核酸适体在乳及乳制品检测上的运用分析

我国乳制品行业发展迅速,检测需求逐渐增加。随着食品安全相关法律法规完善和监管力度加强,传统乳制品检测方法存在诸多不足。核酸适体在食品和医疗领域应用广泛,具有良好生物相容性、低免疫原性、高稳定性和高特异性等特点,有利于检测体系构建。核酸适体是一种以指数形式存在的单链DNA或RNA分子。利用适配体的特异性识别能力,可通过双链DNA或RNA杂交得到荧光信号,用于检测蛋白质及各种酶等生物材料。与传统检测手段相比,核酸适体具有可设计性强、合成简便快速、成本较低等优势。     

核酸杂交技术及其在分子病理学研究中的应用

核酸杂交技术最初是在1961年建立的。Hall等利用核酸能变性与复性的原理使核酸探针与靶序列在液相中杂交,然后通过平衡密度梯度离心分离到杂交体建立了核酸杂交技术。随后,于1962年Bautz等将糖苷化DNA吸附在硝化纤维素柱上,Bolton等将变性的单链DNA固定在琼脂中,建立     

醋酸纤维素薄膜电泳技术

带电胶体粒子在电场中向自身所带电荷相反的电极端移动的现象称为电泳,而利用电泳的方法对蛋白质、肽类、核酸等很多在生物学上有意义的分子进行鉴别、提纯和分离的技术,称为电泳技术。近十多年来,电泳技术发展很快,电泳形式不断更新,电泳内容也日趋丰富多彩。电泳的种类很多,仅以支持物的差别可以分为纸上电泳、醋酸纤维素薄膜(简称醋纤膜)电泳、琼脂电泳、琼脂糖电泳、淀粉     

检测病菌的一种新方法：—DNA探针技术

DNA 探针(又称基因探针或核酸探针)是指能识别被检核酸中特异性碱基序列的带有标记的一小段单链 DNA(或RNA)分子,即一个可与被检测的核酸序列进行互补的带有标记的单股核酸片     

转移电泳技术

转移电泳技术是Southen于1975年最先报道,并首先应用于DNA片段的研究。其基本原理是将琼脂糖凝胶电泳得到的核酸谱带直接转移到硝酸纤维素滤膜上,利用两条核酸单链之间的同源性进行分子杂交等各种研究。近年来,此项技术又扩展到对蛋白质     

鹅血液基因组DNA的简单快速提取方法研究

本研究针对家禽血液红细胞有细胞核的特点,研究适合鹅血液基因组DNA的廉价、简便、快速的DNA提取方法,并为其它禽(鸟)类相关操作提供参考。通过裂解细胞,利用简便快速的操作方法将蛋白质和核酸分离,去除杂质,沉淀核酸,获得大量基因组DNA,并通过基因扩增检测其质量和效果。该方法提取的基因组DNA电泳检测条带明量,无拖尾,含量及纯度均较高,能够用于分子生物学实验研究。与传统的酚-氯仿DNA抽提方法相比,本实验建立的血液基因组DNA提取方法具有成本低、操作步骤简便和快速的特点,特别是对大量样品的提取更为实用。     

核酸探针

Waston-Criek的DNA双螺旋构型、DNA的变性与复性性质以及酶学研究的进展、为70年代研制核酸探针铺平了道路。核酸探针是一类新技术的探测手段。它实际上是标记有示迹物质或具有特异性质的RNA或DNA片段。根据核酸双链分子中具有硷基配对的氢键在解链温度或条件下,可将双链解离为单链,而单链探针又能与另     

胶体银在治疗母牛乳腺炎上的应用

实验确认，胶体银（含有70％银和30％蛋白质）：具有收敛、消炎和抗微生物的作用。应用胶体银适Z喧浓度可排除形成抗银离子的条件病原性菌株。为EE了保证在乳腺组织中银离子必须的杀菌浓度，可主：动脉内注射用等渗氯化钠溶液制备的1％胶体银溶胶fiX）Ytll。在注射1次制剂以后，患病器官组织中需ZZ要的银浓度必须保持2昼夜，因此可以在48小时以，后再注射制剂。临床、血液学、生化检查表明，胶体ZE银对动物机体没有毒性作用。当脉管内注射时，制EE剂的蛋白质成分能增强抗体的产生，提高非特异性：5免疫性，血清中正常抗体、血液杀菌活…     

副猪嗜血杆菌脂多糖的提取、鉴定及初步应用

为建立一种有效提取高纯度副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)的方法,进一步阐明HPS的致病机制,通过热酚水法提取LPS,浓缩后,采用酶解法和超离法纯化提取物,分别用硫酸-苯酚法、BCA法、紫外分光光度法,测定LPS提取物中多糖、蛋白及核酸的含量,通过SDSPAGE电泳银染方法鉴定提取物。将提取的LPS作用于猪肺泡巨噬细胞,通过荧光定量方法检测IL-1β的表达量差异。结果显示:纯化的LPS平均产率为2.56%;LPS提取物中不含还原性单糖,多糖含量为3.27%,蛋白含量为0.77%,核酸含量为0.90%;提取的LPS能够引起猪肺泡巨噬细胞IL-1β表达量显著上调。因此,通过该方法提取纯化的LPS可以用于HPS与宿主细胞间作用机制的研究。     

凡纳滨对虾血细胞蛋白制备及其双向电泳体系的建立

为建立凡纳滨对虾血细胞蛋白质的双向电泳体系,实验将凡纳滨对虾血细胞蛋白质提取后,用双向电泳技术(2-DE)分离蛋白质,分别对蛋白质样品的制备方法、不同pH值范围IPG胶条、上样量等关键因素进行了探索和优化。结果显示,采用裂解液裂解-10%TCA/丙酮沉淀法制备蛋白质样品,使用17 cm pH值5~8的IPG胶条进行第一向等电聚焦电泳,第二向SDS-PAGE电泳采用浓度为12.5%的凝胶进行,上样量为每胶条200μg蛋白,第二向电泳后的凝胶采用硝酸银染色,扫描得到的凡纳滨对虾血细胞蛋白质双向电泳图谱蛋白质分离程度好、蛋白点清晰、分辨率高、横纹少等优点。文章建立并优化了凡纳滨对虾血细胞蛋白质组学的双向电泳技术体系,为进一步开展对虾等甲壳动物的蛋白质组学研究奠定了基础。研究表明,该双向电泳体系适用于凡纳滨对虾血细胞蛋白质的分离,可用于后续凡纳滨对虾血细胞蛋白质组学的研究。     

犬冠状病毒BEI灭活苗的制备与免疫试验

烷化剂类灭活剂是一类含烷基分子去一个氢原子 ( Cn H2 n 1)化合物 ,它能与另一种化合物作用 ,将烷基引入形成烷基取代物 ,根据其结构可分为氮芥类、乙烯亚胺类和磺酸脂类。这类化合物的化学性质活泼 ,其灭活机制主要在于烷化 DNA分子中的鸟嘌呤或腺嘌呤 ,引起单链断裂、双螺旋键交联 ,妨碍RNA的合成 ,从而抑制细胞分裂。另外 ,也可与微生物的酶系统和核酸蛋白起作用 ,干扰核酸的代谢 ,因此 ,这类灭活剂能破坏病毒的核酸 ,使其完全丧失感染力 ,但并不损害其蛋白质衣壳 ,得以保留其保护性抗原 ,故是制备灭活病毒疫苗较好的灭活剂。据报道…     

变性梯度凝胶电泳技术及其在动物肠道菌群研究中的应用

变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)技术是一种新型的用于检测核酸变异和点突变的电泳方法,主要根据突变型和野生型核酸序列的不同而导致其变性浓度的差异,从而利用变性梯度胶进行分离,可用于肠道菌群结构多样性和种群动态变化的研究。文章对DGGE技术的原理、在肠道菌群多样性和动态性的应用、局限性及发展前景及上综述。     

牛器官和组织内的核酸及其与经济种用性能的相互关系

核酸直接参与与最终畜产品(乳蛋白和肌蛋白)有关的蛋白质合成。胞核染色体的遗传信息在个体发生上变化很小,在环境因素影响下变化则很大。通常认为,高水平RNA或与高强度蛋白质合成相符或位于其前。因此血液和器官的核酸含量测定方法引起了科研人员的注意,开展了利用这些方法评定农畜经济种     

家鸡血浆蛋白质(酶)同种异型的研究状况

<正> 同一物种(品种)个体中,功能相同的蛋白质(酶)存在两种或两种以上遗传变异体的现象称为蛋白质(酶)的同种导型或称蛋白质多态现象(多态性)(Protein polymorphism)。国外许多学者采用Smithies氏(1955)电泳法对鸡血浆蛋白和卵蛋白等进行了广泛的研究,报道亦不少。可是,国内对家鸡血浆蛋白质同     

羟基类及氨基类蛋氨酸简介

蛋白质是生命的重要物质基础,蛋白质和核酸是构成一切细胞的重要成分。动物在生长发育、新陈代谢、繁殖传代过程中,需要大量蛋白质来满足细胞组织的更新补修等要求。蛋白质是不能用其他种类的养分代替的极其主要的养分之一。蛋白质的主要成分是氨基酸。常见的氨基酸有20多种。某些种类和数目固定的氨基酸,按着特定的顺序连结而构成某种生理需要的蛋白质。一个氨基酸分子中的氨基(-NH_2)与另一个氨基酸分子中的羧基(-COOH)相结合,并释放出一个水分子(H_2O)形成一个肽键,很多肽键(50～1000个)就将氨基酸结合成了蛋白质的大分子。     

DGGE技术在瘤胃微生物多态性研究中的应用

利用传统的方法很难鉴别瘤胃微生物的差异,变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术就很好地解决了该问题.DGGE是一种新型的用于检测核酸变异和点突变的电泳方法,具有可靠性强、重现性高、方便快捷等优点,可应用于瘤胃微生物群落多样性和动态性分析.     

用酶切和Southern杂交鉴定兔出血症病毒核酸型

本研究组在以往的许多实验中证明,兔出血症病毒(RHDV)基因组为单股、线状DNA,但迄今仍有RHDV基因组为RNA的报道。为此,我们用酶切和Southern杂交进一步对RHDV核酸进行鉴定。取电泳纯RHDV核酸,分别用DNase和无DNase的RNase处理,与禾处理的RHDV核酸一起作琼脂糖电泳。结果,未处理的和用RNase处理的RHDV核酸均在7.0kb处出现一条清晰的核酸带;用DNase处理的RHDV核酸则被完全降解,而不出现带。将此凝胶     

原位杂交组织化学技术中信号扩增的研究进展

原位杂交组织化学(ISHH)技术是利用两条互补单链之间通过核酸分子碱基的氢键配对反应形成杂交体,然后再应用与标记物相应的检测系统,通过组织化学方法,在核酸原有的位置上把它显示出来。目前它已是一种比较成熟的技术,因其能对核酸进行原位检测而得到广泛的应用。ISHH的种类很多,其方法的改进主要在于检测信号提高上目前用于信号扩增的方法主要有原位PCR侧链系统、酪胺信号放大、催化报告分子沉淀、尾探针原位杂交和原位引物延伸标记这些方法的建立,不同程度的提高了信噪比使ISSH的灵敏性增加并得到广泛的应用。     

应用~(32)P标记核酸探针检测牛传染性鼻气管炎病毒的研究初报

本文在我国首次报道应用核酸探针检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)。经培养、纯化IBRV,抽提IBRV全基因组DNA,用缺口翻译法标记上~(32)P,在硝酸纤维膜上进行打点杂交。试验结果表明,采用~(32)P标记的核酸探针,可检测出10Pg的IBRV—DNA,能明显区别IBRV感染细胞和未感染的正常细胞,具有相当高的灵敏度和特异性,同Dorman报道的结果相似。 应用核酸探针检测病毒核酸的技术,近年来有了突破性的进展,有的国外学者称之为第四代检测技术。其基本原理是利用放射性同位素标记的DNA或RNA(即核酸探针)与固定在硝基纤维素膜上或玻片上的单链核酸进行杂交,经过放射自显影,在X光片或感光乳胶中可看到特定的核酸片段的踪迹。由于这一技术具有灵敏度高,特异性强的优点,在医学临床诊断中已显示出它的优越性,文献报道日趋见多。在动物病毒研究方面已见到了用核酸探针检测蓝舌病,牛传染性鼻气管炎鸡马立克病,猪伪狂犬病、犬瘟热、传染性喉气管炎等病毒感染的报道。 Dorman,M,A在1985年首先报道了利用生物素标记的IBRV—DNA的HindⅢ酶切片段可检测出10pg(10~(-11)g)IBRV—DNA。随后,Dunn,D.C和Pacciarini,L以及Brunner,D也相继作了报道。我们用~(32)P标记的IBRV—DNA全基因组做为核酸探针,进行了一系列的研究,初步结果表明,我们     

鲤春病毒血症病毒核酸适配体的筛选及分析

核酸适配体(Aptamer)是一类单链短DNA或RNA片段,具有一定的空间结构,对特定靶分子具有亲和力。本研究采用指数富集配体系统进化技术(SELEX),首次筛选出针对鲤春病毒血症病毒(SVCV)的核酸适配体A2和A15,经过荧光PCR、凝胶阻滞和病毒中和实验,证明了其对SVCV具有结合力和抑制作用,在该病的检测和防治方面具有良好的前景。