口蹄疫3ABC蛋白基因的克隆与序列分析的研究

采用RT—PCR扩增FMDV的3ABC蛋白DNA，将其与pUCm—T栽体连接，构建pUCm—3ABC重组质粒，序列分析表明，pUCm—3ABC重组质粒的插入DNA与多种血清型FMDV的相同DNA区段有较高的同源性，提示可进一步用pUCm—3ABC重组质粒研究FMDV3ABC蛋白的表达抗原。     

表达A型口蹄疫病毒衣壳蛋白重组腺病毒的构建

为构建表达A型口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白的重组腺病毒,本研究通过人工合成A型FMDVP1-2A、2B和3C融合基因,将其克隆到腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,利用E.coli BJ5183内同源重组将目的基因插入腺病毒骨架质粒pAdEasy-1中,获得携带A型FMDV P1-2A-2B-3C基因的重组AdEasy-1。该重组质粒经PacⅠ线性化后转染AD-293细胞,获得重组腺病毒rAd-A09。经PCR检测,该重组腺病毒在传代过程中目的基因稳定存在,病毒滴度在第8代时可达到108.5TCID50/mL。间接免疫荧光检测和western blot分析表明,rAd-A09在AD-293细胞中产生FMDV的结构蛋白VP0、VP1和VP3。该重组腺病毒的构建为口蹄疫新型疫苗的研究奠定了基础。     

共表达O型FMDV衣壳蛋白和绿色荧光蛋白重组腺病毒的构建

为构建表达O型口蹄疫病毒(FMDV)的P12A3C基因及GFP基因的重组腺病毒rAdV-P12aEGFP2a3C,本研究以FMDV的2A基因序列为Linker,将报告基因EGFP插入FMDV的P12A与3C之间。重组腺病毒感染HEK-293细胞后可以观察到绿色荧光,表明EGFP蛋白获得表达。应用FMDV的VP2单克隆抗体4B2对重组病毒感染细胞进行western blot检测,反应条带与FMDV衣壳蛋白VP0和VP3的分子量大小相符,表明FMDV的完整衣壳蛋白和3C蛋白酶也均获得表达,而且EGFP的插入并未影响P1蛋白的表达和3C蛋白酶对P1的正确切割。重组腺病毒的生长特性分析表明,EGFP的插入也未影响该重组腺病毒的增殖特性。上述研究结果显示,表达FMDV衣壳蛋白P12A3C的重组腺病毒可以作为载体,以2A蛋白作为Linker表达一个小分子蛋白,为改进以腺病毒为载体的口蹄疫基因工程疫苗提供了新思路。     

O型口蹄疫病毒P1-2A3C基因在家蚕杆状病毒表达系统中的表达

口蹄疫是一种严重危害畜牧业生产的烈性传染病。为了促进O型口蹄疫病毒(FMDV)基因工程活载体疫苗的研制,选取O型FMDV编码序列中的衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因,插入家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中,构建重组载体pVL-P1-2A3C,并与线性化病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕BmN细胞,获得重组病毒Bm-P1-2A3C。将重组病毒感染家蚕5龄幼虫,以双抗体夹心ELISA法和间接血凝方法检测血淋巴中的表达产物:目的蛋白在感染病毒后120 h的蚕血淋巴中表达量最高,抗原表达呈阳性的最大稀释倍数为1∶128。结果显示O型FMDV的P1-2A3C基因已在家蚕体内获得表达。     

鸡白痢沙门菌外膜蛋白C的原核表达与免疫反应性分析

利用PCR方法扩增鸡白痢沙门菌主要抗原外膜蛋白C的基因,将其定向克隆至pET30a(+)原核表达载体,转化大肠杆菌BL21表达菌,利用His标签的蛋白纯化柱纯化重组蛋白,通过免疫印迹检测重组蛋白活性。通过BamHⅠ/HindⅢ双酶切鉴定获得了pET30a-C原核表达重组质粒,转化BL21表达菌后,通过IPTG诱导获得以包涵体形式存在的重组蛋白,重组蛋白纯化后免疫印迹检测显示具有良好的反应原性。本研究为鸡白痢基因工程抗原的制备及诊断试剂研究奠定了基础。     

破伤风毒素C片段基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

应用PCR技术直接从破伤风梭菌64008菌株基因组中扩增出1356bp的破伤风毒素C片段基因，该片段是与靶细胞起结合作用的重链C端基因，经DNA序列测定分析，扩增出的基因与GenBank上登陆的序列AFl54828的同源性达到99．2％。将此基因克隆入大肠杆菌融合表达载体pET-30a（＋），构建成重组表达质粒pET—TetC，并在大肠杆菌Rosetta（DE3）中表达，经SDS—PAGE蛋白电泳鉴定，表达产物约为50000的重组蛋白，其表达量占菌体总蛋白的33．5％，经免疫印迹试验证实该重组蛋白是破伤风毒素C片段抗原。动物试验证明，此重组抗原具有良好的免疫原性，能保护动物免受破伤风毒素的攻击。     

口蹄疫病毒P1 2A和3C基因重组逆转录病毒表达载体的构建

以A型口蹄疫病毒（FMDV）AV88（L）和XJ99株的P12X基因和AV88（L）3C基因的阳性克隆质粒为模板，用PCR扩增各基因片段，酶切后分步定向亚克隆至逆转录病毒表达载体pBABE-puro上经PCR、酶切鉴定及测序。结果表明，获得了2个含不同RGD基序的A型FMDV衣壳蛋白和蛋白酶基因的重组逆转录病毒表达载体pBABE-AV88（L）P1 2X3C和pBABE-XJ99 P1 2X3C，为研究安全、高效、低成本的FMDV空衣壳亚单位疫苗奠定了基础。     

非洲猪瘟病毒K205R蛋白基因原核表达的研究

本研究合成非洲猪瘟的K205R基因,将K205R基因克隆至pET-30c(+)质粒,构建重组原核表达质粒pET30C-K205R。该重组质粒的阅读框架正确,表达的融合蛋白的N端和C端均带6×组氨酸。pET30C-K205R-BL21菌株经培养和诱导表达后,可生产K205R可溶性蛋白,K205R可溶性蛋白可用Ni柱纯化。纯化表达K205R蛋白的ELISA试验证明,表达的K205R蛋白与猪阳性非洲猪瘟血清具有较好的特异性反应。     

新城疫病毒HN蛋白抗原表位分析及结构域基因原核表达

以本实验室构建的含新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶基因重组质粒为模板，设计引物通过PCR和重叠-延伸PCR扩增，获得HNa、HNb和HNa-L-b三种抗原结构域基因片段，BamHⅠ／HindⅢ双酶切定向克隆到原核表达载体pET32c，获得重组质粒分别命名为pET32c—HNa、pET32c-HNb和pET32c．HNa—L—b。重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞BL21，筛选出阳性克隆，诱导表达并取产物进行分析。结果表明，HNa、HNb、HNa-L-b结构域基因片段均获得了融合表达。Western-blotting分析证实表达产物HNa和HNb与NDV阳性血清具有免疫反应性。本试验结果为进一步研究HN蛋白抗原结构域的免疫原性以及HN蛋白与F蛋白在细胞融合中的相互作用奠定了基础。     

口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC基因的原核表达及其产物的活性检测

利用分别带有BamHⅠ和HindⅢ酶切位点的引物扩增出FMDV3ABC基因，将其克隆到pMD18-T载体。经BamHⅠ和SaⅡ酶消化后，克隆到表达载体pGEX-6p-1上，构建重组质粒pGEX-3ABC。将该重组质粒转化到大肠埃希氏菌BL21（DE3）pLysS，经终浓度1mmol／L的IPTG诱导，获得约70ku的融合蛋白GST-3ABC。Western-blotting结果显示，表达的融合蛋白GST-3ABC可以与感染FMDV的牛血清发生免疫反应。以纯化的GsT-3ABC蛋白为抗原的间接ELISA检测结果与以VP2蛋白为抗原的间接ELISA检测结果相比较，表明，融合蛋白GST-3ABC可以用于鉴别感染FMDV和疫苗免疫的牛血清。     

Disease and destiny-mystery and mastery

When early people made their appearance, zoonotic infectious diseases were already waiting, but epidemic diseases did not appear in human history until people began to live in large numbers under conditions of close contact, mainly during the last 10,000 years. Disease has decimated urban populations, conquered armies, and disrupted society. The focus here is on (1) the plague of Athens and the Black Death; (2) smallpox, influenza, and rabies; (3) avian influenza prion diseases, and foot & mouth disease; and (4) emerging and re-emerging diseases. All have veterinary public health associations. In Athens, Greece, in 430 BC, when the Spartans ravaged the countryside, hordes crowded into Athens so that orderly movements, space in which to live, and adequate supplies of food became impossible. Crowding of any population fosters disease transmission; chaos and disorder enhance it all the more. Out of northern Egypt came a terrible plague from across the Mediterranean Sea. The identity of the plague of Athens remains unsure, but the well-considered conclusion is Rift Valley Fever, a mosquito borne, viral zoonosis. The Black Death, also called the Plague, raged in Asia for centuries. In 1347, the Black Death was brought by a ship out of Asia to Sicily. The scenes of devastation were repeated throughout Europe, with 90% or more of the people dying in city after city. Influenza, too, has been a cause of periodic human epidemics, but the great pandemic of influenza occurred in the last months of World War I. In the years of highest occurrence, more than half the world's population became clinically infected. If veterinary public health had been born earlier, it could have led to elucidating the epidemiology of influenza and the plagues of Athens, Europe, and Asia. In turn, smallpox had also caused continual tragedy. In 1796, Edward Jenner began to harvest pustules of cowpox from children or infected cows and inject them into susceptible children. In 1980, the World Health Organization declared that smallpox had been eliminated from the world. Rabies, though, still strikes terror. A number of animal diseases, broadly termed emerging and re-emerging diseases, need surveillance because they have the potential to impact human health. From late in 2003 to 2007, the highly pathogenic H5N1 influenza virus in poultry infected at least 121 people and caused 62 deaths in four countries. The prion diseases, too, all have very high numbers in concentrated contacts. To control these diseases, veterinary public health is essential, with diagnosis, epidemiological surveillance, clinical manifestations, and prevention as primary measures.     

奶牛肢蹄病及其防治

简介常见奶牛肢蹄病种类及其症状,从日粮营养、运动场地面结构、环境卫生、饲养管理、遗传育种、疾病管理等方面简析奶牛肢蹄病的病因,并提出相应的预防措施。     

Foot and mouth disease and bluetongue: differences and similarities

On 26th of july 2007 a new case of bluetongue was notified in the Netherlands and on 2nd of august 2007 foot-and-mouth disease was diagnosed in Surrey, England, which raised the threat of having both infections simultaniously in one area. Bluetongue and foot-and-mouth disease have a different pathogenesis, but symptoms may resemble each other at a later stage of infection. The pathogenesis and possible clinical symptoms of both infections are discussed and illustrated with pictures.     

畜禽物种多样性及其保护和利用

文章就我国畜禽物种多样性资源的现状、保护和利用等方面进行阐述,为生态脆弱的喀斯特地区畜牧业可持续发展提供参考。     

马的咽气癖及其防制措施研究进展

在动物的异常行为中以刻板行为最为常见,而咽气癖又是马最常见的口部刻板行为之一。作者就咽气癖在生理方面和心智方面对马体产生的影响、行为基础、诱因的研究进展及常见的防治措施进行综述。     

德国荷兰畜禽产品质量安全交流与启示

2018年岁末,笔者有幸赴德国和荷兰,就畜产品质量安全控制及检测技术等进行了短期交流,收获颇丰,现具体介绍如下。一、交流情况德国面积35.73万平方千米,人口约8175.2万,是欧盟人口最多的国家,农业发达,机械化程度很高。德国的畜牧业以猪、牛、羊和禽类为主,畜牧业产值占农业生产总值的61%。德国虽然农业比重很小,但却是有机农业运动最早的发起国,也是目前世界上有机农产品生产与消费大国。     

广西芒果主要病虫害及其防治

广西是我国主要的芒果生产基地。随着基地建设的发展,芒果病虫害已成为目前栽培管理的主要问题。为此,在调查、研究的基础了介绍了当前芒果生产中常见的病虫害,并提出了防治措施,以期为生产上提供技术参考。     

国内外蛋氨酸与赖氨酸市场分析与展望

近几年,世界饲用添加剂市场增长较快,预计今后将进一步增长,据世界粮农组织(FAO)首领会议的倡议,到2015年,将使世界营养不良的人口削减一半,其间,肉制品将会以每年2％的速度增长,特别是加快猪肉和禽肉增长。这将促进世界添加剂,尤其是蛋氨酸和赖氨酸需求量的增加。