乳及乳制品中黄曲霉毒素检测技术研究进展

黄曲霉毒素主要由黄曲霉菌和寄生曲霉菌产生的次生代谢产物,物理和化学性质比较稳定,其种类主要包括黄曲霉毒素B1(aflatoxin,AFB₁)、AFB₂、AFG₁、AFG₂、AFM₁和AFM₂,其中AFB₁毒性最强,污染最广,被世界卫生组织国际癌症研究机构确定为Ⅰ类致癌物。奶牛摄入被黄曲霉毒素污染的花生、玉米、稻米、大豆、小麦等饲料后,部分黄曲霉毒素会转化为AFM₁和AFM₂,从而存在于乳及乳制品中。本文比较国内外各国黄曲霉毒素限量标准的差异,汇总目前国内外乳及乳制品中黄曲霉毒素的各项检测技术,阐述近年来主要应用的薄层色谱法、质谱法、光谱法、电化学法、快速检测试纸条法等检测方法,分析各类方法在检测乳及乳制品中黄曲霉毒素方面的优点与存在的问题,并对今后乳及乳制品中黄曲霉毒素检测技术的发展方向做出了预测,旨在为更简便、特异性好、灵敏度高的乳及乳制品中黄曲霉毒素检测技术发展提供思路。     

黄曲霉毒素对肉鸡毒性作用的研究进展

黄曲霉毒素主要是由黄曲真菌和寄生曲真菌产生的一类高毒性次级真菌代谢物质,世界范围内大部分的粮食和动物饲料受到黄曲霉毒素的污染,对动物健康与畜禽养殖业可持续发展构成严重威胁。黄曲霉毒素B₁（aflatoxin B₁,AFB₁）是众多霉菌毒素中常见且毒性较强的一种,过量摄入AFB₁具有致癌、致畸、免疫抑制等毒性效应。大量研究证实AFB₁可对肉鸡的生长、免疫功能、器官发育等方面造成严重影响,威胁家禽业的健康发展。结合国内外研究报道,对黄曲霉毒素的性质、毒性进行概述,从肠道功能障碍、免疫抑制、器官损伤和遗传毒性四个方面阐述AFB₁对肉鸡毒性作用的研究进展,以期为进一步阐明黄曲霉毒素对肉鸡毒性作用的分子机制,同时为减轻黄曲霉毒素对肉鸡养殖造成的危害提供参考。     

黄曲霉毒素B1对肉鸡毒性危害研究进展

黄曲霉毒素B₁(AFB₁)是目前自然界中已知致癌性最强、毒性最大的真菌毒素。AFB₁能够对肉鸡日粮造成污染，从而限制我国肉鸡养殖业的健康发展。现阶段AFB₁对肉鸡毒性危害主要体现为慢性消耗。文章综述了肉鸡的遗传、生理和环境因素对AFB₁毒性的影响以及AFB₁对肉鸡生产性能、免疫系统和组织器官的影响，并对肉鸡生产中常用解毒剂的特点进行总结，为减轻AFB₁对肉鸡的危害提供参考。     

黄曲霉毒素B1对家禽的危害及解毒策略研究进展

黄曲霉毒素是饲料原料中常见的霉菌毒素,这种毒性极强的物质对家禽养殖业危害巨大,可造成机体生长性能下降与免疫抑制,肝脏严重损伤,甚至死亡,其中毒性最强的为黄曲霉毒素B₁(AFB₁)。黄曲霉解毒策略种类繁多,大致可归为物理法、化学法、生物法。物理法和化学法操作简单,但解毒不彻底或引起二次污染;生物法因具有绿色高效的特点,是目前最有前途的解毒策略。本文主要介绍了AFB₁对家禽生长性能、肠道健康和机体免疫的影响以及黄曲霉毒素物理、化学解毒方法和生物解毒机制,以期减少黄曲霉毒素对家禽生产的影响。     

黄曲霉毒素B1致病机制及防治研究进展

黄曲霉毒素(aflatoxins, AFs)是一类来自于霉菌中的剧毒物质, 其中以黄曲霉毒素B₁(aflatoxin B₁, AFB₁)的毒性最强、危害性最大。AFB₁是一种具有强致癌性及剧烈毒性的双呋喃环类毒素, 广泛分布于霉变的玉米、花生、大米和大豆等粮油作物中, 由AFB₁引发的人与动物中毒事件给当前食品安全和畜禽养殖等行业的发展造成了严重危害。AFB₁已被证明能够引起机体氧化应激、细胞凋亡、细胞焦亡、基因突变及免疫系统损伤。作者阐述了AFB₁抑制机体免疫系统、破坏机体免疫耐受性的免疫毒性作用; 介绍了AFB₁促进活性氧生成、激活Nrf2-ARE通路、诱导机体氧化应激和炎症反应进而造成器官损伤的器官毒性作用; 分析了AFB₁利用细胞死亡相关受体调控外源性细胞凋亡作用, 以及通过一系列细胞凋亡相关蛋白诱导内源性细胞凋亡作用, 还可利用肝细胞经典焦亡途径引发炎症反应, 继而引发非正常死亡的细胞毒性作用; 回顾了近年来关于AFB₁基因毒性与其去毒措施的作用机制及其研究进展。本综述有望为针对AFB₁致病机制的深入研究及相关防治药物的研发提供参考, 并为发霉粮油作物的去毒措施的选择提供有效依据。     

吖啶酯偶联单克隆抗体建立化学发光法检测黄曲霉毒素B1

[目的] 建立快速检测黄曲霉毒素B₁（aflatoxin B₁,AFB₁）的方法。[方法] 将吖啶酯（acridinium ester,AE）与AFB₁单克隆抗体进行体外化学合成,分别合成了吖啶酯∶AFB₁单克隆抗体摩尔比为5∶1、10∶1、15∶1、20∶1、25∶1的吖啶酯标记AFB₁单克隆抗体（AFB₁-AE）,分析了不同摩尔比的检测效果,选择吖啶酯∶AFB₁单克隆抗体为25∶1的AFB₁-AE偶联物建立化学发光免疫分析法（chemiluminescence immunoassay,CLIA）。[结果] 获得对应的标准曲线回归方程为：y=-0.245Ln（x）+ 1.578 1,R²=0.985 7,IC₅₀=81.48 pg/mL;对样品进行加标回收实验,加标回收率88.4%~106.0%,变异系数0.92%~2.10%。[结论] 将吖啶酯与AFB₁单克隆抗体体外交联,可建立新的化学发光免疫分析方法。     

广西地区不同饲养模式及不同季节水牛奶霉菌毒素污染状况调查

【目的】 了解广西地区不同饲养模式下不同季节水牛奶霉菌毒素污染状况。【方法】 随机采集2020年10-11月（秋季）和2021年4月（春季）每季3种饲养模式（规模化、养殖合作社或养殖小区、散养）原料水牛奶样品各8个,共计48个样品,利用酶联免疫吸附法（ELISA）测定水牛奶的霉菌毒素（黄曲霉毒素M₁（AFM₁）、赭曲霉毒素A （OTA）、HT-2毒素（HT-2）、T-2毒素（T-2）、α-玉米赤霉烯醇（α-ZEL）、玉米赤霉烯酮（ZEN）和脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON））污染状况。【结果】 在48个样品中,有16个样品（33.33%）检测出AFM₁,养殖合作社或养殖小区模式检出率最高（43.75%）,散养模式检出率最低（18.75%）。检出样品的AFM₁含量均低于中国的国家限量标准0.5 μg/kg,其中2个样品（4.17%）超过欧盟限量标准（0.05 μg/kg）。原料水牛奶中HT-2、T-2、α-ZEL、ZEN和DON的成人每日最大容许摄入量（PMTDI）均远低于联合国粮农组织和世界卫生组织下的食品添加剂联合专家委员（JECFA）设定值,原料水牛奶中OTA的成人每周耐受摄入量（PTWI）也低于JECFA设定值,且OTA含量均低于欧盟限量标准（<2 ng/mL）。与养殖合作社或养殖小区模式相比,散养和规模化模式生产的原料水牛奶中HT-2含量均显著降低（P<0.05）。规模化模式生产的原料水牛奶T-2含量显著低于散养模式（P<0.05）。原料水牛奶中秋季AFM₁平均含量和超欧洲限量标准率高于春季,但春季AFM₁的检出率高于秋季;3种饲养模式中,春秋两季散养模式样品中AFM₁检出率均最低;秋季各养殖模式原料水牛奶中OTA和DON的平均含量均高于春季。【结论】 目前广西地区原料水牛奶质量在安全范围（AFM₁含量低于0.5 μg/kg,HT-2、T-2、α-ZEL、ZEN和DON的成人PMTDI及OTA的成人PTWI均低于JECFA设定值）,但多种霉菌毒素在水牛奶中均有检出,污染风险仍应引起人们的警惕。     

黄曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮联合对奶山羊肠道微生物的影响

为研究黄曲霉毒素B₁（AFB₁）、赭曲霉毒素A（OTA）和玉米赤霉烯酮（ZEN）联合对奶山羊肠道微生物组成及多样性的影响,本研究选取体况相近的健康崂山奶山羊20头,分为5组,每组4头,A组为对照组,饲喂不添加毒素的基础日粮;B、C、D、E组分别在日粮中添加50 μg/kg AFB₁+500 μg/kg ZEN、50 μg/kg AFB₁+100 μg/kg OTA、50 μg/kg AFB₁及50 μg/kg AFB₁+100 μg/kg OTA+500 μg/kg ZEN。预试期7 d,正试期14 d。在试验期第11天采集粪便样品,利用基因组DNA提取试剂盒提取粪便总DNA,对总DNA进行16S rRNA扩增,构建奶山羊肠道微生物16S rRNA基因克隆文库并进行数据分析。经稀释曲线和多样性指数分析显示,单一AFB₁或与其他毒素联合处理后奶山羊肠道微生物多样性有降低趋势,但差异不显著（P>0.05）,而奶山羊肠道菌群总数在AFB₁与其他毒素的联合处理后显著降低（P<0.05）。对获得的OTUs代表序列进行物种注释后发现,厚壁菌门（Firmicutes）、拟杆菌门（Bacteroidetes）、软壁菌门（Tenericutes）为山羊肠道中主要的细菌类群;经LEfSe分析显示,AFB₁、OTA和ZEN 3种毒素的联合作用可显著增加琥珀酸弧菌科（Succinivibrionaceae）、考拉杆菌属（Phascolarctobacterium）和气单胞菌科（Aeromonadales）丰度。而未处理组的霍尔德曼氏菌（Holdemania）和BF311拟杆菌的丰度显著高于其他组（P<0.05）。以上结果表明,AFB₁、ZEN和OTA联合能影响山羊肠道微生物区系结构,且影响程度依次为：AFB₁+OTA+ZEN > AFB₁+OTA > AFB₁+ZEN > AFB₁。     

HPLC法和LC-MS/MS法测定饲料中黄曲霉毒素B1含量的比较

比较了HPLC光化学衍生化法、HPLC三氟乙酸衍生化法、LC-MS/MS法对饲料中黄曲霉毒素B₁（AFB₁）的检测结果进行验证和比较,为AFB₁实验室检测工作中适宜方法的选择提供参考依据。结果表明：HPLC光化学衍生化法和HPLC三氟乙酸衍生化法均有良好的线性范围和相关系数（R≥0.999 97）,AFB₁的回收率为88.4%~104.6%,精密度均小于5%;LC-MS/MS法相关系数R≥0.999 00,AFB₁的回收率为85.3%~96.8%,精密度小于3%。提示对于饲料中AFB₁的检测,HPLC光化学衍生化法操作简单、灵敏度高、稳定性好,但检测成本较高;HPLC三氟乙酸衍生化法检测成本低,但样品基质干扰大,操作较繁琐;LC-MS/MS法定性准确,但定量准确度稍差,检验成本最高。     

白藜芦醇对黄曲霉毒素B1致兔肾脏损伤的保护作用

【目的】探究白藜芦醇(resveratrol, Res)对黄曲霉毒素B₁(aflatoxin B₁,AFB₁)致兔肾脏损伤的保护作用。【方法】将21只40日龄的家兔随机分为3组，每组7只，分别为对照组、AFB₁组和AFB₁+Res组，其中对照组饲喂基础饲粮，AFB₁组饲喂含0.3 mg/kg BW AFB₁的基础饲粮、AFB₁+Res组饲喂含0.3 mg/kg BW AFB₁和30 mg/kg BW Res的基础饲粮，试验期21 d。试验结束后观察家兔肾脏组织病理变化，检测血清中肌酐(creatinine, CRE)、尿素氮(urea nitrogen, BUN)和尿酸(uric acid, UA)含量，检测肾脏组织中谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、总抗氧化能力(tota...     

黄曲霉毒素B_1与M_1对小鼠肠道细菌多样性的影响

试验旨在研究黄曲霉毒素B_1与M_1(AFB_1与AFM_1)对小鼠肠道细菌多样性的影响。选取体况良好的4周龄ICR(CD-1)雄性小鼠40只,随机分成4组,每组10个重复,每个重复1只小鼠,其中AFB_1组小鼠每只每天灌胃0.3mg/kg体重AFB_1,AFM_1组小鼠每只每天灌胃3.0mg/kg体重AFM_1,AFB_1+AFM_1组每只每天灌胃AFB_1与AFM_1的混合溶液,其中AFB_1终浓度0.3mg/kg体重,AFM_1终浓度3.0mg/kg体重,以上3组毒素溶剂均为1.0%二甲基亚砜水溶液。对照组小鼠每只每天灌胃1.0%二甲基亚砜水溶液。每只灌胃剂量均为200μL,每天09∶00灌胃一次,连续灌胃28d。灌胃结束后,处死并解剖小鼠,收集结肠内容物,采用16SrRNA测序的方法对肠内容物细菌多样性进行测序分析。结果显示:在细菌群落的门水平、科水平及属水平,与对照组相比,3个毒素处理组小鼠肠道内容物细菌优势菌群均未发生明显排序变化(P>0.05),但不同的毒素处理仍造成了不同分类水平下细菌菌群丰度的显著变化:与对照组相比,AFB_1组及联合灌胃组小鼠肠内致病菌或条件致病菌,如Facklamia、Staphylococcus、Corynebacterium属细菌丰度显著升高(P<0.05);而AFM_1组与对照组相比未见显著差异(P>0.05)。综合试验结果,AFB_1单独作用或与AFM_1联合作用可诱导小鼠肠道内致病菌或条件致病菌细菌增殖,改变肠道健康微生物区系,损伤肠道微生物屏障功能。     

牛奶中黄曲霉毒素M1的来源和控制途径

黄曲霉毒素(AFs)是存在于食物或饲料中真菌的有毒代谢物,天然产生的AFs主要有AFB1、AFB2、AFG1和AFG2,而AFM1则是AFB1经动物体内转化而来,具有致癌性,可通过牛奶排出,引起牛奶的安全问题。本文综述了牛奶中AFM1的来源与转化,主要国家和组织对奶中AFM1的限量,奶中AFM1的检测方法和控制途径。     

黄曲霉毒素B1诱导的动物氧化应激及不同生物活性物质的抗氧化防御机制

霉菌毒素广泛存在于各种农产品中,威胁人类和动物健康.黄曲霉毒素是危害性最大的一类霉菌毒素,其中黄曲霉毒素B1(AFB1)毒性最强.动物AFB1中毒过程中可诱导氧化应激.本文阐述了AFB1诱导动物氧化应激的机制,以及不同生物活性物质对AFB1诱导的动物氧化应激的抗氧化防御机制,以期为动物生产中AFB1污染的防控提供参考.     

1株降解黄曲霉毒素B1的解淀粉芽胞杆菌的分离鉴定及其体外脱毒效果

旨在筛选出能够高效降解黄曲霉毒素B₁（AFB₁）的菌株,并对其脱毒活性组分的脱毒效果进行研究,本研究以香豆素为唯一碳源对目标细菌进行初筛,以对AFB₁的降解率为指标进行复筛,并从形态学、生理生化试验和16S rDNA序列分析对筛选菌株进行鉴定;通过测定该菌株不同发酵组分对AFB₁的降解率,来定位其脱毒活性组分,同时采用CCK-8法测定活性组分降解AFB₁后对LMH细胞毒性,并研究了热处理、紫外线照射、强酸、强碱及蛋白酶K处理对活性组分脱毒作用的影响。结果显示,从样品中初筛分离到24株能够在初筛培养基生长良好的菌株,经复筛从中筛选到一株能高效降解AFB₁的菌株Y1-B1,其AFB₁降解率达到73.2%;经形态学、生理生化试验和16S rDNA序列分析确定该菌为解淀粉芽胞杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。对菌株Y1-B1培养物的不同组分进行的脱毒活性研究表明,不同组分对AFB₁的降解率不同,上清液的脱毒能力最强,细菌细胞裂解物的脱毒能力下降明显,菌体悬液和菌体裂解物上清的脱毒能力最差,由此确定解淀粉芽胞杆菌Y1-B1的脱毒能力主要来源于上清液中的某种活性物质;细胞毒性结果显示,与AFB₁对LMH细胞的毒性作用相比,AFB₁被上清液降解后其产物的毒性显著降低。该脱毒活性组分对不同理化因素处理呈现出不同的表现,对高温、紫外照射抵抗力较强,对强酸、强碱抵抗力较差,蛋白酶K仅造成脱毒能力部分减弱。本研究将为解决黄曲霉毒素污染问题提供新的微生物种质资源,同时为后续微生物脱毒制剂的开发奠定基础。