大熊猫犬瘟热病毒（CDV-PA-1421株）微载体悬浮培养工艺研究

根据正交试验对大熊猫犬瘟热病毒(CDV-PA-1421株)在生物反应器中的培养工艺进行优化，确定关键技术参数。结果表明，大熊猫犬瘟热病毒悬浮培养最佳组合条件为：Vero细胞长成单层后，接种到生物反应器，细胞接种浓度为0.2×10⁶/mL~0.4×10⁶/mL，微载体浓度为8.0 g/L，加入MSVP培养基至工作体积。按0.01～0.1 感染复数(MOI)接种病毒，在37 ℃ pH7.2条件下培养96~120 h，细胞病变(CPE)达70%～80%时收获病毒上清液，即可获得高滴度病毒液。3批培养结果显示病毒培养工艺稳定，收获液病毒含量均在10^7.0～10^7.5 TCID50/0.1mL之间。     

猪圆环病毒2型在转管微载体培养PK-15细胞中增殖动态

为提高猪圆环病毒2型(PCV2)的增殖规模及单位体积内的病毒滴度,本研究利用转管微型反应器,采用荧光定量PCR检测方法,对PCV2在PK-15细胞中复制特性和增殖动态进行了系统研究。结果显示,转管(内置0.6 g纸片载体)中接种约2.98×107个DF-1细胞,培养7 d细胞增至1.93×108~2.0×108个,并确定培养7 d时为最佳接毒时间;病毒的最佳接种剂量为120.8 MOI,最佳收毒时间为接毒后的100 h,可达5.53E+06以上。细胞数增长与糖耗间呈明显平行关系,在细胞生长期内(168 h)平均每个细胞耗糖量为3.09×10-8g/24 h,可以根据糖耗量的多少推测细胞生长状态和数量。相同培养液中利用转管微型反应器培养PK-15细胞生产PCV2最终获得的病毒液毒价比转瓶培养毒价提高1.65倍。本实验为PCV2在生物反应器中大规模培养提供了参考依据。     

微载体悬浮培养ST细胞增殖猪瘟兔化弱毒的工艺研究

从细胞接种密度、病毒接毒量、培养基三个方面进行研究和优化,并进行放大培养,建立了猪瘟病毒的微载体悬浮培养工艺:细胞接种密度为每个微载体15个细胞,病毒接毒量0.05 MOI,采用DMEM/F12培养基进行培养和细胞消化瓶批式消化分散细胞,培养的细胞可以完成生物反应器10 L到50 L的放大,培养的病毒含量达到7.6 l...     

ST细胞全悬浮培养的驯化及其培养伪狂犬病毒的工艺研究

将Siat7e基因转染ST细胞,筛选,驯化得到一株可悬浮培养的ST细胞株,此株细胞能够稳定连续传代,适应无血清、高密度培养,最高密度可达6×10⁶/mL,从摇瓶放大至生物反应器,生长稳定;采用驯化的全悬浮ST细胞培养伪狂犬病毒,从接毒时细胞密度、接毒量、收获时间三个方面优化了伪狂犬病毒的培养参数,确定接毒时细胞密度为2.0×10⁶/mL~3.0×10⁶/mL,接毒量为0.1 MOI~1 MOI,收毒时间为接毒后24 h~36 h。经过50 L生物反应器3个批次的工艺验证,培养的病毒含量均不低于109.0TCID50/mL,说明驯化的ST全悬浮细胞适合伪狂犬病毒的培养。     

BHK-21细胞规模化培养鸡新城疫病毒工艺的研究和初步应用

为了实现鸡新城疫病毒HN2018株(基因Ⅶ型)在乳仓鼠肾(BHK-21)细胞上的无血清规模化培养，本试验采用悬浮培养技术驯化和筛选了1株能够稳定传代的BHK-21-xh悬浮细胞株；使用该细胞以初始密度为100×10⁴个/mL接种摇瓶进行培养，并对摇瓶培养鸡新城疫病毒HN2018株的接毒细胞密度、培养温度、接毒量、收毒时间等工艺参数进行摸索和优化；利用摇瓶优化的病毒培养工艺，在10和100 L生物反应器中逐级放大培养BHK-21-xh悬浮细胞，接种鸡新城疫病毒；采用生物反应器悬浮培养的鸡新城疫病毒HN2018株细胞毒与鸡胚毒分别制备成灭活疫苗，免疫SPF鸡进行免疫效力的比较。结果显示，在摇瓶中培养72 h细胞密度均不低于800×10⁴个/mL,细胞活率均不低于96%;按照BHK-21-xh细胞密度不低于800×10⁴个/mL,病毒感染复数(MOI)为0.216进行接毒，同时添加终浓度为20μg/mL的胰蛋白酶，于35℃温度条件下培养64～72 h收获病毒液，鸡新城疫悬浮培养细胞毒红细胞凝集(HA)效价最高能够达到10log...     

犬细小病毒悬浮培养工艺研究

研究旨在证明犬细小病毒(CPV)悬浮培养的可能性,提高CPV P6株抗原的病毒含量,降低转瓶生产不同批次间疫苗质量差异,生产质量稳定的疫苗产品。试验利用大孔的纤维编织物BioNOCⅡ型微载体所提供的巨大表面积,实现Vero细胞高密度培养,建立了Tide-cell生物反应器大规模培养CPV P6株抗原制备工艺。结果显示：生物反应器Tide-cell载体罐内接入1.0×10¹⁰个F81种子细胞,在优化的参数条件下培养,用RPMI 1640培养液经过96 h培养,细胞总数为1.0×10¹¹个;在葡萄糖消耗量约为5 g/(L·h)时,按照病毒感染复数(MOI)=0.02将生产种毒CPV P6株接入Tide-cell微载体细胞培养瓶内,补加含8%血清的RPMI 1640病毒维持液至50 L,调整pH值为7.2～7.3,培养48 h收获,病毒含量至少为10^7.43 TCID50/mL。     

猪乙型脑炎病毒转瓶培养工艺的研究

为了确定猪乙型脑炎病毒转瓶中培养的关键技术参数,对猪乙型脑炎病毒(SA14-14-2株)转瓶培养工艺进行研究,试验以Vero细胞、3 L转瓶培养病毒,通过对接种时间、接毒量、吸附时间、吸附温度、维持液pH值、维持培养温度、培养时间、维持液血清浓度和转瓶机转速9个条件的优化,将繁殖的病毒液冻融一次,采用病毒蚀斑数测定方法测定繁殖病毒效价。结果表明:用3 L转瓶进行培养,将Vero细胞培养至72～96 h进行病毒接种,接种量为1 200万pfu/mL的毒液3 mL,病毒吸附温度为37℃,吸附时间为60 min,吸附后用pH值为7.8、含2%胎牛血清的维持液继续培养,35℃、12 r/h旋转培养至96 h后收获毒液,冻融一次,可获得较高的效价(不低于1×10~7 pfu/mL)。说明上述条件可应用于猪Ⅰ型脑炎病毒的转移培养。     

PK-15细胞微载体悬浮培养及PCV2增殖工艺研究

研究表明,PCV2仅在PK15等少数哺乳动物细胞上增殖,但由于PCV2毒力弱,且不产生细胞病变,获得高滴度病毒难度较大~([1])。因此,PCV2的培养滴度高低已成为制约现有疫苗质量的关键瓶颈之一。为建立在生物反应器内微载体逐级放大培养PK-15细胞和增殖PCV2技术,本研究以德国Sartorius14 L生物反应器微载体悬浮培养PK-15细胞,对PK-15细胞初始接种密度、搅拌转速、微载体浓度、PCV2接毒时间、接毒剂量、收毒时间等工艺参数进行了摸索和优化~([2-3])。结果表明:3 g/L的微载体和60 r/min的搅拌转速下,采用0.5×10~6cells/mL的初始接种密度操作工艺可获得最佳PK-15细胞生长效能。细胞生长后6 h接毒,采用感染复数(MOI)为0.5的接毒比例,细胞接毒后在微载体上生长96 h可获得最高的PCV2增殖滴度10~(8.5)TCID_(50)/mL,利用该工艺,经过消化转移将PK-15细胞从14 L反应器放大至42 L反应器,微载体上细胞贴附均匀、生长旺盛,42 L反应器中培养72 h细胞密度可达39.0×10~5 cells/mL,病毒滴度10~(8.3)TCID_(50)/mL,应用生物反应器培养PCV2滴度较常规转瓶培养工艺提高了近10倍。进一步表明PCV2悬浮培养放大与接毒工艺稳定,为下一步实现工业级规模化生产奠定基础。     

不同MDCK单克隆细胞株对H5亚型禽流感病毒增殖条件和放大工艺的研究

为了解H5亚型禽流感病毒rFJ56株在MDCK全悬浮细胞上的增殖规律,确定100 L生物反应器工艺的最适接毒量和收获时间,对H5亚型禽流感病毒rFJ56株敏感的MDCK全悬浮细胞进行单克隆筛选和全悬浮驯化,筛选出对该毒株最敏感的MDCK单克隆细胞株;在摇瓶工艺的基础上,将该细胞在100 L生物反应器中接种H5亚型禽流感病毒rFJ56株,检测接种后不同时间病毒HA效价和病毒滴度(EID_(50)),确定最适接毒量和收获时间。共筛选出22株MDCK全悬浮细胞单克隆细胞株,其中5株对H5亚型禽流感病毒rFJ56株最敏感,接种后病毒HA效价均可达到9 log2;对MDCK单克隆细胞株按0.01%体积比接种H5亚型禽流感病毒rFJ56株,在100 L生物反应器中培养60 h,HA效价可达10 log2,病毒含量可达10~(8.17)EID_(50)/0.1 mL,可为H5亚型禽流感病毒无血清全悬浮培养放大工艺提供参考。     

猫瘟热诊断及免疫的研究——Ⅳ.猫源与貂源细小病毒静置培养与转瓶培养比较试验

利用 NLFK 细胞通过静置培养与转瓶培养作猫泛白细胞减少症病毒(FPLV)和水貂肠炎病毒(MEV)增殖培养比较表明:(1)NLFK 细胞株生命力强,单层长成时间较短,繁殖速度较快.适用于转瓶培养;(2)无论FPLV 或 MEV 均可利用 NLFK 细胞进行转瓶增殖培养,而且转瓶培养毒液的 HA 价比静置培养毒高出3～4个滴度;(3)无论 FPLV 或 MEV 在 NLFK 细胞增殖培养时,都可作两次增殖培养收获,其二次收获的 HA 价并不比一收的低。由此可见,转瓶培养法对猫源或貂源细小病毒疫苗生产都是适用的.     

不同培养基对小鼠胚胎干细胞培养的影响

探讨了培养基中各组成(基础培养基、添加物、血清)对小鼠胚胎干细胞(ES细胞)培养的影响.结果如下:GMEM与DMEM这2种基本培养基在对ES细胞维持培养上差异不显著.GMEM 18%血清 4mmol/L谷氨酰胺 0.1mmol/L非必需氨基酸、DMEM 18%血清 4mmol/L谷氨酰胺 0.1mmol/L非必需氨基酸以及DMEM 18%血清,这3种培养基都有较好的对ES细胞维持培养能力.在培养基中不需要额外添加谷氨酰胺和非必需氨基酸.血清浓度会直接影响ES细胞培养效果,应使用18%的优质血清.     

Use of blood culture medium enrichment for synovial fluid culture in horses: A comparison of different culture methods

Reasons for performing study: Standard methods for culturing equine synovial fluid (SF) are often unrewarding. Evidence‐based information on the relative efficiency of different systems used for optimisation of isolation of microorganisms from equine SF is lacking. Objectives: To compare the results of different culture systems performed in parallel on SF samples from horses clinically diagnosed with synovial sepsis. Methods: Synovial fluid specimens were collected between February 2007 and October 2008 from all horses admitted to a referral hospital that were clinically diagnosed with synovial sepsis and from control horses. Synovial fluid samples were cultured in parallel by: 1) direct agar culture (DA); agar culture after: 2) lysis‐centrifugation pretreatment (LC); 3) conventional enrichment (CE); 4) combined LC/CE; or 5) blood culture medium enrichment using an automated system (BACTEC 9050). Results: Ninety SF samples from 82 horses were included, together with 40 control samples. Seventy‐one of 90 samples (79%) were culture‐positive by using blood culture medium enrichment (BACTEC), which was significantly higher compared to all other methods. BACTEC enrichment was never negative while any of the other methods was positive. Although agar culture following LC and/or CE resulted in a slightly higher number of positive samples compared to DA, this difference was not significant. All control samples were culture negative by the 5 different techniques. Although the majority of samples containing isolates recovered without enrichment, culture results after BACTEC enrichment were available on the same day as for agar culture with or without LC (19/23 samples), while CE postponed recovery by at least one day in 20/23 samples. Conclusion: Blood culture medium enrichment is superior to other techniques for isolation of bacteria from SF of horses. The use of an automated system allows enrichment without substantially postponing recovery of microorganisms. Potential relevance: The efficient and fast isolation of microorganisms from infected SF by the BACTEC system allows for rapid susceptibility testing and a more appropriate antibiotic treatment.     

草原文化是华夏文化的活泼元素

游牧是草原文化的基本元素。保存草原文化,就要给游牧以适当的地位。游牧是人类最早的仿生学,其合理内核可为农业现代化作贡献,不可一概视为落后而废除。草原文化从徒步游牧到骑马游牧,是一大进步,对人类文化的沟通交融作出了的重大贡献。一旦草原文化与农耕文化融合,发生系统耦合效应,将产生生态的、经济的巨大变革,从而导致文化的飞跃。我们不妨称为‘文化造山运动’。草原文化在华夏文化发展史中始终是活泼元素。人类文明将离不开草原文化的支撑。     

培养基不同制造工艺对细菌培养效果的影响

用传统工艺和改进工艺制备培养基,进行大肠杆菌的培养,比较不同制备工艺对细菌培养效果。结果：在其他培养条件相同情况下,用传统工艺制备培养基培养三批大肠杆菌,其活菌数分别是4.6×10^5、5.2×10^5、3.9×10^5;平均4.57×10^5。用改进工艺制备培养基培养三批大肠杆菌,其活菌数分别是8.2×10^5、8.6×10^5、8.0×10^5;平均8.27×10^5。后者比前者增加活菌数3.7×10^5。     

论草文化

从古至今、从国内到国外论述了草文化的起源、发展历史与过程,阐述了草与人类社会发展的密切关系.文献资料表明,中国在先秦时代就出现了草文化,在唐宋时代锦上添花,如今更是丰富多彩了.丝绸之路是草原文化与中原文化、中国文化与外国文化交流的纽带.草文化和草原文化在一代一代的劳动人民中流传下来,并得以发扬光大.草文化无国界,世界各地都能找到丰富多彩的草文化,草和草文化早已成为人们生活中不可缺少的一部分.     

不同活性炭对罗汉果快繁生根的影响

本试验研究不同培养基B5、1/2 B5、MS、1/2 MS以及不同类型、不同浓度活性炭对罗汉果快繁生根的影响。结果表明：不添加活性炭的情况下,四种不同培养基中生根率最高的培养基为B5培养基,生根率为70%,且生根数最多,平均根长最长;粗、细两种活性炭均对罗汉果生根有促进作用,但细活性炭培养基诱导的根更长。在不同类型以及不同浓度活性炭的培养基中生根率最高的为细活性炭1.0 g/L的B5培养基和粗活性炭1.0 g/L的B5培养基,但细活性炭1.0 g/L的B5培养基生根数量和平均根长显著高于(P<0.05)后者。因此,较为适宜的生根培养基配方为：细活性炭1.0g/L,培养基为B5。     

肉鹅的科学养殖

一、雏鹅饲养 雏鹅是指从出壳到4周龄的小鹅.雏鹅体温调节机能尚未健全,对外界环境变化适应能力差,对饲料消化能力较差;新陈代谢旺盛,生长发育快.雏鹅的饲养,要以保证营养需要,提高成活率为主要目标.     

企业交化的价值何在

[编者按]有一句话:"小企业看老板,中企业看制度,大企业看文化."企业文化是企业生存与发展的灵魂,这种文化的力量引导企业成员的思想,从根本上成就品牌的差异化,这种独特的竞争力也恰恰是任何竞争对手都无法模仿的.     

裕固族的草原游牧文化(Ⅱ)——裕固族的草原生产

研究裕固族的生产文化对保护祁连山生态环境、促进少数民族地区经济发展具有十分重要的意义。通过查阅资料表明:裕固族是一个古老的游牧民族。传统上以畜牧业生产为主,狩猎采集和农耕为辅。最早主要生活在阿尔泰山和额尔齐斯河以北的草原上,游牧于中北亚地区及中国西北的许多地方。14世纪中叶到16世纪由于瘟疫流行、战火连绵、自然灾害频繁迫使裕固族的先民们向东迁,一部分聚居在祁连山北麓的山区草原上经营畜牧业。而另一部分聚居在河西走廊的戈壁绿洲经营农业。裕固族有自己的民族传统手工业。