贵州省传染性法氏囊病病毒野毒株核酸乃结构蛋白比较研究

采用氯仿抽提、聚乙二醇沉淀，再经差速离心和蔗糖密度梯度离心，从病变法氏囊组织中提取出较纯的传染性法氏囊病病毒。病毒核酸电泳分析表明，４株ＩＢＤＶ分离株均由双节段ＲＮＡ组成，大小基因片段的电泳迁移率毒株间无差异，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明，ＩＢＤＶ分离株均由４条主要的结构蛋白带组成，近年从免疫鸡群中分离的地方强毒ＪＨ株及引自中监所的Ｉ型强毒Ｊ１Ｃ７株，其主要结构蛋白带与早年分离的ＩＢＤＶ野毒株相似，电     

鸡传染性法氏囊病野毒株的分离鉴定及河北弱毒株培育的研究

从河北省６个地区鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）的鸡群中，分离到６株强毒，均能使易感鸡３６小时发病并死亡，发病率达６０～１００％，死亡率１０～７０％。人工感染鸡能见到与野外病例相同的病变。经血清学试验、鸡胚接种、电镜观察均证明，分离物为传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ），其中有的毒株，毒力非常强。利用其中毒力最强的１株病毒，经鸡胚多次传代培养育成１株免疫原性好，免疫期长，免疫效果容易监测的弱毒株，经野外试验证明，该毒株是防治ＩＢＤ的一个很理想的毒株。     

鸡传染性支气管炎肾型弱毒株J9的免疫原性试验

以不同剂量（１０＾３．８￣１０＾４．９ＴＯＣＩＤ５０／只）的ＩＢ肾型弱毒株９免疫接种１５￣７０日龄ＳＰＦ鸡,然后用部分国内分离的ＩＢＶ肾型强毒株ＨＶ、ＮＢ９０、Ｌ－１、ＪＴ和国外肾型标准强毒株Ｔ攻击。三次试验初步表明,Ｊ９株具有对 强毒株攻击的不同程度的免疫保护作用。     

BWEL-SPF鸡群对鸡传染性法氏囊病强毒的敏感性试验

用三种不同鸡传染性法氏囊病强毒株,对ＢＷＥＬ－ＳＰＦ鸡群１－１０个家系３周龄鸡进行敏感性试验,观察比较鸡群各家系对不同敏感性,测定不同毒株的毒价。广西强毒株（ＩＢＤＶ－ＧＸ株）〈ＬＤ５０为１０＾５．０／０．２ｍｌ;湖南强毒株,ＬＤ５０为１０＾５．２／０．２ｍｌ;吉林强毒株（ＩＢＤＶ－ＪＬ株）,ＬＤ５０为１０＾５．５／０．２ｍｍｌ,以１００ＬＤ５０攻毒剂量,对ＢＷＥＬ－ＳＰＦ鸡１￣１０家系的致死率为     

鸡传染性法氏囊病毒强毒株的分离鉴定

从广州市郊区某鸡群送检的６周龄曾经ＩＢＤＶ免疫的病鸡法氏囊中分离到１株ＩＢＤＶ强毒。该毒株能使鸡胚于接种后３６～７２小时内死亡，易感鸡１００％发病，５０％死亡。电镜观察，该病毒颗粒直径６０ｎｍ左右，无囊膜。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测，病毒核酸有二条ＲＮＡ带。     

传染性法氏囊病超强毒致弱株的一些特性

某些传染性法氏囊病强毒株（ＨＶ－ＩＢＤＶ）通过鸡胚连续传代适应于鸡胚，鸡胚适应的ＨＶ－ＩＢＤＶ成功地在鸡胚成纤维（ＣＥＦ）细胞上生长，表现致细胞病变作用，鸡胚－细胞适应株对实验感染雏鸡的致病性大大降低，无一只死亡，法氏囊病变与标准株的相似，交叉病毒中和试验表明，细胞培养适应与标准株的抗原性有差异，免疫学试验表明，适应株免疫鸡后，对ＨＶ－ＩＢＤＶ强毒感染有很好保护作用，特别是免疫接种后３天攻强毒，适     

鸡传染性法氏囊病病毒野毒株VP2基因高可变区酶切位点分析

参照澳大利亚鸡传染性法氏囊病病毒（ Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ）００２７３ 毒株基因组序列设计的 １ 对引物,位于 Ｖ Ｐ２ 高可变区两端,通过 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ,扩增了 ５ 个 Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ 山东分离株 Ｖ Ｐ２ 基因的 ６０７～１ ０８０ 位核苷酸片段（ａａ２０３～３０６）。 Ｐ Ｃ Ｒ 产物经纯化后,分别用 Ｄｒａ Ⅰ、 Ｓａｃ Ⅰ、 Ｓｓｐ Ⅰ、 Ｐｓｔ Ⅰ和 Ｓａｕ３ Ａ Ｉ共 ５ 种限制性内切酶（ Ｒ Ｅ）进行消化处理,结果 ５ 个分离株均为 Ｄｒａ Ⅰ（－ ）、 Ｓａｃ Ⅰ（－ ）和 Ｓａｕ ３ Ａ Ｉ（＋ ）, Ｌ Ｃ２ 和 Ｔ Ａ 株为 Ｓｓｐ Ⅰ（＋ ）, Ｌ Ｃ１ 和 Ｊ Ｎ 株为 Ｓｓｐ Ⅰ（－ ）, Ｌ Ｃ１ 和 Ｌ Ｃ２ 株为 Ｐｓｔ Ⅰ（＋ ）, Ｊ Ｎ、 Ｌ Ｌ 和 Ｔ Ａ 株为 Ｐｓｔ Ⅰ（－ ）;５ 个分离株的酶切图谱与美国变异株迥异,而 Ｔ Ａ 株与日本超强毒株 ９０１１ 相类似。５ 个分离株与现用疫苗株对比,至少在 Ｖ Ｐ２ 可变区内存在着一定的差异,这可能是 Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ 接种免疫鸡群仍然暴发 Ｉ Ｂ Ｄ 的原因之一。     

河南省鸡传染性法氏囊病病毒株的分离及其某些生物学特性

应用鸡胚培养、电镜观察、血清学试验及病理组织学检查，分离与鉴定了来自河南省鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）免疫鸡群Ｈｅ１、Ｈｅ２、和Ｈｅ３三株ＩＢＤＶ毒株。鸡胚传代试验表明，Ｈｅ１和Ｈｅ２株连续传代到第４代出现规律性死亡和ＩＢＤ病变，而Ｈｅ３株在第１代时鸡胚即全部死亡，且出现ＩＢＤ典型鸡胚病变。Ｈｅ１、Ｈｅ２和Ｈｅ３毒株对易感鸡致病力有一定的差异。病死率分别为２０％、１０％和４０％，多数为弱毒株。免疫保护试验证明，用常规的ＩＢＤＶ血清Ｉ型病毒株Ｂ２疫苗对Ｈｅ１、Ｈｅ２和Ｈｅ３毒株的免疫保护试验，与对照组相比保护率分别为０％、０％和１０％。未死亡扑杀的免疫试验鸡法氏囊有不同程度的病理组织学病变，表明Ｉ型毒株疫苗对ＩＢＤ基本上无免疫保护作用。所分离的毒株可能是ＩＢＤＶ的变异株。     

京—1株鸡马立克氏病强毒对BWEL—SPF鸡群的感染试验

用京－１株鸡马立克氏病（ＭＤ）强毒感染１￣１０个家系１日龄的ＢＷＥＬ－ＳＰＦ鸡,观察比较临床症状和剖检病变及病理切片,以此评估该ＢＷＥＬ－ＳＰＦ鸡群每个家系鸡对京－１株ＭＤ强毒的敏感性。结果,１,５,８,９号家系的ＢＷＥＬ－ＳＰＦ鸡对京－１株ＭＤ强毒最敏感;３,４,５,６,１０号家庭系次之,２、７号家系敏感性相对较差。     

乙型脑炎病毒HW1克隆纯化株的鉴定及外源性污染的鉴定

应用病毒蚀斑技术，将乙型脑炎病毒ＨＷ１株在鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）单层培养上连续挑斑纯化３次，对纯化后的克隆株进行血清学，免疫生物学鉴定及外源性污染检定。毒株对ＢＨＤ－２１细胞感染滴度≥１０＾６．１５ＴＣＩＤ５０；对８－９ｇ小鼠脑内感染的毒力≥１０＾７．１０ＬＤ５０／０．０４ｍＬ；与ＪＥＶＰ３株阳性参考血清的中和指数≥２０００；克隆株对猪有较好的的性，无外源性污染。     

从疑似IBD病鸡的法氏囊组织中分离到1株ARV

从暴发类似传染性法氏囊病（ＩＢＤ）的江苏省某鸡场采集病鸡法氏囊组织制成组织悬液，接种鸡胚卵黄囊，部分鸡胚３～５ｄ死亡，部分鸡胚不死亡但有病变。用感染胚卵黄囊和绒尿膜混合物，接种鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ），盲传３代后，发现以合胞体为特征的细胞病变（ＣＰＥ）。感染细胞做超薄切片电镜观察，可见细胞浆内病毒粒子呈整齐的晶格状排列。用免疫沉淀法提取病毒抽提核酸，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳，可见规律排列的１０条带，呈３－３－１－３排列。与禽呼肠孤病毒（ＡＲＶ）参考毒株Ｓ１１３３株的核酸谱带的数目和位置相同。血清学试验与ＡＲＶ呈阳性反应，与传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）呈阴性反应。证明分离病毒为ＡＲＶ     

乙型脑炎病毒HW_1克隆纯化株的鉴定及外源性污染的检定

应用病毒蚀斑技术，将乙型脑炎病毒（ＪＥＶ）ＨＷ１株在鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）单层培养上连续挑斑纯化３次，对纯化后的克隆株进行血清学、免疫生物学鉴定及外源性污染检定。毒株对ＢＨＫ－２１细胞感染滴度≥１０６．１５ＴＣＩＤ５０；对８～９ｇ小鼠脑内感染的毒力≥１０７．１０ＬＤ５０／０．０４ｍＬ；与ＪＥＶＰ３株阳性参考血清的中和指数≥２０００；克隆株对猪有较好的免疫原性，无外源性污染。     

鸡肾变型传支浙江省野毒株IBVZJ93－91株的致弱研究及免疫试验

从病鸡中分离出肾变型传染性支气管炎强毒株,从中选出免疫原性最佳的毒株ＩＢＶｚｊ９３株,其ＥＩＤ５０≥１０＾－８．７／０．２ｍｌ,研制成单价及与呼吸型、腺胃型传支病毒株相配伍的二价、三价及与ＩＢＤ、ＮＤ、ＥＤＳ等相配伍的二联、三联灭能苗,经对１５４７．７９万羽鸡免疫试验,证明安全、有效。     

犬瘟热病毒强毒株的分离与鉴定

从病死犬肺,肝和淋巴结分离到２株ＣＤＶ,ＣＤＶ９３０３９和ＣＤＶ９３０４１。消除小牛血清中的干扰因素和３３℃培养是分离成功的主要因素,两株病毒均在Ｖｅｒｏ细胞生长良好,传２～４代毒力稳定,ＣＰＥ产生明显,ＴＣＩＤ５０为１０＾－６．５０～１０＾－６．７７,明显高于国内外野毒株和弱毒的毒力效价,人工感染犬死亡率较高,表明该分离株致病力较强,作者推测我国犬群可能存在ＣＤＶ强毒变异株。     

鸡传染性贫血病毒的分离鉴定

在山东省从死亡率达７２％,混合感染多种病原微生物的海兰蛋白鸡和艾维茵肉鸡群中分离到３株鸡贫血病毒（ＣＡＶ）这些毒株耐体积分数５０％氯仿和７０℃水浴１５ｍｉｎ,能在ＭＤＣＣ－ＭＳＢ１的细胞内增殖,用分离的细胞毒接种１日龄ＳＰＦ鸡呈现典型的难传染性贫血特征性的临床症状和病理变化;用间接免疫荧光检查感染的ＭＤＣＣ－ＭＳＢ１细胞涂片和鸡组织触片,可见特异的核内荧光,分离毒株能被ＣＡＶ－ＴＫ５８０３株抗血清     

DNA免疫防制鸡传染性支气管炎的探索研究

ＯＲＦ完整的ＩＢＶ类Ｍ４１株Ｓ１基因ｃＤＮＡ插入真核表达质粒ｐＣＩ ＣＭＶ启动子下游我隆位点，构成ｐＣＩＳ１用于１周龄ＳＰＦ雏鸡的ＤＮＡ免疫试验。试验鸡生疏腿部肌肉注射ｐＣＩＳ１ＤＮＡ１００ｇ，２周后加强免疫一次。二次免疫２周后，代感染ＩＢＶ Ｈ５２株。结果，ＩＢＶ人工感染后第４天气管－泄殖腔棉拭子鸡胚病毒分离阳性者，免疫试验组为１／６，而对照组为６／６，鸡胚病毒中和试验显示，二次免疫后临感染前及     

应用RT—PCR技术扩增禽传染性支气管炎病毒S1基因的研究

选择Ｓ１基因做为目的基因,运用ＲＴ－ＰＣＲ技术分别扩增１２株以非免疫鸡胚繁殖并通过超速离心浓缩的鸡胚尿囊液中的ＩＢＶ,所用引物为ＩＢＶ Ｂｅａｕｄｅｔｔｅ株Ｓ１基因两侧的对应序列,跨幅为１．７２ｋｂ。结果６株ＩＢＶ毒株（ＳＡＩＢ３、Ｆ、Ｄ４１、Ｈ５２、Ｈｏｌｔｅ）扩增出了长约１．７ｋｂ的Ｓ１基因片段,而另６株ＩＢＶ毒株虽经４次ＲＴ－ＰＣＲ重复后也显阴性。用ＨａｅⅢ内切酶对６个毒株的ＲＴ－ＰＣＲ产物     

鸡传染性法氏囊病超强毒LX株的分离鉴定

从一免疫失败鸡场中分离到１株鸡传染性法氏囊病野毒株,命名为ＬＸ株。经血清学、鸡胚接种、病毒形态、外源病毒（ＣＡＡ、ＮＤＶ和ＩＢＶ）排除试验等证实该分离物为纯净的ＩＢＤＶ。人工感染试验表明,该ＬＸ株接种８龄ＳＰＦ鸡后第２天鸡只精神 沉郁,拉白色或绿色粪便,发病率为１００％,第３￣４天出现死亡高峰,而后很少引起死亡,死亡率达９２．３％,剖检可见全身性出血素质,法氏囊呈“紫葡萄样”外观,脾脏肿大,胸腺萎     

鸡传染性支气管炎北京地方株S1基因的克隆与鉴定

利用反转录套式聚合酶链反应技术从北京地区３株鸡性支气管炎病毒（ＩＢＶ）分离株中扩增出１０５４ｂｐＳ１基因高变区。利用限制性内切酶ＳｉｎＩ和ＰｓｔⅠ的酶切位点分析图谱进一步证实了ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ的特异性。将３段Ｓ１基因分别克隆到ＰＵＣ１９质粒中,获得重组质粒ＰＵＣＩＢＶＳ１－ＢＪ１,ＰＵＣＩＢＶＳ１－ＢＪ２和ＰＵＣＩＢＶＳ１－ＢＪ３。     

不同传染性法氏囊病病毒分离株VP2基因部分核酸序列及其编码蛋白的比较

根据已报告的传染性法氏囊病病毒（ Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ） ｃ Ｄ Ｎ Ａ 序列,在病毒 Ｖ Ｐ２ 区域,设计 １ 对引物,并在 ２ 引物上分别加 Ｐｓｔ Ⅰ和 Ｅｃｏ Ｒ Ｉ酶切位点。对 ２ 个 Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ 分离株 Ｊ Ｓ３ 和 Ｊ Ｓ４,用异硫氰酸胍酚氯仿抽提一步法提取病毒 Ｒ Ｎ Ａ,然后进行逆转录和 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增,将扩增片段经酶切纯化后克隆于 ｐ Ｕ Ｃ１８ 质粒载体中,以双脱氧链末端终止法测定 ｃ Ｄ Ｎ Ａ 序列。将测定的分离株与标准对照株（ Ｓ１） Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ Ｖ Ｐ２ 基因片段的核苷酸序列进行计算机分析比较, Ｊ Ｓ３ 与 Ｓ１ 的同源性为 ９７％ , Ｊ Ｓ４ 与 Ｓ１ 的同源性为 ９７％ , Ｊ Ｓ３ 与 Ｊ Ｓ４ 的同源性为 ９９％ 。推导编码蛋白氨基酸序列, Ｊ Ｓ３ 和 Ｓ１ 的同源性为 ９７％ , Ｊ Ｓ４ 与 Ｓ１ 的同源性为 ９６％ , Ｊ Ｓ３ 和 Ｊ Ｓ４ 的同源性为 ９８％ 。这表明在我国流行的 Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ 毒株与标准毒株相比不仅在免疫学反应上有差异,而且在病毒核酸序列上有变异,这种变异是造成疫苗免疫失败或免疫逃避的分子基础。