猪源大肠埃希菌血清型O145菌株分离鉴定、耐药性及致病性研究

大肠埃希菌是引起仔猪腹泻甚至死亡的最常见的细菌性病原体。本试验对辽宁某规模化猪场3日龄腹泻仔猪进行了细菌分离鉴定。结果显示：从腹泻仔猪肝脏中分离出革兰氏阴性杆菌,经16S rDNA基因扩增和序列测序比对,与GENBANK登录号为CP031919.1(血清型为O145大肠埃希菌)基因序列同源性为99.44%,表明分离菌株为血清型O145大肠埃希菌;动物试验结果：分离菌36h内引起感染小鼠全部死亡,说明分离菌株为强致病性大肠埃希菌;毒力基因检测结果：分离菌株携带iusD、iss、FimH等毒力基因;药敏试验结果：分离菌株对头孢噻肟敏感,对阿米卡星中敏,对多黏菌素B、头孢唑啉、阿奇霉素、阿莫西林、大观霉素、环丙沙星、红霉素、多黏菌素E、利福平、复方磺胺甲唑和多西环素等11种药物均呈现耐药;耐药基因检测：分离菌株携带aac(6′)-Ⅰb、aac(3′)-Ⅱ、TEM、qnrS、ermB等耐药基因。     

鸭致病性大肠杆菌的分离鉴定及其生物学特性分析

鸭致病性大肠杆菌病是危害养鸭业的最为重要的细菌性传染病之一。本研究分离鉴定了65株鸭致病性大肠杆菌,并对其O血清型、耐药谱以及毒力相关基因进行了检测。结果表明：大肠杆菌O78,O2和O1为主要流行血清型,各占分离株的75％、11％和5％。对15种常规抗菌素或药物的药敏试验结果表明：100％的分离株对利福平和红霉素耐药;94％以上的分离株对头孢噻吩等10种抗菌素或药物耐受;70％以上的分离株对氯霉素、卡那霉素、庆大霉素、壮观霉素和头孢噻肟敏感。对14种可能的大肠杆菌毒力相关基因的检测结果表明：ompA、pfs和luxS三种基因高度保守,在分离菌株中的检出率为100％;iss、iuCD、tsh、fimC、cvaC和iroC基因的检出率达到72％以上,为重要的鸭致病性大肠杆菌毒力相关基因。     

1株信鸽源鼠伤寒沙门氏菌的分离鉴定及其耐药性和毒力分析

本试验旨在鉴定临床疑似沙门氏菌感染致死信鸽的病原菌并确定致病菌的耐药及毒力状况。通过细菌分离培养、菌落形态观察、染色镜检、生化鉴定、血清分型、16S rRNA基因测序分析和康复信鸽血清平板凝集试验进行鉴定,并通过药敏试验、耐药基因和毒力基因检测进行耐药性和毒力分析。结果显示,分离纯化的细菌在BS、XLD、HE培养基上为黑色菌落,镜检为无荚膜、无芽孢的革兰氏阴性短杆菌;分离菌株生化反应结果符合沙门氏菌生化特性;分离菌株血清型为1,4,12：i：1,2;分离菌株16S rRNA基因序列系统进化树分析显示,该分离菌株与鼠伤寒沙门氏菌聚为一支,同源性>99%,康复信鸽血清与分离菌株发生特异性凝集,结合生化反应和血清分型结果该菌株鉴定为鼠伤寒沙门氏菌;分离菌株对氟苯尼考耐药,经耐药基因检测携带floR、cmlA氯霉素类耐药基因,与耐药表型相符;分离菌株mogA等17种毒力基因检测均为阳性。本试验成功分离到1株信鸽源鼠伤寒沙门氏菌,分离菌株对氟苯尼考耐药且具有较强毒力,为下一步信鸽沙门氏菌的防治和研究提供了参考依据。     

奶牛布鲁氏菌病的病原分离与鉴定

为给奶牛布鲁氏菌病实验室诊断提供技术参考,对疑似布鲁氏菌病病例进行了病原分离培养,并采用平板直接凝集试验、革兰氏染色镜检、柯兹洛夫鉴别染色镜检和PCR方法对分离菌株进行了鉴定.结果表明：分离的4株细菌均为布鲁氏菌属细菌.     

鲢鱼致病性嗜水气单胞菌的分离与鉴定

目的：利用实验室诊断技术对某鲢鱼养殖厂发病鲢鱼进行诊断,以期为该场发病鲢鱼的治疗和预防提供技术支持。方法：运用细菌分离培养、生化鉴定对该发病养殖场随机挑取发病鲢鱼进行诊断,利用药敏试验进行治疗药物的筛选。结果：从鲢鱼中分离菌株19株,其中13株为嗜水气单胞菌菌株,检出率为68.4%。药敏试验结果筛选出的药物为该病治疗和预防提供了参考依据。     

鲢鱼致病性嗜水气单胞菌的分离与鉴定

目的：利用实验室诊断技术对某鲢鱼养殖厂发病鲢鱼进行诊断,以期为该场发病鲢鱼的治疗和预防提供技术支持。方法：运用细菌分离培养、生化鉴定对该发病养殖场随机挑取发病鲢鱼进行诊断,利用药敏试验进行治疗药物的筛选。结果：从鲢鱼中分离菌株19株,其中13株为嗜水气单胞菌菌株,检出率为68．4％。药敏试验结果筛选出的药物为该病治疗和预防提供了参考依据。     

巴仑台镇古仁郭勒村牦牛流产病因分析及其防治

目的：为诊断巴仑台镇古仁郭勒村牦牛群母牦牛流产、产弱胎的病原。方法：应用常规细菌分离方法和试管凝集试验进行分离、检测从巴仑台镇古仁郭勒村所采集的62头疑似牦牛样品（流产史的牦牛血样等）。结果：细菌分离结果为牛布鲁氏杆菌为主,也有些金黄色葡萄球菌、链球菌、巴氏菌等混合感染;试管凝集试验结果为牛布鲁氏杆菌抗体阳性,其母牛阳性率为85％100％,其犊牛阳性率为15％-30％;可说明该地区牦牛严重感染牛布鲁氏杆菌病,是造成母牦牛流产的主要原因之一。提示当地及时淘汰病畜、诊治布病、加强防范。     

上海地区奶牛的乳房炎金黄色葡萄球菌耐药性

为调查上海地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的耐药性,采集上海地区乳房炎患病乳样60 份,进行金黄色葡萄球菌的分离鉴定及药敏实验。结果表明：经分离鉴定,共检出8 株金黄色葡萄球菌,分离率为13.33%;药敏实验结果表明,分离得到的金黄色葡萄球菌对青霉素G和氨苄西林的耐药率最高,均为100.00%,对磺胺甲恶唑的耐药率次之,为50.00%,对头孢克洛、头孢唑肟、洛美沙星、诺氟沙星、四环素、庆大霉素、红霉素、克林霉素和氯霉素的耐药率均为37.50%,对环丙沙星和氧氟沙星的耐药率均为25.00%,对头孢噻肟、头孢他啶     

一株藏猪源奇异变形杆菌的分离鉴定及药敏试验

本研究从某藏猪场发病仔猪病料中分离细菌，对分离菌进行形态学、染色特性、生化特性鉴定，并分析16S rDNA基因同源性，同时进行了药敏试验。分离鉴定结果得出：分离菌呈多形性，多为革兰氏阴性短杆菌，少数为长杆状，在SS培养基上形成中心黑色、边缘白色的单菌落；生化反应对鸟氨酸脱羧酶、尿素酶、葡萄糖、柠檬酸盐、山梨醇、硫化氢等呈阳性反应；分离株16S rDNA基因的PCR扩增目的条带约为1 410 bp，在GenBank上进行同源性比对，与奇异变形杆菌的相似度为99%。从形态学、生化特性和16S rDNA序列分析结果鉴定出所分离的菌株为奇异变形杆菌。药敏试验结果显示：菌株的耐药性很强，只对头孢他啶、氧氟沙星、庆大霉素、阿米卡星、氟苯尼考、左氧氟沙星、麦迪霉素等敏感。     

1株罗曼粉鸡源申氏不动杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解贵州省某养殖场罗曼粉鸡发病病原的特征及其耐药性,本试验从病死鸡中分离出一株革兰氏阴性菌,命名为GZ2019,并对其进行纯化培养、生化试验、16S rRNA序列分析、药敏试验及动物回归试验。分离菌在普通琼脂培养基上呈圆形凸起、表面光滑、半透明的灰白色小菌落,鲜血营养琼脂培养基上菌落形态与普通琼脂培养基上的一致,但不溶血;革兰氏染色结果镜检显示,分离菌为成双排列的阴性球杆菌,偶见单个存在或链状排列;生化试验结果显示,分离菌枸橼酸盐利用、过氧化氢酶反应为阳性,硝酸还原、氧化酶、葡萄糖发酵等反应为阴性,无运动性;16S rRNA序列分析结果显示,分离株与不动杆菌的核苷酸同源性在72.6%~99.9%之间,与申氏不动杆菌LUH 4760株（GenBank登录号：AJ275041）、SNSK 752株（GenBank登录号：MG584984）、MCDA01株（GenBank登录号：KY385627）及RP1株（GenBank登录号：MG461636）的核苷酸同源性高达99.9%;药敏试验结果显示,分离菌对头孢曲松和痢特灵敏感,对头孢哌酮、头孢呋辛、头孢他啶等5种药物中度敏感,对新霉素、环丙沙星、羧苄西林等17种药物耐药;动物回归试验结果显示,试验组小鼠隔离饲养1周仅死亡1只,死亡率为20%,表明该分离菌致病性较弱。本试验成功分离出1株低致病性申氏不动杆菌GZ2019,可为鸡源申氏不动杆菌病的预防和治疗提供一定的参考依据。     

青贮料中肠球菌的分离与筛选

本试验从青贮料中分离肠球菌并对分离菌株进行初步鉴定与筛选,通过正交试验设计研究不同温度、初始pH和瘤胃液含量对3株分离菌生长的影响,筛选出适合作为奶牛饲用微生物的菌株。结果表明,3株分离菌的最佳培养条件相同为：培养基含葡萄糖2%、蛋白胨1%、瘤胃液20%、初始pH为5.8,接种量为3%,装液量为40 ml, 36℃培养24 h。 在该条件下,3株分离菌的生物量分别为1.9907、1.2963和1.2752。选择生物量最高的1号菌送中科院微生物所鉴定,结果为屎肠球菌。     

前处理及液相色谱分离条件对牛初乳IgG含量影响的研究

探寻一种准确测定牛初乳中IgG含量的前处理方法及液相色谱分离条件,选用超声波、生理盐水、盐酸和乳酸作为去除乳脂和酪蛋白沉淀的前处理条件;选用反相键合色谱柱ZORBAX 300SB-C18和ZORBAX Poroshell 300SB-C18,流动相为0.02 mol/L PBS与乙腈作为色谱分离条件对初乳清进行分离;并测定其精密度和回收率.试验结果表明：选用超声波40 kHZ、45 min时,牛初乳中IgG含量达到最高,比没有经过超声处理的IgG含量提高近两倍;选用乳清与生理盐水的稀释比例为1：7时,牛初乳中IgG含量达到最高;选用乳酸调pH值至4.6时,可以更好的去除酪蛋白沉淀;选用反相键合色谱柱ZORBAX 300SB-C18,流动相0.02 mol/L PBS（pH 6.8）与乙腈的比例为95：5、流速为0.2 mL/min时,初乳各蛋白组分分离效果达到最佳.所测定的精密度和回收率分别为0.11%和99.96%.     

鸡奇异变形杆菌的分离鉴定及药敏分析

从云南某鸡场发病鸡肝脏中分离到一株革兰氏阴性多形性小杆菌,并进行生理生化鉴定、16SrDNA基因比对鉴定、致病性试验和药敏试验。试验结果表明：该分离株分解葡萄糖、乳糖、半乳糖和木糖,产酸产气,迅速分解尿素,H2S试验阳性,结合分离株的培养特性和革兰氏染色镜检结果,将分离株初步鉴定为鸡奇异变形杆菌;分离株16srDNA核苷酸序列与GenBank上其它鸡奇异变形杆菌之间的同源性高达99％～100％,与ALK428（基因登录号KC456557）为代表的许多奇异变形杆菌菌株之间的核苷酸同源性高达100％,将分离菌株进一步鉴定为鸡奇异变形杆菌;分离株对小白鼠有强致病性,对头孢噻肟敏感,对青霉素、氨苄西林、头孢噻吩、链霉素、卡那霉素、氧氟沙星、磺胺嘧啶、氟苯尼考等多种抗生素表现严重的多重耐药性。     

山西省北部地区舍饲犊牛大肠杆菌病主要病原的分离和耐药性调查研究

本试验采集临床诊断为犊牛大肠杆菌病的病犊粪便137份,进行病原菌的分离鉴定、动物致病性试验和药物敏感性试验。分离出74株致病性大肠杆菌,主要有13个血清型,分别为：01、02、011、055、074、075、078、086、088、0138、0141、0142和0158,其中078、0138和0158毒力较强。药敏试验表明90％以上的分离菌株对头孢噻吩、环丙沙星、氟哌酸、恩诺沙星和左氧氟沙星高敏,几乎所有分离菌株都对林可霉素和利福平耐药。     

牛源大肠杆菌O157：H7的分离及毒力基因鉴定

从2个牛场采集新鲜粪便,增菌后,免疫磁珠富集,涂布筛选性培养基,挑取可疑菌落用rfbE/fliC二重PCR和血清学方法鉴定。设计毒力基因stx1、stx2、eae、hlyA和tccp相应引物,针对O157：H7对分离株进行PCR鉴定。口服攻毒链霉素处理的BALB/c小鼠明确分离株致病性。结果显示,成功分离到7株出血性大肠杆菌O157：H7,并且有1株迟缓性发酵山梨醇麦康凯培养基。毒力基因检测显示,其中6株毒力因子表型为stx1-stx2＋eae＋hlyA＋tccp＋,另有1株表现型为stx1＋stx2＋eae＋hlyA＋tccp＋,各分离株tccp基因均为阳性,但携带的重复片段数量有差异。所采集样品中肠出血性大肠杆菌O157：H7的检出率高达12%。1×1010 CFU同剂量口服接种经PBS洗涤的5株O157：H7分离株全菌,小鼠存活率有差异分别为40%,50%,60%,20%,50%,各分离株在小鼠体内排菌时间也有差异分别为攻毒后7,9,13,13,15d。     

牛源多杀性巴氏杆菌血清分型及毒力相关基因的检测研究

为确定新疆北疆部分地区疑似病例中分离的牛源多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm）流行的血清型、ST型及毒力相关基因的分布情况,本研究以分离的17株牛源Pm为研究对象,采用荚膜多重PCR分型法、脂多糖多重PCR分型法（LPS-mPCR）、多位点序列分型法（MLST）及PCR方法检测17株Pm分离株的荚膜型、脂多糖型、MLST型及7类共25个毒力相关基因的分布情况。结果显示,13株Pm的荚膜脂多糖型为A：L3型,ST型均为ST1型,4株Pm荚膜脂多糖型为B：L2型,ST型均为ST44;17株Pm毒力相关基因（exbB、exbD、fimA、fur、hgbA、hsf2、nanB、oma87、ompA、ompH、plpB、psl、ptfA、sodA、sodC、tonB和tbpA）的检出率高达100%,toxA基因的检出率为0。结果表明,从新疆北疆部分地区规模化牛场疑似病例中分离的Pm主要血清型为A：L3：ST1型。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离及ORF5基因的序列分析

采集菏泽地区某猪场PRRS疑似病料,在Marc-145细胞上进行病毒分离,得到一株病毒HZ0622,通过免疫荧光试验初步鉴定分离病毒为PRRSV。对ORF5基因进行克隆和测序,并利用DNAStar软件将测定序列与国内外代表性毒株进行同源性比较,结果表明：分离株HZ0622 ORF5基因与美洲型代表毒株VR-2332的同源性为89.55%,与LV株同源性为61.17%,与中国高致病性PRRSV毒株JXA1、HEB1、SY0608、SD-4的同源性分别为98.84%、98.34%、99.00%、99.34%;进化树分析结果表明,分离株HZ0622和高致病性PRRSV在同一进化分支,且与2007年分离的SD-4有更近的亲缘关系。HZ0622分离株属于美洲型毒株,可能属于高致病性PRRSV。     

猪伪狂犬病病毒GZYY2015变异株的分离鉴定

本试验旨在从贵州省贵阳市云岩区某养猪场送检的经检测为猪伪狂犬病（PR）的样品中分离猪伪狂犬病病毒（PRV）。用细胞接毒试验、理化试验和透射电镜观察等方法分离、鉴定病原,测定病原的毒价后进行动物试验和gD、gE基因序列比对分析。结果显示,细胞接毒试验成功分离能致Vero细胞产生典型病变的PRV。理化试验表明,该分离毒株对5-碘脱氧尿核苷（idoxuridine,IUDR）和有机溶剂氯仿敏感,不耐酸和热。在透射电镜下可见近圆形、有囊膜、150~160 nm大小的成熟病毒粒子,在胞核中可见衣壳呈晶格状排列的病毒包涵体,有实心和空心2种形态;动物试验表明,该毒株对兔具有较强的致病性,可导致接种部位奇痒;核酸鉴定结果表明,扩增获得的PRV gD基因开放阅读框（ORF）为1 209 bp,gE基因ORF为1 740 bp。GenBank比对结果显示,gD基因与PRV JS 2012株（登录号：KP257591）、PRV HNB株（登录号：KM189914.3）核苷酸序列相似性均为99.8%,与疫苗株Bartha-K61（登录号：JF797217.1）相似性为98.7%;gE基因与PRV JS2012株（登录号：KP257591）、PRV HNB株（登录号：KM189914.3）和PRV Qihe547（登录号：KU056477）核苷酸序列相似性均为99.9%。基于gD、gE基因推导的氨基酸序列的遗传进化分析发现,gD、gE基因与国内变异株均位于同一进化分支,对gE基因的遗传变异性分析结果表明,该分离毒株符合PRV变异株的变异模式。本试验结果表明,成功分离PRV变异株,可为贵州省PRV的流行病学遗传进化分析及免疫防控等提供参考。     

10株对多种抗生素耐药的禽链球菌的分离鉴定

为有效预防和治疗禽链球菌病,2012—2013期间,笔者从前来就诊的病死禽脏器中分离得到10株疑似禽源链球菌的分离株,经过染色镜检、培养特性、生化试验及生化编码查询等检测表明：10种致病菌都属于链球菌属。各菌株生化反应特性不同,但大多数能发酵蔗糖,5株细菌吡咯芳氨酸酶（PYR）试验阳性。生化编码册查询结果显示：10株分离菌有9株属于D群链球菌、1株是C群兽疫链球菌属。药敏试验结果表明：10株分离菌对萘啶酸、罗美沙星完全耐药;对丁胺卡那霉素、多黏菌素、洛美沙星、新生霉素、万古霉素和美洛西林高敏,对其他多种抗生素都有一定的耐药性。     

吉林地区奶牛乳房炎致病菌中药抑菌试验

本试验对吉林地区九牛乳业集团、春光乳业集团奶牛乳房炎的主要病原菌进行调查。试验抽取18份临床型奶牛乳房炎的奶样,并进行细菌分离鉴定及药敏试验。结果表明：试验共分离到35株菌,19株为金黄色葡萄球菌,占54.29%;11株为无乳链球菌,占31.43%;5株为停乳链球菌,占14.29%。同时筛选出其敏感药物为复方中药连翘：金银花：黄连：鹿花盘=1：2：1：1.5组成,与头孢噻呋无差异,可应用于临床。