酶联免疫吸附法测定牛奶中青霉素残留的试验报告

用酶联免疫吸附法对牛奶中残留的青霉素进行了检测,结果得出该方法的最低检出限为2.0μg/L。本方法对牛奶中添加青霉素浓度为2.0～6.0μg/L的检测回收率在65.0%～115.0%范围内,批内变异系数≤14%,批间变异系数小于≤15%。表明该方法可用于青霉素残留量的筛选检测。     

牛奶中氟喹诺酮类药物残留同步快速检测的酶联免疫吸附法研究

建立同时快速检测牛奶中环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、培氟沙星、氧氟沙星和洛美沙星六种氟喹诺酮类药物残留的酶联免疫吸附法。ELISA法的操作在20℃～25℃下进行,以50%抑制浓度、最低检测限反映方法的灵敏度,同时进行加标回收试验。结果表明,本文所建立的ELISA法的最低检测限为1.48μg/L,50%抑制浓度的范围在0.254～0.361μg/L;在环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、培氟沙星、氧氟沙星和洛美沙星药物添加浓度为5、25、50μg/L时的回收率为84.58%～115.92%,批内变异系数均小于15.0%,批间变异系数均小于16.0%。本方法简便快捷,灵敏度、准确度和精密度高,适用于牛奶中FQs残留的同时快速检测。     

ELISA法测定牛奶和鸡肌肉中四环素类药物残留

以本实验室研制的四环素类药物多残留检测试剂盒为基础，建立了牛奶和鸡肉中四环素、土霉素、金霉素药和多西环素的ELISA检测方法。该方法对牛奶和鸡肉中四环素的检测限为7μg／L（μg／kg）左右。在牛奶和鸡肉中，4种四环素类药物100μg／L（μg／kg）浓度的添加回收率范围为43．6％～101．4％，批内变异系数小于25％，批间变异系数在30％以内。牛奶的临界值为39．5μg／L，鸡肉的临界值为35.3μg／kg。     

用于检测牛奶中噻苯咪唑ELISA检测试剂盒的研制

在噻苯咪唑(TBZ)单克隆抗体制备基础上,建立间接竞争酶联免疫吸附法(ELISA)并组装试剂盒。结果表明,试剂盒标准曲线的线性范围为1.0⁸1.0μg/L,回归方程为Y=-2.104 8x+1.038 2(R2=0.999 8),抗体对TBZ 50%的抑制浓度为4.3μg/L;对牛奶中TBZ的最低检测限为40μg/L,牛奶样品的加标回收率范围在75.8%81.0μg/L,回归方程为Y=-2.104 8x+1.038 2(R2=0.999 8),抗体对TBZ 50%的抑制浓度为4.3μg/L;对牛奶中TBZ的最低检测限为40μg/L,牛奶样品的加标回收率范围在75.8%¹04.8%,批内变异系数范围为6.4%104.8%,批内变异系数范围为6.4%¹1.9%,批间变异系数范围为8.2%11.9%,批间变异系数范围为8.2%¹0.0%;TBZ试剂盒(TBZ-Kit)对TBZ特异性良好,并可在210.0%;TBZ试剂盒(TBZ-Kit)对TBZ特异性良好,并可在2⁸℃条件下保存至少360 d。该试剂盒各项指标符合相关技术要求,具有快速、灵敏、专一、稳定的特点。     

鸡肉组织中环丙沙星残留的ELISA与HPLC检测方法比较

利用单克隆抗体间接竞争ELISA方法测定了鸡肉中环丙沙星的残留,同时利用HPLC方法进行了比较分析。间接竞争ELISA法的线性范围为6.25~400μg/L,最低检测限为4.10μg/L。HPLC法的线性范围为0.06~500μg/L,最低检测限为0.06μg/L。在标准品添加量为1.5625×10-4~1.25×10-3g/kg时,ELISA方法的平均回收率为73.81%,批内变异系数为8.75%,HPLC方法平均回收率为80.41%,批内变异系数为1.27%。结果显示,ELISA方法与HPLC方法具有很好的相关性(r2=0.9925),该ELISA方法可用于鸡肉样品中环丙沙星的检测。     

酶联免疫吸附法测定猪尿中莱克多巴胺残留的研究

用酶联免疫吸附法对猪尿中莱克多巴胺进行了残留检测,结果:该方法的最低检测限为0.92μg/L;50%抑制浓度的平均值为2.7μg/L;回收率在(65.2±3.9)%(～86.6±6.1)%,批内变异系数≤17.8%,批间变异系数小于≤15.6%。试验表明该方法可用于莱克多巴胺残留量的筛选检测。     

饲料中己烯雌酚ELISA检测方法的建立

为了建立一种饲料中己烯雌酚(DES)残留的检测方法,试验采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行检测,并对该方法的检测限、准确度、精密度和特异性等参数进行考察。结果表明:本试剂盒的线性工作范围为0.1~8.1μg/kg,IC50浓度为0.417μg/kg,对饲料中DES的检测限为5μg/kg;对饲料样品中DES的添加回收率范围为83%~107%,批内变异系数≤5.7%,批间变异系数≤6.3%;与DES类似物无交叉反应。本研究所建立的ELISA检测方法具有简单、灵敏、准确等特点,适用于饲料中DES残留的快速检测。     

牛奶中氯霉素残留检测方法的研究

对牛奶中氯霉素残留的检测方法进行了研究,试验结果表明:①应用酶联免疫吸附法,牛奶中添加氯霉素标准品的浓度范围为0.45~4.05μg/L时,氯霉素的回收率为53%~115%;用高效液相色谱-串联质谱方法,牛奶中添加氯霉素标准品的浓度范围为0.05~0.20μ/L时,氯霉素的回收率为52%~118%,两种分析方法的技术指标均能达到检测要求。②在本实验中用酶联免疫吸附法对牛奶中的氯霉素残留量进行初筛(ELISA可有效避免假阴性,杜绝假阳性),进一步用高效液相色谱-串联质谱方法进行定量定性分析。两种方法准确可靠,可用于牛奶中氯霉素残留的检测。     

检测动物组织中金刚烷胺残留的酶联免疫试剂盒的研制

通过对金刚烷胺分子结构进行改造,制备得到了金刚烷胺半抗原及人工抗原,免疫动物,制备特异性单克隆抗体。在筛选金刚烷胺单克隆抗体的基础上,建立酶联免疫检测方法,并研制出检测动物组织中金刚烷胺残留的试剂盒。该试剂盒工作范围为0.5~40.5μg/L,线性回归方程为y=-2.069x+0.493,IC_(50)为2.1μg/L,相关系数R2为0.998;试剂盒检测限为0.25μg/kg,金刚烷胺回收率在82.5%~91.0%,批内、批间变异系数均小于10%;与阿莫西林、苯唑西林、头孢噻呋三种类似结构药物均无交叉反应。该试剂盒灵敏度高、检测限低、特异性强、操作简便,可广泛用于动物组织中金刚烷胺残留量的测定。     

高效毛细管电泳检测牛奶中氨苄青霉素和阿莫西林残留方法的建立

建立了高效毛细管电泳同时检测牛奶中残留氨苄青霉素和阿莫西林的方法。牛奶样品采用三氯乙酸溶液沉淀蛋白,在30 mmol/L硼砂缓冲液,pH 7.8,检测波长198 nm,运行电压18 kV,温度25℃的电泳条件下,两种药物完全分离。氨苄青霉素在10μg/mL~100μg/mL的浓度范围内线性良好相关系数为0.998 9,阿莫西林在5μg/mL~100μg/mL的浓度范围内线性良好相关系数为0.999 8。两种药物的平均加标回收率范围为80%~92%,变异系数(CV)范围为3.02%~10.11%。该方法检测牛奶中残留的氨苄青霉素和阿莫西林较为快速、简便。     

直接竞争ELISA检测氯霉素残留的方法建立及初步应用

用混合酸酐法合成氯霉素的CAP抗原,用过碘酸钠氧化法合成CAP酶标记抗原,用ELISA方法对合成的CAP抗原、CAP酶标记抗原进行鉴定表明其与抗CAP单克隆抗体具有特异性反应。在此基础上建立了包被二抗的直接竞争ELISA方法。特异性试验结果表明,CAP琥珀酸酯、CAP琥珀酸钠盐的交叉反应率分别为107%、106.4%;甲砜霉素、氟甲砜霉素与CAP的交叉反应率小于0.016%;与其他结构类似物间未见交叉反应。该方法对CAP的检测限可达到0.1μg/L,IC50为11.6μg/L,线性范围0.1～100μg/L,批内变异系数小于11.5%,批间变异系数小于19.6%。对猪肉、鸡肉、蜂蜜分别添加1.0、3.0、10.0、30.0μg/L CAP标准品,回收率61.0%～102.0%,变异系数为6.6%～15.8%;对猪肉、鸡肉、蜂蜜中CAP的最低检测限分别为0.48、0.42、1.20μg/kg。     

雌二醇残留ELISA检测试剂盒的研制

采用包被单克隆抗体直接竞争ELISA法研制一种检测食品中雌二醇残留的ELISA试剂盒。将不同浓度的雌二醇添加到鸡肉样品中,用制备的试剂盒检测雌二醇残留,结果样品的加标回收率在73.1%～102.7%之间,变异系数<20%。对试剂盒的灵敏度、特异性、精密度、准确度和有效期进行测定,结果表明:研制的试剂盒最低检出限为0.5μg/L;在4℃条件下试剂盒有效期可达6个月。用ELISA试剂盒检测雌二醇残留可批量分析样品,具有快速、简便、灵敏、经济的特点,可广泛应用于食品中雌二醇的监测。     

牛奶中替米考星间接竞争酶联免疫吸附检测法的建立

本研究通过棋盘法优化替米考星抗体、包被原浓度,并考察了最佳包被条件,最佳反应温度、时间和酶标二抗最佳反应时间等,建立了替米考星残留的间接竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)并应用到牛奶样本的检测。建立的间接竞争ELISA方法半数抑制浓度(IC₅₀)为2.1 ng/mL,牛奶中替米考星的最低检测限(LOD)为2 μg/L。在5、10和20 μg/L添加浓度下,回收率为79.2%~90.1%,变异系数不高于9.0%。与其他常见的大环内酯类药物无交叉反应。本研究建立的替米考星间接竞争ELISA方法灵敏度达到了残留限量标准要求,为开发可用于牛奶中替米考星的快速检测试剂盒奠定基础。     

牛奶中氯唑西林残留量的高效液相色谱法测定

为建立高效液相色谱法测定牛奶中氯唑西林残留的方法,牛奶样品用乙腈沉淀蛋白,三氯甲烷反萃取,有机相旋干用流动相溶解,正己烷除脂。0.02mol/L磷酸二氢钾溶液(pH 5.0)-乙腈(68∶32)比例为流动相,C18反相色谱柱分离,紫外检测。结果氯唑西林在15μg/kg～1 000μg/kg范围内呈现良好的线性关系,相关系数大于0.999 0;在15、30、60μg/kg三个添加水平,氯唑西林在牛奶中的平均回收率为70.25%～94.38%,批内变异系数小于8.34%,批间变异系数小于3.52%。方法检出限为5μg/kg,定量限为15μg/kg。表明该检测方法简单、灵敏、可靠,适用于牛奶中氯唑西林残留的分析检测。     

动物源性食品中红霉素残留的ELISA检测

本试验采用间接竞争酶联免疫分析法（ELISA法）测定了动物源性食品中红霉素的残留,结果显示：猪肉、猪肝、牛肉、鱼肉、虾肉、蜂蜜和牛奶中的红霉素检测限分别为4.13、8.23、0.78、3.75、7.94、3.09μg/kg和1.87μg/L,样品添加回收率范围为69.0%~107.5%,批内变异系数为5.7%~11.4%,批间变异系数为8.7%~14.0%;与硫氰酸红霉素的交叉反应率为114%,与琥乙红霉素的交叉反应率为67.4%,与其他药物的交叉反应率均小于0.1%。试验表明,采用ELISA法测定红霉素准确灵敏、重复性好、特异性高,适用于检测动物源性食品中的红霉素残留。     

两种包被方法在克仑特罗ELISA检测试剂盒中应用的比较

通过对50%抑制浓度(IC50)、回收率和变异系数的测定,对比了常规法和微波法包被的酶联板在克仑特罗ELISA检测试剂盒中的应用.检验结果表明:常规法与微波法包被的酶联板的IC50分别为1.08和0.96μg/L,添加1μg/L克仑特罗猪尿的回收率分别为90%和86%.两种方法包被的酶联板的板内变异系数均小于8%,板间变异系数均小于12%.试验证明,在ELISA试验中,微波法包被具有常规法包被相当的应用效果.     

牛奶中苯并咪唑类药物及其代谢物残留的UPLC-MS/MS检测方法研究

建立了牛奶中苯并咪唑类药物及代谢物残留的UPLC-MS/MS检测方法。牛奶样品在弱碱性条件下经乙腈沉淀蛋白后,用乙酸乙酯提取,再经正己烷脱脂,MCX固相萃取柱净化,采用UPLC-MS/MS多反应监测(MRM)模式检测,外标法定量。本方法对苯并咪唑类药物及代谢物的检测限均为5μg/g,定量限均为10μg/g,在10～200μg/L添加浓度范围内回收率为69.9%～113.1%之间,批内变异系数在1.36%～11.48%之间,批间变异系数在1.09%～9.87%之间。本方法分析速度快,灵敏度高,重现性好,各项技术指标均满足国内外相关法规要求,可用于牛奶中苯并咪唑类药物及代谢物残留的检测。     

氯霉素残留检测阻断ELISA试剂盒的研制及性能测定

在建立氯霉素单克隆抗体（CAP mAb）杂交瘤细胞株和阻断ELISA方法的基础上．研制出CAP残留快速检测试剂盒（CAP-kit），并对其性能进行了测定。结果表明，CAP-kit的标准曲线呈典型的S型，符合4参数logit曲线拟合，相关系数R^2=0．9953，检测范围为1．0μg/L～128．0μg/L，灵敏度为0．85μg／L，半数抑制浓度（IC50）为7．54μg/L，检测限为1．0μg/L；牛奶样、猪肉样的平均添加回收率为88．3％、82．5％，平均批内和批间变异系数均〈15％；CAP-kit与氯霉素琥珀酸钠的交叉反应（CR％）为150％，与其它酰胺醇类和抗菌素药物无交叉反应；试剂盒在4℃可保存6个月。     

牛奶中四环素类抗生素放射免疫检测方法验证分析

验证了牛奶中四环素类抗生素残留检测的放射免疫方法。该法检测牛奶中四环素、土霉素、金霉素3种四环素类药物的最低浓度可分别达到30、100、50μg/L,RSD(n=6)均小于3.9%。该方法特异性强,与环丙沙星、链霉素、青霉素G、阿莫西林、磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、红霉素、螺旋霉素无交叉反应。因此,该法能达到检测牛奶中四环素类抗生素残留的要求。     

磺胺二甲基嘧啶残留快速检测阻断ELISA试剂盒的研制及其性能测定

应用磺胺二甲基嘧啶(SM2)单克隆抗体(mAb)成功研制出SM2残留快速检测阻断ELISA试剂盒(SM2-Kit).研究结果表明,SM2-Kit的标准曲线呈典型的S型,相关系数R2=0.9911,符合4参数logit曲线拟合,线性检测范围为0.625μg/L～80μg/L,灵敏度为0.9 μg/L,半数抑制浓度(IC50)为5.82μg/L,检测限为1μg/L;饲料样、猪尿样的平均添加回收率分别为83.4%、89.5%,平均批内和批间变异系数均低于15%;SM2-Kit与磺胺甲基嘧啶的交叉反应率(CR%)为2.08%,与其它磺胺类药几乎没有反应性;基质对SM2-Kit的检测结果影响不大;试剂盒在4℃可保存6个月.