克隆乳牛导入人乳蛋白转基因

通过转基因的方式把人母乳中乳铁蛋白转基因导入乳牛，使牛奶中含有人乳成分，即把牛奶人乳化。     

转基因羊乳中重组人乳铁蛋白的分离工艺研究

人乳铁蛋白(human lactoferrin,hLF)是一种隶属于铁结合蛋白家族的糖基化蛋白,具有多种生理功能.随着生物技术的发展,利用转基因技术在动物乳腺中生产重组人乳铁蛋白(recombinant human lactoferrin,rhLF)已成为可能,目前已在鼠、兔、羊、牛等动物乳汁中成功地表达了重组人乳铁蛋白.     

乳铁蛋白的生物学功能及在仔猪生产上的应用

乳铁蛋白（1actoferrin，LF）是乳汁中一种重要的非血红素铁结合糖蛋白，主要是由乳腺上皮细胞表达和分泌。它是由Groves最先从牛乳中分离获得，之后Blance等从人乳中分离获得此蛋白正式将其命名为乳铁蛋白。LF分布在哺乳动物的乳汁和其他多种组织及泪液、精液、胆汁等分泌液中。     

乳铁蛋白及其活性多肽研究进展

从动植物的天然产品中寻找耐热活性因子 ,是饲料科学一个新兴的研究方向。家畜乳中含有多种具抗菌作用的蛋白质分子 ,对母畜的自身免疫及维持初生仔畜的胃肠道健康起重要作用。乳铁蛋白 (Lactoferrin ,简写为LF)是Groves于 1 960年首先从牛乳中分离获得 ,由于乳铁蛋白与铁结合形成红色的复合物 ,故始称红蛋白。 1 961年Blanc和Isliker将他们从人乳中分离出来的此种蛋白命名为乳铁蛋白。另有学者根据乳铁蛋白转运铁的功能将其称为乳转铁蛋白 (Lactotransfer rin)。LfcinB是牛乳铁蛋白在消化道正常生理条件下释放出的一种含 2 5个氨基酸残…     

乳铁蛋白及其活性肽的营养生理作用及应用前景

乳铁蛋白(LF)是一种多功能的糖蛋白,乳铁蛋白活性多肽(Lfcin)是从LF上被胃蛋白酶水解下来的25个氨基酸残基的小肽。文中阐述了乳铁蛋白及其活性多肽的结构,介绍了乳铁蛋白及其活性多肽的主要生理作用:抗菌、抑菌、抗病毒、抗氧化,调节机体的免疫和提高肠道对铁离子的吸收等作用。根据乳铁蛋白制备的研究进展,讨论了乳铁蛋白及其活性多肽在乳、食品和动物生产中作为添加剂的应用前景。     

通过转基因改善家畜奶的品质

通过大量的研究报道，综述了转基因技术在改善家畜奶品质方面的研究概况，如提高奶中κ-、αs1-、αs2-和β－酪蛋白含量，增加溶菌酶含量，生产人乳铁蛋白和乳白蛋白，降低乳糖含量，使其品质更接近人奶。     

白科学家培育出可产生乳铁蛋白的转基因山羊

据俄罗斯《科学信息》杂志报道，由俄罗斯和白俄罗斯科学家联合培育的两只转基因山羊最近在白俄罗斯顺利降生，小山羊成年后所产的奶中将含有人乳的乳铁蛋白。     

转人乳铁蛋白基因奶牛多重PCR检测方法的研究

本研究旨在建立转基因奶牛多重PCR快速检测方法,为转基因动物及产品出入境检测技术平台的建立提供技术支持,并为转基因动物及产品检测技术标准的制定提供参考。根据牛物种特异性基因(mtDNA)设计奶牛内源基因引物,根据外源基因人乳铁蛋白基因(human lactoferrin,hLF)和新霉素磷酸转移酶基因(NPT Ⅱ)设计特异性引物,优化反应条件,建立转基因奶牛多重PCR检测方法。本方法敏感、快速、特异,一个反应可以检测多个基因片段,可有效用于转基因奶牛外源基因的检测。     

人乳铁蛋白对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响

为了研究人乳铁蛋白对宫颈癌Hela细胞的生长抑制作用及其对细胞凋亡、p53蛋白表达和Caspase-3活性的影响,试验采用MTT方法检测细胞的生长抑制率、DNA片段化试验检测细胞凋亡、流式细胞术测定细胞周期、Western-blot检测p53蛋白表达、Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3的活性.结果表明:人乳铁蛋白对宫颈癌Hela细胞的抑制呈现时间和剂量依赖性,有73%的Hela细胞停滞在G0～G1期;Western-blot检测结果显示人乳铁蛋白可以上调p53蛋白的表达; 人乳铁蛋白作用48 h后Caspase-3的活性是0小时时的5.5倍,二者差异极显著(P<0.01).结果说明人乳铁蛋白能显著抑制宫颈癌Hela细胞生长,其抗肿瘤机制与诱导细胞凋亡、调控细胞周期、上调p53表达、活化Caspase-3有关.     

人乳铁蛋白多克隆抗体的制备、初步纯化及其应用

制备并初步纯化人乳铁蛋白的多克隆抗体，然后将抗体用于该蛋白的检测。分别对8周龄的昆明白小鼠和12周龄的新西兰白兔进行多次皮下免疫注射，采集血清并用硫酸铵沉淀法进行抗体的初步纯化。将初步纯化的抗体用于抗体夹心ELISA法检测转基因小鼠乳汁中人乳铁蛋白的表达量。经三次免疫后的新西兰白兔和昆明白小鼠血清中抗体的效价分别达到了1：48000和1：24000，并能在较高水平上维持两周以上，经初步纯化后抗体纯度得到很大提高。用抗体夹心EUSA法能够测出转基因小鼠乳汁中人乳铁蛋白含量。使用皮下注射的方法对昆明白小鼠和新西兰白兔进行免疫来制备多克隆抗体是可行的，硫酸铵沉淀法纯化后的抗体去除了大多数杂蛋白，可以满足测定的需要。     

藏绵羊乳腺乳铁蛋白的克隆及序列分析

本研究以四川若尔盖县藏系绵羊为材料,利用RT-PCR方法扩增并克隆了藏绵羊乳铁蛋白(lactoferrin,LF)序列,运用生物信息学软件对其核苷酸序列和编码蛋白质的结构进行预测和分析。结果表明,克隆的LF基因全长2127 bp,共编码708个氨基酸,N端有19个氨基酸组成的信号肽,该蛋白质等电点为8.4,预测分子质量为77.2 ku;半定量RT-PCR分析结果表明,LF在乳腺、气管、淋巴、肝脏、泪腺和脾脏中都有表达,在肺脏中不表达。本试验克隆了藏绵羊LF cDNA全序列,并对LF和乳铁蛋白肽(lfcin,Lfc)核苷酸和蛋白质进行了分析,为进一步研究其生物学活性奠定基础。     

奶山羊LF基因CDS区克隆、生物信息学分析及其乳中含量测定

为了解奶山羊乳铁蛋白（lactoferrin,LF）基因的生物学特性,分析萨能奶山羊不同泌乳时期乳中LF含量的变化,试验扩增了萨能奶山羊乳腺上皮细胞LF基因CDS区序列,运用生物信息学软件对奶山羊LF基因的核苷酸序列特性、编码蛋白的理化性质、保守结构域及高级结构、与其他物种的同源性等进行了分析,并对奶山羊乳样品进行了ELISA测定。结果表明,萨能奶山羊LF基因长为2 127 bp,编码708个氨基酸,编码蛋白质的分子式为C₃₄₀₅H₅₃₆₅N₉₄₉O₁₀₂₄S₄₃,是一个不稳定的亲水性蛋白,二级结构包含α-螺旋、延伸链和无规则卷曲,具有与转铁蛋白相似的折叠方式;羊乳铁蛋白氨基酸残基组成单链,形成77.359 ku具有高级结构的糖蛋白;通过比对发现,牛科LF氨基酸序列的同源性较高（>92%）,与其他物种的差异较大,其中萨能奶山羊与山羊的同源性最高（99%）,且处于进化树的同一个分支。ELISA检测结果发现,奶山羊初乳中LF含量最高,常乳中的含量较低且较为稳定。研究结果初步表明了萨能奶山羊LF序列和结构域特点,揭示了萨能奶山羊乳中LF含量的变化规律,为LF功能研究、产品研发等提供参考。     

保护性蛋氨酸与赖氨酸在奶牛生产中的应用

乳蛋白是体现牛奶质量的重要指标,乳蛋白氨基酸来源于日粮氨基酸。乳蛋白中酪蛋白、乳白蛋白和乳球蛋白除了满足人体基本营养需求,还对人体生长、发育和健康发挥重要作用,是动物源优质蛋白质来源。蛋氨酸与赖氨酸是奶牛日粮限制性氨基酸,不仅是乳蛋白合成的重要底物,同时还作为信号分子调控乳蛋白基因表达。本文综述了奶牛氨基酸需要与来源、必需氨基酸、限制性氨基酸、保护性蛋氨酸和赖氨酸在日粮中的应用,阐述了氨基酸营养在蛋白质合成代谢中的核心作用,为指导奶牛日粮配方提供参考。     

Cloning and expression of pigeon IFN-γ gene

This is the first paper describing the cloning of pigeon IFN-γ gene (PiIFN-γ) and the analysis of the in vitro expressed recombinant protein. The PiIFN-γ gene was identified by RT-PCR as a 498 bp, fragment coding for a precursor protein of 165 amino acids instead of 164 amino acids, as observed in the other avian species. The recombinant protein was expressed in vitro by an eukaryotic system and the biological properties of the cytokine were tested using a chicken macrophage cell line. The high degree of amino acid and nucleotide identity, shared with the ChIFN-γ, and the fact that the pigeon protein was functional on chicken cells, indicates a cross-reactivity between pigeon and chicken IFN-γ. The detection of the PiIFN-γ could represent an useful instrument in understanding the role played by this cytokine in immune response related to vaccinations and infectious diseases in the pigeon.     

人乳铁蛋白cDNA的克隆及在家蚕细胞中的表达

从人的乳腺组织中克隆了人乳铁蛋白(hLF)cDNA,其DNA序列与GenBank中另外4个hLF cDNA序列具有高度的同源性(同源性达到99%)。将人乳铁蛋白cDNA克隆在质粒pBacPAK8的BamHⅠ位点和XhoⅠ位点,构建成重组转移质粒pBacPAK-hLF。该质粒DNA与已线性化BacPAK6DNA共转染家蚕细胞BmN,在培养的贴壁细胞中挑出空斑,经过3轮纯化,获得重组病毒BmNPV-hLF。蛋白质免疫印迹法检测到在重组病毒感染的家蚕细胞中存在人乳铁蛋白基因的表达产物,分子量约78kD,ELISA法测定结果表明家蚕细胞中重组人乳铁蛋白(rhLF)相对表达量在表达120h达到最高值,约为13.5mg/L。体外生物活性试验表明重组hLF对大肠杆菌JM109具有抑菌活性。     

柔嫩艾美耳球虫甘肃株钙调域蛋白激酶基因的克隆与表达

应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术，从柔嫩艾美耳球虫甘肃株(E．tenella GS，Et GS)孢子化卵囊的子孢子中提取总RNA扩增得到鸡球虫子孢子表面抗原钙调域蛋白激酶(CDPK)基因。将Et GS CDPK基因与原核表达载体pGEX-6P1连接，构建了pGEX-CDPK原核表达质粒，并获得高效表达和纯化的CDPK融合蛋白，表达率达35．4％。序列分析表明：Et GS CDPK与文献报道的Et CDPK比较，共有5个核苷酸发生变异，核苷酸同源性为99．6％；有5个氨基酸发生变异，氨基酸同源性为98％。     

Cloning and expression of pigeon IFN-γ gene

This is the first paper describing the cloning of pigeon IFN-γ gene (PiIFN-γ) and the analysis of the in vitro expressed recombinant protein. The PiIFN-γ gene was identified by RT-PCR as a 498 bp, fragment coding for a precursor protein of 165 amino acids instead of 164 amino acids, as observed in the other avian species. The recombinant protein was expressed in vitro by an eukaryotic system and the biological properties of the cytokine were tested using a chicken macrophage cell line. The high degree of amino acid and nucleotide identity, shared with the ChIFN-γ, and the fact that the pigeon protein was functional on chicken cells, indicates a cross-reactivity between pigeon and chicken IFN-γ. The detection of the PiIFN-γ could represent an useful instrument in understanding the role played by this cytokine in immune response related to vaccinations and infectious diseases in the pigeon.     

乳腺内氨基酸调控乳蛋白合成的分子作用机制

作为维持哺乳动物生命活动重要的"生物工厂",乳腺利用从流经血液中摄取的氨基酸等营养物质为底物合成乳蛋白。研究证实,氨基酸还可作为一种信号因子,通过乳腺内多种信号级联传导通路,调控乳蛋白基因的转录及翻译过程,从而影响乳腺中乳蛋白的合成。酪氨酸蛋白激酶-信号转导子和转录激活子(JAK-STAT)信号通路和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)信号通路是乳蛋白基因转录和翻译过程中的主要调控路径。本文综述了乳腺JAKSTAT和m TOR信号通路的分子机制及氨基酸通过这些通路调控乳蛋白合成的研究进展,旨在进一步阐明氨基酸调控乳蛋白合成的作用机理。     

The in vitro effect of bovine lactoferrin on the activity of organ leukocytes in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss), European eel (Anguilla anguilla) and wels catfish (Silurus glanis)

Lactoferrin (LF) is a glycoprotein found in milk, neutrophil granules, secretions and selected organs of mammals. Lactoferrin exhibits antibacterial, antiviral, fungicidal, immunoregulatory and other functions. Although fish are devoid of this protein and its cell receptors, LF effect on the immune mechanisms of fish has been demonstrated. The objective of this study was to investigate the effect of bovine lactoferrin, applied in vitro, on the activity of head kidney and spleen leukocytes in three freshwater fish species: rainbow trout (Oncorhynchus mykiss), European eel (Anguilla anguilla) and wels catfish (Silurus glanis). The obtained results validate LF beneficial effect on the respiratory burst of phagocytes in rainbow trout and wels catfish despite the fact that the potential killing activity against Aeromonas hydrophila was not stimulated in any of the studied species. Bovine lactoferrin enhanced the proliferation of T-lymphocytes in rainbow trout and European eel, as well as of B-lymphocytes in rainbow trout.