、ApxⅢ和ApxⅣ，血清5型含ApxⅠ、ApxⅡ和ApxⅣ，血清7型含ApxⅡ和ApxⅣ，20株APP分离株均含有ApxⅡ和ApxⅣ两种毒素，表明野毒株的血清型与毒素基因的种类有一定的相关性。毒素序列分析结果表明，相同毒素型APP，其毒素基因序列的同源性在99.5％~100％之间，与血清型无关。致病性试验结果表明，所含毒素类型不同的APP对小白鼠的致病性不同，其中含ApxⅠ和ApxⅡ的血清5型APP毒力最强。该研究为猪传染性胸膜肺炎的免疫预防、亚单位疫苗的研制及基于ApxⅣ的PCR检测奠定了基础。     

鲁西地区猪胸膜肺炎放线杆菌流行病学调查

[目的]为调查鲁西地区猪传染性胸膜肺炎病的流行状况,建立了检测胸膜肺炎线杆菌（Aetinobacillus pleuropnemunoniae,APP）的PCR方法。[方法]利用PCR方法对186头病死猪的病变组织及545头无临床症状健康猪群进行了APP的流行病学研究。[结果]186份病料中APP阳性率占43．0％（80／186）,545份猪血清APP阳性占7．9％（43／545）。[结论]该PCR方法可作为APP临床诊断的重要手段之一。     

次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)基因在猪链球菌不同血清型中的分布

参照GenBank上已发表的次黄嘌呤核甘酸脱氢酶（IMPDH）基因序列,设计引物,对34个猪链球菌不同血清型（缺12型）国际标准株进行了IMPDH基因的PCR检测及序列分析。结果表明：除17型、24型、32型、33型和34型外,其他29个血清型都为阳性,其核苷酸序列的同源性为88．3％～100．0％,所推导的蛋白质序列的同源性为94．7％～100．0％。为进一步研究IMPDH的生物学特性和功能奠定了基础。     

银川市市售食品中单增李斯特菌污染状况分析研究

[目的]了解银川市市售食品中单增李斯特菌的污染状况及其血清型和耐药性特点。[方法]以宁夏银川市售各类生鲜食品为原料,菌株的分离鉴定按照GB4789．30—2010《单核细胞增生李斯特氏菌检验》和国家食源性疾病监测网监测方案进行;血清型检验按照血清凝集试验进行;药物敏感性试验按照K—B纸片扩散法进行。[结果]720份食品中检出单增李斯特菌45株,总检出率为6．25％,分属5个血清型,主要为1／2a型。污染率最高的是生鸡肉（8．33％）。耐药性研究表明单增李斯特菌对多粘菌素的耐受最严重,耐药率为77．78％,此外还耐受头孢噻肟、四环素、呋喃妥因、青霉素、红霉素和头孢噻吩,且出现多重耐药。[结论]银川市食品中存在不同程度的单增李斯特菌污染,生肉中单增李斯特菌检出率较高,应加强监测工作。同时存在致病性较强的血清型,呈多重耐药性趋势。     

副猪嗜血杆菌河南流行株的分离鉴定及分型

为了解河南省副猪嗜血杆菌病的流行情况,对2017—2018年采自河南省不同地区的45份疑似病料,进行细菌分离及形态学观察、培养特征鉴定、PCR鉴定及分型。结果显示,共分离鉴定出12株副猪嗜血杆菌,血清型为1、2、4、5、7、13型和不可分型。其中,血清型1型2株,分别命名为XX-3、HB-1;血清型2型1株,命名为XX-4;血清型4型1株,命名为ZJ-1;血清型5型4株,分别命名为LY-1、DF-1、XX-2、KF-1;血清型7型2株,分别命名为SQ-2、XX-1;血清型13型1株,命名为NY-1;还有1株不可分型,命名为SQ-1。可见,河南省存在多个副猪嗜血杆菌血清型,且不同地区血清型不一致,1、5、7型为优势血清型。     

一例猪链球菌病与附红细胞体病混合感染的诊治报告

猪链球菌病是由不同血清型的链球菌(A、C、D、E、L及R群)引起的一种急性、热性传染病,临床发病特征有急性型(败血症型、脑膜脑炎型)和慢性型(淋巴结脓肿型、关节炎型),各年龄段的猪均可感染,保育猪多发。S附红细胞体病又称猪红皮病,是由猪嗜血支原体赛寄生于红细胞或血浆中而引起的一种猪传染病。猪链球菌病和附红细胞体病的混合感染发病快,死亡率高,给生猪养殖户带来较大的经济损失。2018年5月,笔者接诊了我县一例猪链球菌病和附红细胞体病的混合感染,现总结诊治方法,以供参考。     

浅谈猪链球菌病的流行特点

猪链球菌病在世界上广泛分布。猪链球菌有多种型（1-34、1／2）以及一些无法定型的菌株。引起猪发病的链球菌以2型为主。据临床表现不同,猪链球菌病可分为猪败血性链球菌病（败血型）、猪链球菌性脑膜炎（脑膜炎型）、猪淋巴结脓肿（淋巴结脓肿型）5-种类型。本文谈相关的临床表现和流行特点。     

抗猪细小病毒单克隆抗体在猪细小病毒病诊断上的应用

用淋巴细胞杂交瘤技术，研制出的抗猪细小病毒单克隆抗体，采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）方法，对本地区所采得的３０８份猪血清进行检测，阳性检出率达６６．６％，其中２０－３５日龄仔猪阳性检出率在８０％以上；４５日龄仔猪阳性检出率为７５．５％；屠宰猪阳性检出率５５．２％。选择７０份被检血清用已建立的检测猪细小病毒抗体的ＥＬＩＳＡ试验与传统的ＨＩ试验进行比较，其敏感性较高，ＥＬＩＳＡ检出阳性率为８５．７     

上海部分地区猪链球菌2型的流行病学调查及其耐药性

猪链球菌2型是一种重要的人兽共患病病原,由其引起的猪链球菌病给养猪业带来巨大的危害。本研究通过PCR方法扩增谷氨酸脱氢酶(GDH)基因和荚膜多糖(CPS)基因检测猪链球菌2型,对上海部分地区猪链球菌2型的流行病学进行调查,并对分离到的菌株进行生化鉴定及耐药性研究。结果显示,上海部分地区猪链球菌的检出率为41.2%(103/250),猪链球菌2型的检出率为12.4%(31/250),猪链球菌2型占猪链球菌的30.1%。猪链球菌2型菌株对四环素、链霉素和氯霉素的耐药性最为严重,多数菌株呈多重耐药性,其中以4重耐药性为主。这为上海地区猪链球菌病的监管提供了依据,并对临床治疗使用抗生素具有参考价值。     

β-内酰胺类抗生素对猪源链球菌体外抗菌活性的研究

从东北地区采集的猪鼻腔棉拭子进行猪源链球菌分离纯化、兰氏分群、生化反应和药物敏感性分析。以美国临床检验标准委员会(NCCLS)的临界浓度作为判断标准,判定了猪源链球菌对8种β-内酰胺类抗生素的耐药性。结果表明,检测的36株菌株均为血清D型,共得到10种生化反应编码。36株猪源链球菌对头孢拉定(CRD)的耐药率最高,达86.1%;对阿莫西林(AMO)耐药率最低,为14%;对头孢噻肟钠(CTX)、头孢曲松钠(CEF)、头孢唑林(CEZ)、青霉素G(PEN)、氨苄西林钠(AMP)、苯唑西林(OCL)的耐药率在16.7%～72.2%之间。β-内酰胺酶检测有8株为阳性。     

Prevalence of Streptococcus suis Isolated from Clinically Healthy Sows in China

Streptococcus suis is an important pathogen in pigs. Transmission of this pathogen is generally believed to occur between healthy carrier sows and their offspring, so the carrier status of S. suis in healthy sows is important for the control of S. suis infections in pigs, especially in suckling and growing pigs. In this study, the prevalence of S. suis isolated from clinically healthy sows in China was studied for the first time. A total of 1 043 tonsil samples were collected from clinically healthy sows from 10 regions in China from 2005 to 2007. Among the 421 S. suis isolates, 31 strains were identified as capsular type 2. The results showed that S. suis was widespread in swine herds in China with the carrier rates in different herds ranging from 19.5 to 93.9%. Overall, 40.4 and 3.0% of clinically healthy sows harbored S. suis and capsular type 2 in their palatine tonsils, respectively. Statistically significant differences of carrier rates of S. suis and capsular type 2 between the different farms were observed, which was independent of herd sizes and geographic distributions of different herds.     

快生型大豆根瘤菌血清学特性的研究

以自新疆、黑龙江、辽宁、吉林、湖北、天津和北京等地分离的16株快生型大豆根瘤菌为供试菌,用交叉凝集反应比较研究了它们与目前国内外已报道的9株快生型大豆根瘤菌标准血清型菌株之间的血清学关系,研究结果表明：（1）菌株J711,NJ16、NJ111和A212均属O#-1（2048）血清型。（2）菌株RT15、Two-7和93F41与供试标准血清型菌株的菌体抗原均不相同,命名为O#-9、O#-10和O#-（11）3种新的血清型。菌株6-1为自凝菌株,其血清型为O#-0。（3）交叉抗原吸收试验结果表明,菌株92X10、C333、RT10和2056同属O#-5血清型,并可进一步区分为O#-（5ab）、O#-（5bcd）、O#-（5def）和O#-（5fg）4个血清亚型。菌株HA10-1-3、HA12-1-12和2120分属O#-6血清型的O#-（6ab）、O#-（6bcd）和O#-（6de）3个血清亚型。（4）将2048等6个标准菌株重新命名为O#-1,O#-2,O#-3,O#-4,O#-7和O#-8血清型。     

Identification of Antigens Common to Streptococcus suis Serotypes 2 and 9 by ImmunoproteomicAnalysis

Streptococcus suis is a Gram-positive pathogen that causes serious diseases in pigs. In addition to S. suis serotype 2 (SS2), S. suis serotype 9 (SS9) is another prevalent serotype, which is frequently isolated from the organs of diseased pigs in China. An immunoproteomic-based approach was developed to identify antigens common to SS2 and SS9 for vaccine development. Cell wall proteins extracted from SS2 strain HA9801 were screened by two-dimensional Western blot using anti-SS2 sera, anti-SS9 sera, or pre-immune sera pooled from specific pathogen free (SPF) mice. Protein spots on preparative gels were excised and identified by matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry, which led to the identification of four shared immunogenic proteins (arginine deiminase, translation elongation factor-Ts, o-acetylserine lyase, and 1-phosphofructokinase). The genes encoding these four proteins from SS9 strain GZ0565 were cloned and their proteins were overexpressed in Escherichia coli BL21. Western blot analysis of these recombinant proteins using the convalescent serum of an SPF mini-pig inoculated with the SS2 strain, anti-SS2 sera, and anti-SS9 sera pooled from SPF mice further confirmed the immunogenicity of these proteins. These immunogenic proteins, which are encoded by genes that are reasonably conserved among SS2 and SS9 strains, could be developed as vaccine candidates.     

黄渤海区域贝类中副溶血弧菌污染调查及血清学分型

[目的]了解黄渤海区域零售贝类中副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,Vp)污染及血清学分型情况,为指导安全消费和建立预警预报系统提供科学依据.[方法]2010年7~10月,采集山东日照、烟台、青岛、威海、大连和莱州6个城市零售市场上的贝类,利用MPN-PCR对样品进行检测和定量分析,采用SPSS 16.0软件对数据进行统计分析.[结果]153份样品中共检出Vp阳性115份,各城市检出率均在60.0%以上,平均为75.2%.经卡方检验显示:不同城市间的检出率无显著差异(P>0.05),不同贝类的检出率存在显著差异(P<0.05),其中螠蛏的检出率最高(100.0%).定量分析结果表明:MPN均值最高的是螠蛏(673.9 MPN/g),不同贝类中Vp的MPN平均值存在显著差异(P<0.05).血清学分型结果显示:贝类中Vp的血清型分布呈多样性,115株菌可鉴定出9个0群和53个K型.[结论]黄渤海区贝类中Vp检出率较高、分布广泛,且血清型具有多样性的特点,但未检出Vp的tdh基因.     

猪附红细胞体特异性PCR检测方法的建立

从猪血中分离附红细胞体,提取其基因组DNA,用EcoRI对基因组DNA进行酶切,将酶切片段进行琼脂糖电泳,得到一个1.8 kb的DNA片段,根据DNA序列分析与GenBank已知基因比较和PCR方法确定该片段具有特异性,以该片段为模板进行PCR,并将其扩增产物与其它猪的其他细菌DNA扩增产物相比较,建立一种检测猪外周血中附红细胞体的特异性PCR检测方法,并通过斑点杂交试验检测该产物特异性,通过临床应用检验该法的适用性。结果表明:扩增产物大小为782 bp,其序列与已知附红细胞体序列同源性为100%,斑点杂交试验证实该产物为附红细胞体特异性产物,将该方法应用于检测10头临床症状典型的感染猪和10头健康猪的血液,所有感染和隐性带菌猪的PCR检测结果为阳性,健康猪为阴性。猪外周血中附红细胞体的特异性PCR检测方法适用于检测无临床症状的隐性带菌动物。     

猪源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及荚膜血清分型

为了解各血清型的多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm）在四川、重庆、云南的流行情况,对2013-2014年间四川、重庆、云南等地8个规模化养殖场的125份病死猪肺炎样品进行细菌分离,并用PCR方法对分离的多杀性巴氏杆菌进行鉴定及荚膜血清分型。结果表明：从有肺炎症状病死猪的肺脏样品中共分离出11株多杀性巴氏杆菌,其中有7株为A血清型（63.6%）,3株为D血清型（27.3%）,1株为F血清型（9.1%）,没有发现B和E血清型。表明在该区域内,猪肺疫主要是由A型Pm感染引起。另外,此次还分离出了1株较少见的F型多杀性巴氏杆菌。该结果可为上述地区巴氏杆菌病的防治提供科学材料。     

湖北省高热病猪链球菌的分离鉴定和对小鼠的致病性研究

 【目的】从湖北省不同地区的高热症病例猪的心血、肝、淋巴结、肾和肺等分离出11株链球菌,进行血清型、毒力基因分布和病理学的初步研究。【方法】通过ATB自动生化鉴定系统Rapid ID 32 STREP链球菌鉴定、PCR分型、毒力基因的PCR检测及动物试验对分离菌株进行试验。【结果】11株均为猪链球菌,其中1株为7型,2株为9型,另8株为其它型,没有1型和2型。对11株猪链球菌的mrp、epf、sly、orf2、fbps、gdh6种毒力基因的分布情况进行PCR检测及动物试验表明：致病性和致死性较强的菌株毒力基因表型多为epf+orf2+fpbs+gdh+,显示除mrp、sly外,其它毒力因子也与菌株毒力相关。病理学变化表明急性死亡多表现为急性败血症症状,全身各组织器官广泛出血,以及肺炎、肾炎,脾脏淤血水肿和淋巴结脓肿。【结论】湖北省存在7型和9型的猪链球菌感染,猪链球菌在高热症中具有一定致病作用。