小亚璃眼蜱、亚洲璃眼蜱和残缘璃眼蜱的分子生物学鉴定

本研究旨在建立小亚璃眼蜱、亚洲璃眼蜱和残缘璃眼蜱的分子生物学鉴定方法,并探讨它们的系统发生关系。在新疆、内蒙古从动物体表采集寄生蜱,形态学鉴定后,PCR扩增测序获得3种璃眼蜱的16S rRNA及线粒体色素氧化酶亚基Ⅰ基因(cytochrome oxidaseⅠ,COⅠ)序列后进行同源性分析。用Mega 5.0和Mrbayes 3.2软件分别构建系统进化树,亚洲璃眼蜱、小亚璃眼蜱样本16S rRNA序列与GenBank中已知相应蜱虫16S rRNA序列聚类,而残缘璃眼蜱COⅠ序列与GenBank中已知残缘璃眼蜱COⅠ序列聚类,与形态学鉴定结果一致。在传统形态学分类的基础上,结合分子生物学鉴定方法能简易、准确鉴定小亚璃眼蜱、亚洲璃眼蜱和残缘璃眼蜱。     

马来穿山甲源嗜水气单胞菌亚种的分离鉴定及生物学特性分析

为鉴定马来穿山甲(Manis javanica)腿部致病菌并研究其致病性、耐药性和耐药基因,从救护的1只马来穿山甲腿部溃烂处采集样品,无菌分离培养致病菌,进行形态学观察、革兰氏染色及16S rRNA和gyrB基因测序分析,并开展细菌药敏试验和小鼠致病性试验,随后通过PCR扩增6种毒力基因(rtxA、earA、hlyA、alt、act、epa)及19种耐药基因(5种β-内酰胺酶相关基因、6种氨基糖苷类修饰酶基因、6种氯霉素耐药基因、2种磺胺耐药基因)。结果显示:分离的1株优势菌为革兰氏阴性短杆菌,经16S rRNA和gyrB基因测序以及序列进化树分析鉴定为嗜水气单胞菌亚种(Aeromonas dhakensis),其gyrB基因序列与马来西亚分离株高度同源,推测此致病菌可能由非法走私的穿山甲从马来西亚携带至我国。药敏试验显示,其对头孢曲松、头孢克肟、庆大霉素和氧氟沙星等药物敏感,对青霉素、阿莫西林、头孢氨苄、头孢克洛、氯霉素、磺胺甲恶唑、甲氧苄啶和林可霉素耐药。4种耐药基因tem、aac(3)-II、flor、sul2为阳性,与抗生素耐药表型相符。4种毒力基因earA、hlyA、alt、act为阳性,小鼠半数致死量为3.75×10^(6 )CFU/mL。根据药敏结果使用敏感抗菌药物治疗穿山甲,其腿部患处有好转。因此,引起穿山甲腿部溃烂的病原嗜水气单胞菌亚种(Aeromonas dhakensis)可能为国外传入菌株,具有较强的致病性和多重耐药性。本研究为嗜水气单胞菌的流行病学调查及其感染的防治提供了依据。     

巴里坤县双峰驼蜱种类鉴定及其携带病原的检测

为了解巴里坤县双峰驼体表蜱的种类及其携带病原,采集了巴里坤县双峰驼体表寄生蜱样本104只,在形态学分类的基础上,基于蜱的线粒体16S rDNA基因、梨形虫18S r DNA基因和立克次体16S rDNA基因,对48只蜱的DNA样本进行PCR扩增。结果显示,经形态学鉴定,104只蜱均为亚洲璃眼蜱;48个蜱DNA样本经PCR扩增和测序,均鉴定为亚洲璃眼蜱,存在9个基因型,以基因型1(n=24)、基因型2(n=4)和基因型3(n=12)为主要感染基因型,基因型4有2个样本,基因型5～9均有1个样本。48个蜱DNA样本检测出犬埃里克体1份,未发现梨形虫感染。结果表明,巴里坤县双峰驼体表蜱以亚洲璃眼蜱为优势种,存在遗传多样性,并发现亚洲璃眼蜱可携带犬埃里克体。     

警犬查缉走私贩卖珍稀野生动物及其制品的理论探析

一、我国走私贩卖珍稀野生动物及其制品的概况根据海关数据显示,2019年,全国海关立案侦办走私濒危物种案件467起,查获濒危物种1237.6吨,分别增长2.2倍、8.6倍。其中,侦办走私象牙制品案件170起,查获象牙制品9.2吨,分别增长3.5倍、10倍。先后9次精准情报指引马来西亚、越南、新加坡海关查获走私穿山甲鳞片59.78吨、象牙11.04吨、犀牛角90.5千克。     

外来物种海虱在口岸检疫中的筛查及鉴定技术

海虱是一种能感染北半球鲑科鱼类并造成重大经济损失的桡足类的体外寄生虫,近年来我国从挪威大量进口大西洋鲑鱼,自2017年深圳海关不断从进口大西洋鲑鱼体上检测到寄生的海虱,严格筛查并且准确地鉴定这种寄生虫,对于预警我国养殖鲑科鱼被感染的潜在风险至关重要。对收集的海虱样本进行形态学和分子生物学方法鉴定,以期建立快速和准确的鉴定方法。研究发现进口的挪威大西洋鲑鱼感染的海虱有两类,但无明显的形态学差异,一种为鲑疮痂鱼虱(Lepeophtheirus salmonis),另一种为长鱼虱(Caligus elongatus),前者占样本总数的82.42%,后者占样本总数的17.58%。形态学方法难以很好地区别海虱的物种差异,而且只能对成虫鉴定,不能对虫卵和无特定形态的幼虫进行鉴别。试验建立了基于18S rDNA的分子生物学鉴定方法,能够弥补形态学方法的不足,同步筛查和鉴定两类海虱,并且具有灵敏度高的优势。首次报道进口大西洋鲑携带海虱入境的风险,为口岸预警海虱入侵提供了一种实用的快速筛查和鉴定技术方法。     

帕利亚姆病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

本研究拟建立帕利亚姆病毒(Palyam virus, PALV)血清型特异性实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法用于临床样本或媒介中PALV血清型鉴定。根据我国流行PALV毒株的基因节段2序列,设计扩增引物和TaqMan探针,建立PALV血清型特异型qRT-PCR方法,对方法的特异性、灵敏性与重复性进行评估;以我国分离的28株PALV和90份核酸阳性血液样本评估检测方法的可靠性;利用建立的方法对采集库蠓样本中携带的PALV进行血清型鉴定。结果显示,建立的PALV血清型qRT-PCR检测方法具有良好的特异性与灵敏性,可检出核酸拷贝数下限在22至28 copies·μL^-1。对28株PALV的qRT-PCR检测结果与病毒测序鉴定结果一致;对PALV不同感染阶段哨兵动物血液(90份)中的qRT-PCR鉴定结果与分离病毒的血清型鉴定结果一致;建立的方法可准确鉴定库蠓中携带PALV的血清型。本研究建立的PALV血清型qRT-PCR定型方法具有良好的特异强、敏感性与重复性,可用于PALV感染动物与媒介中PALV血清型的鉴定,具有良好的应用价值。     

我国冻品走私情况分析

本文对我国冻品走私现状进行了分析,表明我国冻品走私呈现走私案值大、走私品种多样、来源国家广泛及走私手法繁多等特点。造成我国冻品走私的原因主要是国内外巨大的价格差异、调查取证困难和公众宣传力度不足。针对走私冻品成因,提出了适当调整政策、利用来源国追溯体系对走私源头进行精确打击、成立冻品进口行业协会、建立走私情报收集分析中心和加强冷库管理等五项建议。     

鉴定猪产毒素大肠杆菌多重PCR方法的建立

根据GenBank数据库的基因序列建立了一种快速鉴定仔猪产毒素致病性大肠杆菌 3种常见毒素LTⅠ、STa和VT2e的多重PCR方法。将待检样本接种麦康凯琼脂平板 ,然后挑取单一的红色菌落直接作模板 ,加入预混好的PCR反应液进行PCR即可对产生这 3种毒素的猪大肠杆菌进行鉴定。 3种毒素基因的PCR产物的大小分别是 2 83bp、2 2 1bp和 4 87bp。     

利用多重PCR技术快速鉴定牛性别的研究

为了建立一套简单、快速鉴定性别的方法,试验根据牛的Beta基因及SRY基因,设计2对引物(β-1,2和SRY-1,2),对牛96个牛肉DNA样本进行PCR性别鉴定。结果表明:雄性样品扩增出了300 bp和429 bp 2条片段,而雌性样品只能扩增出300 bp 1条片段。40个牛血液DNA样本鉴定结果与实际性别对比,雄性、雌性准确率均为100%。     

死亡马来穿山甲肠道中细菌的分离培养与鉴定

为了解马来穿山甲病变肠道菌群的组成,本研究通过对一只死亡的马来穿山甲的肠道细菌分别进行接种培养、革兰氏染色及对其16S rRNA基因序列进行PCR扩增等,对穿山甲病变肠道菌群的组成进行鉴定。高通量测序后,共获得有效序列77 441条,8个OUTs,细菌分类归属3门3纲5目6科8属。属含量从高到低分别为变形杆菌属(53.46%)、埃希氏菌属-志贺氏菌属(28.46%)、肠球菌属(17.22%)、假单胞菌属(0.7%)、普罗威登斯菌属(0.07%)、葡萄球菌属(0.05%)、拟杆菌属(0.02%)和乳杆菌属(0.02%)。结合细菌的属性及马来穿山甲病变肠道的症状分析,该马来穿山甲可能因为感染了志贺氏菌属的细菌导致严重的肠道出血而引起死亡。