禽流感病毒NP cDNA反义逆转录病毒载体的构建及重组病毒的鉴定

根据反义ＲＮＡ作用原理,以禽流感病毒（ＡＩＶ）Ｈ１４Ｎ５　ｃＤＮＡ全长及５’端２３５个ｂｐ为目的基因,反向插入反转录病毒载体 ｐＬＸＳＮ中,命名为 ｐＬＸＳＮ－ＮＰ及 ｐＬＸＳＮ－ＮＰ,用脂质体包裹重组质粒转染包装细胞 ＰＡ３１７,Ｇ４１８筛选抗性克性,扩增单个克隆后提取包装细胞上清的病毒ＲＮＡ（ｖＲＮＡ）,以巢式ＰＣＲ方法检测,以及用包装细胞上清（重组病毒）感染滴定细胞系ＮＩＨ３Ｔ３,表明已筛选出产毒的的克隆细胞质,得到重组逆转录病毒,为反义ＲＮＡ抑制禽流感病毒复制的实验研究奠定了物质基础。     

反义技术及其选择性应用研究进展

反义技术利用DNA或RNA分子通过Watson Crick碱基配对原则与目的基因的mRNA互补结合，通过各种机制使其降解或抑制其编码蛋白的翻译，从而抑制目的基因的表达，包括反义寡核苷酸技术、核酶技术和小干扰RNA技术。与基因敲除等功能缺失性研究方法相比，反义技术具有投入少、周期短、操作简单等优点，因此受到了广泛的关注。文中介绍了反义RNA技术、核酶技术和反义寡核苷酸技术等反义核酸技术的原理及其主要应用，对几种常用反义技术的选择性应用及存在的问题进行概述。     

反义技术及其在预防医学中的应用

反义技术就是根据碱基互补原理 ,利用人工或生物合成的特异互补的DNA或RNA片段 (或其修饰产物 )抑制或封闭基因表达的技术 ,包括反义RNA技术 ,核酶技术和反义寡核苷酸技术。文中介绍了反义RNA技术、核酶技术和反义寡核苷酸技术等反义核酸技术的原理 ,以及反义核酸技术在基因和某些特定蛋白的研究 ,在肿瘤性疾病、病毒性疾病和转基因研究等预防医学领域方面的应用     

反义核酸在抗病毒育种中的研究进展

反义核酸是存在于原核生物中有基因表达调控作用的调控因子。反义核酸能抑制病毒复制,主要是通过碱基配对与特异性的mRNA结合,阻止mRNA的翻译。而在真核细胞中也发现有这样的小分子mRNA。目前,反义核酸在抗病毒育种中方面已取得了一些成绩,文章就其在抗病毒育种中的研究进展进行了综述     

反义核酸技术的研究进展

反义核酸技术具有高特异性、无毒性等特有的优点、近年来一直是抗肿瘤、抗病毒领域研究的热点。本文综述了反义核酸技术的基本原理及其在抗病毒、抗肿瘤、细胞凋亡、信号机制等方面的研究进展。     

反义核酸的研究进展

反义核酸是近几年发展起来的抗病毒、抗肿瘤药物。反以核酸以其合理设计药物的可能性和精确的特异性广泛吸引了人们的注意,但反义核酸的研究并非如人们最初预想的那样简单。本文主要对反义核酸的作用机理、合成、必备条件、应用及发展前景等方面进行了综述,并就研究中需要解决的问题进行了讨论。相信伴随这些问题的解决,反义核酸很可能成为药典的一部分,为动物乃至人类疾病的治疗做出不可估量的贡献。     

反义核酸的研究进展

反义核酸是近几年发展起来的抗病毒、抗肿瘤药物。反以核酸以其合理设计药物的可能性和精确的特异性广泛吸引了人们的注意,但反义核酸的研究并非如人们最初预想的那样简单。本文主要对反义核酸的作用机理、合成、必备条件、应用及发展前景等方面进行了综述,并就研究中需要解决的问题进行了讨论。相信伴随这些问题的解决,反义核酸很可能成为药典的一部分,为动物乃至人类疾病的治疗做出不可估量的贡献。     

反义核酸技术及其应用

反义核酸技术是20世纪70年代末继基因克隆和重组技术后,分子生物学领域兴起的一种全新的技术。该技术由于其核苷酸具有与DNA意义链相同的序列且可以选择     

体外培养细胞中特异反义RNA表达对猪瘟病毒增殖的抑制作用

应用免疫荧光抗体技术检测了整合有猪瘟病毒反义基因的ＰＫ－１５细胞克隆对猪瘟病毒的抑制效应。结果表明，５个不同的反义基因片段对猪瘟病毒的抑制效率存在很大的差异，其中Ａ片段的抑制效率最高（９４％～９８％），Ｂ片段次之（５８％～７６％），Ｃ片段再次（６４％以下），Ｄ片段和Ｅ片段未见明显的抑制效应。抑制效率的差异可能与反义基因片段的位置、长短以及反义ＲＮＡ表达质粒载体有关。     

反义长链非编码RNA调控机制及其在畜禽生理过程中的作用研究进展

反义长链非编码RNA是一类新型的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)，约占总lncRNA的40%，在真核生物体内广泛存在。反义lncRNA主要通过顺式或反式作用方式作用于其正义基因或其他基因。反义lncRNA几乎在机体所有调控水平上都发挥作用，广泛参与畜禽生长发育、繁殖及疾病与免疫等生理过程。本文对反义lncRNA的类型、调控机制及其在畜禽生理过程中的作用研究进展进行综述，为反义lncRNA的鉴定及功能研究提供依据和参考。     

^35S标记的鼠干扰素γ和白细胞介素6RNA探针的制备和应用

分别制备由＾３５Ｓ标记的鼠干扰素γ（ＩＦＮγ）和白细胞介素６（ＩＬ－６）的ＲＮＡ探针，并用组织切片原位杂交技术检查了鼠肠道产生这两种细胞因子的阳性细胞的分布。结果表明，ＩＦＮγ和ＩＬ－６ｃＤＮＡ反义链ＲＮＡ探针具有高度特异性。     

反义寡核苷酸在抗病毒病上的应用与展望

反义寡核苷酸在抗病毒病上的应用与展望裴建武，甘孟侯（北京农业大学动物医学院，１０００９４）目前控制病毒性传染病，最常用的方法是预防接种。但是，对某些病毒病还没有生产出有效疫苗，这就需要借助于其它方法，如药物治疗。但现在供临床应用的抗病毒药还很少，并且...     

单增李氏杆菌中反义RNA介导基因调控的研究进展

单增李氏杆菌是一种人畜共患的革兰氏阳性细菌。该细菌作为实验模型在研究细菌适应性免疫和毒力因子等方面取得诸多成就。最近,应用新技术在单增李氏杆菌的基因组中已发现数百个非编码RNA(ncRNAs),揭示了其复杂的转录机制。反义RNA是目的基因互补链的非编码RNA序列。本文,对反义RNA在单增李氏杆菌中的作用机制和功能进行简要综述,这有助于更深层次的理解RNA介导的基因调控,为诊断技术及抗菌药的研发提供方向。     

反义RNA重组逆转录病毒逆转录套式PCR检测方法的建立

为探求一种快速检测反义RNA重组逆转录病毒效价的新方法，用脂质体介导法将反义RNA重组逆转录病毒载体pLXSA、pLXSB分别转染包装细胞系PA317，经G418筛选，获得数个稳定的产毒细胞克隆，择优挑选7个细胞克隆扩增培养，收集细胞上清，用异硫氰酸胍-酚一步法提取病毒RNA，进行逆转录套式PCR，检测细胞上清中的反义RNA重组逆转录病毒效价，同时用传统方法（小鼠成纤维放大法）进行测定。2种方法检测结果的比较表明，逆转录套式PCR法的特异性和敏感性均高于小鼠成纤维放大法，是一种敏感性高、特异性强、操作简便、快速的检测逆转录病毒效价的新方法。     

正确认识反义寡核苷酸

病毒性疾病是多年来困扰养猪业的重要疾病，多种药物治疗效果不佳。近来悄然兴起了一种基因治疗药一反义寡核苷酸（antisense oligonucleotide，简称asON），且大有泛及兽药与添加剂的来势。鉴于广大养猪人对这一陌生的药物并无全面本质的认识，笔者以为有必要着墨告知。     

反义技术研究简述

我们知道 ,畜禽疾病中有很大一部分是传染病 ,而传染病中约 75 %为病毒性传染病 ,病毒性感染是严重危害畜牧业与养殖业持续稳定发展的主要原因之一。病毒基因的自然突变给疫苗的广泛有效应用带来了很大困难 ,病毒致癌作用也象基因突变一样难以检测。目前尚无安全有效的抗病毒方法与药物 ,病毒的细胞内寄生特性也给药物治疗带来了困难[1] 。分子病毒学的发展使得人们对病毒与宿主以及病毒致病机理的认识越来越深入。近年来 ,人们根据病毒与宿主之间相互作用研究的日益深入 ,设计出新的抗病毒制剂与方法 ,反义技术就是其中之一[2～ 4 ] 。1　…     

常用DNA的分离与纯化技术简介

常用ＤＮＡ的分离与纯化技术简介关红梅王转子（中国农科院兰州畜牧与兽药研究所兰州７３００５０）１ＤＮＡ的分离纯化１．１植物基因ＤＮＡ的纯化方法植物基因ＤＮＡ的纯化方法目前多采用提取液研磨法提取ＤＮＡ,苯酚－氯仿抽提除去蛋白质,ＲＮＡ酶消化法除去ＲＮＡ,...     

旋毛虫肌幼虫RNA的提取及目的基因的PCR扩增

用改进的ＡＧＰＣ法成功地提取出旋毛虫肌幼虫总ＲＮＡ。每０．１ｍｌ压积虫体可获得１００μｇ的ＲＮＡ，其Ａ２６０与Ａ２８０及Ａ２６０与Ａ２３０的比值均接近于２，变性琼脂糖凝胶电泳显示，旋毛虫肌幼虫总ＲＮＡ缺少大部分真核生物所具有的２８Ｓ ｒＲＮＡ．通过比较研究，筛选出理想的虫体处理方法。用聚合酶链式反应直接从总ＲＮＡ中进行目的基因的扩增，得到一分子量为０．７ｋｄ的ＤＮＡ。通过限制性内切酶对其消化鉴定，     

Ribozyme介导的基因治疗

Ｒｉｂｏｚｙｍｅ介导的基因治疗张德礼白晓鸿朱关福１北京军区后勤部卫生防疫队北京军区兽医防治中心北京１０００７１；１中国军事医学科学院微生物流行病学研究所收稿日期：１９９７－０４－１１本文以锤头状、发夹状和斧头状（ＨＤＶ）ｒｉ－ｂｏｚｙｍｅ为主要对象，...