中国荷斯坦牛冷冻胚胎分割移植试验研究

牛胚胎冷冻的成功，使胚胎移植技术不受时间、地域的限制，并且可以做到对受体进行选择，从而可提高移植妊娠率；牛胚胎分割的成功，是增加胚胎数目和生产同卵双犊或多犊、获得更多牛犊的一个有效方法。如果将胚胎冷冻和胚胎分割技术结合起来，那未就可以达到既增加胚胎数目，降低胚胎移植成本，又利于胚胎移植技术在生产中推广应用的双重目的，为此开展此项研究。将用１０％甘油为冷冻剂，８枚７日龄中国荷斯坦奶牛的冷冻胚胎，在３５℃水浴解冻，用１．０ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液脱除抗冻剂，７枚可用胚胎用简单方法分割成１４枚半胚，将裸半胚成对移植于与胚胎日龄同步的７头受体牛。结果３头妊娠，移植妊娠率为４２．９％（３／７），共产５头牛犊，其中２头产同卵双犊，半胚产犊率为３５．７％（５／１４），按整胚计算产犊率为７１．４％（５／７），较同期未分割的冷冻胚胎的产犊率３７．８％（１７／４５）提高３３．６个百分点。     

受体牛品种和移植季节对胚胎移植妊娠率的影响

研究分析了不同受体品种、受体牛饲养方式和移植季节对胚胎移植妊娠率的影响。用于移植的冷冻性控胚胎由加拿大进口。移植的受体选用鲁西黄牛和西门塔尔牛。分析结果显示：受体牛品种对胚胎移植的妊娠率有一定的影响，鲁西黄牛的妊娠率相对较高（40．80％），而西门塔尔牛的妊娠率则相对较低（38.10％）。经卡方独立性检验受体品种与妊娠率之间无显著性关联（P〉0．05）。另外，受体牛饲养方式和移植季节对胚胎移植的妊娠率也有一定的影响，集中含饲条件下受体的整体妊娠率相对较高。秋季移植受体的妊娠率要比春季移植的相对稍高，但二者之间的差异均没有得到显著的水平。     

牛胚胎移植试验研究

本研究应用国产激素和器械对奶牛进行超数排卵，采用胚胎移植技术使黄牛繁殖奶牛。５ａ共超排供体牛１８５头，成功１５９头，成功率为８１．９５％；共获卵１２０１枚，头均７．５５±６．３７枚，其中可用胚胎８８０枚，头均５．６８±４．９６枚。同期发情处理受体牛２３６头，发情１３９头，发情率５８．９０％；鲜胚移植受体牛１７８头，受胎７８头，受胎率为４３，８２％，其中移植受体黄牛１４５头，受胎６１头，受胎率４２．０７％，移植受体奶牛３３头，受胎１７头，受胎率为５１．５２％；冷冻胚胎移植受体牛６１头，受胎２７头，受胎率为３７．７０％；５３胚胎移植产犊８５头。确立了应用国产激素垂体促卵泡素（ＦＳＨ）和前列腺素（ＰＧＧ＿（２２））诱发牛超数排卵和发情同期化处理的最佳程序和剂量，并总结出了采卵方法、胚胎鉴定、胚胎冷冻保存和移植等相应环节的技术规程。     

提高地方杂种黄牛移植冷冻奶牛胚胎效果的研究

本试验共选用77头地方杂种黄牛作为受体，进行高产奶牛冷冻胚胎移植。对其中的70头受体牛进行同期发情处理，经过两次PG处理后有58头牛发情，同期发情率为82．9％，移植前经直肠检查有68．6％的受体牛黄体合格。但由于子宫炎症，最后移植了33头受体牛，并达到了51．5％的妊娠率。因此在不存在子宫炎症的情况下，我们已达到比较好的胚胎移植效果。     

奶牛和小鼠半胚低温冷冻的研究

本实验对小鼠裸半胚采取了多种不同的处理方式，其中冷冻前不培养、冷冻前经短时间培养和冷冻前经长时间培养的冷冻半胚解冻后培养发育率分别为１４．５５％、２６．６７％和６．１２％；装透明带半胚和装透明带后再用琼脂包埋半胚的解冻后培养发育率分别为５６．６７％和６４．２９％；小鼠半胚快速冷冻解冻的培养发育率为６２．００％。此外．将１０枚奶牛半胚装带、包埋、冷冻解冻后，移植给５头受体．结果有１头妊娠；奶牛整胚冷冻后分割的半胚移植妊娠率为２８．５７％（４／１４）。     

哺乳动物胚胎玻璃化冷冻实验

采集黑白花奶牛胚胎２９枚,选用２２枚在乙二醇（ＥＧ）、二甲基亚砚（ＤＭＳＯ）,添加４ｍｇ／ｍＬＢＳＡ的Ｄ－ＰＢＳ液,按１：１：２的混合溶液（ＶＳ１）,以及在上述ＶＳ１和ＰＢＳ－「ＰＢＳ（＋）＋４ｍｇ／ｍＬＢＳＡ」的１：１混合溶液（ＶＳ２）中,进行玻璃化冷冻,将冷冻解冷的１３株黑白花奶牛胚胎移植于贵州本地受体黄牛,妊娠５头,受胎率３８．５％,产出３头犊牛,产犊率２３．１％;而采集鼠胚胎９０枚,在体积     

奶山羊冻胚长期保存长途运输和移植试验

用ＲＰＥ简易冷冻器快速冷冻６～７日龄萨能奶山羊胚胎。将在液氮中冻存１２～８１９ｄ的胚胎用液氮罐经汽车或火车运至外地，并把解冻后的７３枚胚胎移植给３８只当地山羊。受体妊娠率为６０．５％，移植胚产羔率为３９．７％。胚胎冻存１２～２１，１９８～２６５，３２０～４８０和６８７～８１９ｄ时，移植产羔率分别为３８．５％，４５．８％，４１．７％和２５．０％。各冻存期间差异不显著（Ｐ＞０．０５）．     

奶山羊冻胚长期保存长途运输和移植试验

用ＲＰＥ简易冷冻器快速冷冻６－７日龄萨能奶山羊胚胎。将在液氮中冻存１２－８１９ｄ的胚胎用液氮罐经汽车或火车运至外地，并把解冻后的７３枚胚胎移植给３８只当地山羊。受体妊娠率为６０．５％，移植胚产羔率为３９．７％，胚胎冻存１２－２１，１９８－２６５，３２０－４８０和６８７－８１９ｄ时，移植产羔率分别为３８．５％，４５．８％，４１．７％和２５．０％。各冻存期间差异不显著（Ｐ＞０．０５）。     

兔胚胎移植影响因素研究

【目的】探讨分析兔胚胎移植的影响因素,为提高兔胚胎移植效率及生产转基因兔奠定基础。【方法】采集获得的交配胚胎经体外培养后,按单只受体移植胚胎数、受体类型（经产母兔与青年母兔）、受体同期发情方式随机分组,对比观察胚胎移植后受体母兔的妊娠情况。【结果】单只受体兔每次移植10～20枚和20～30枚胚胎获得的妊娠率分别为23．1％和20．0％,二者差异不显著（P〉0．05）;采用经产母兔为受体可获得显著高于青年母兔的妊娠率（27．8％vs13．3％,P〈0．05）;以自然同期发情为受体母兔胚胎移植后获得的妊娠率显著高于诱导同期发情的受体母兔（30．7％vs10．0％,P〈0．05）。【结论】兔胚胎移植时选择自然发情的经产母兔作为受体能获得较好的胚胎移植效果,单只受体移植胚胎数以控制在10-30枚为宜。     

波尔山羊早期胚胎玻璃化冷冻保存和移植的研究

在25℃室温下，采用不同浓度的乙二醇作为玻璃化冷冻液的主要成分，对波尔山羊早期胚进行一步法冷冻（-196℃），同时采用常规冷冻保存作为对照组。结果显示，一步法冷冻囊胚发育率为68．75％（11／16），移植受体妊娠率为54．55％（6／11），产羔率为36．36％（4／11）。说明了此实验所采用的冷冻保护剂及玻璃化冷冻方法，能有效地对山羊早期胚胎进行冷冻保存。     

纳雍县老凹坝乡安格斯牛胚移植试验报告

2003年8月至12月,在纳雍县老凹坝乡开展了安格斯牛冷冻胚胎移植工作,经过对208头当地黄牛母牛及杂交母牛进行诱导同期发情,结果:同期发情率82%;黄体合格率72.3%,对于黄体合格的122头母牛进行了安格斯牛冷冻胚胎移植,移植妊娠率49.5%。     

奶牛胚胎一步冷冻保存的研究

用ＦＳＨ－ＰＧＦ＿（２α）超排黑白花奶牛２２头，以非手术方法采得７～８日龄胚胎６８枚，其中４５枚胚胎用于一步冷冻试验。水浴解冻后共回收４０枚胚胎。用１．０ｍｏｌ／Ｌ蔗糖一步除去保护剂，胚胎形态完好率为９０％（３６／４０）；荧光染色阳性率为８７．５％（７／８）；体外培养发育率为７５％（６／８）；冻胚移植受体妊娠率为４３．５％（１０／２３）。     

奶牛鲜胚移植黄牛或奶牛技术应用

对１３头黑白花奶牛作超排处理，超排有效１１头，有效率８４．６％，头均获胚３．５枚，其中可用胚头均２．８枚。移植受体奶牛８头，妊娠４头，妊娠率５０％；移植受体黄牛１６头；妊娠８头，妊娠率５０％。卵巢和黄体发育好的供体牛在超排有效反应及超排后黄体数明显优于差的供体牛（Ｐ〈０．０１）。进口ＦＳＨ和国产ＦＳＨ的超排效果没有显著差异（Ｐ〉０．０５）。     

体外授精-胚胎移植妊娠率与HCG注射日卵泡大小的相关性

目的：探讨体外受精一胚胎移植（in vitro fertilization and embryo transfer,IVF—ET）的COS周期中人绒毛膜促性腺激素（HCG）给予日卵泡大小与妊娠率的相关性。方法：将414个IVF／ICSI-ET周期中HCG日最大卵泡径线大小分为A组（〈16．0mm）、B组（16．5～17．5mm）、C组（18．0～19．0mm）、D组（≥19．5mm）,分析其妊娠结局、获卵数、子宫内膜厚度与可利用胚胎数。结果：各组妊娠率分别为：A组17．8％,B组30．1％,C组34．6％,D组20．5％,差异有统计学意义（P〈0．05）,获卵数差异亦有统计学意义（P〈0．05）,子宫内膜厚度比较无统计学差异。结论：体外授精-胚胎移植COS周期中,主导卵泡在16．5～19．0mm时决定给予HCG妊娠率较高。     

初情期前母猪胚胎移植试验

１７７枚受精卵或２－细胞期胚胎，手术法移植到８头发情同期化的青年母猪体内，结果有４头妊娠，其中３头受体足月产仔２２只，另一头受体在妊娠８８天后宰杀，发现有６个发育正常的胎儿。移植受体妊娠率为５０％，移植卵成仔（胎）率为１５．８％。     

波尔山羊胚胎回收和移植器械研制与应用

采用自己研制开发的波尔山羊胚胎手术回收和移植的关键器械，共进行122只供体的胚胎回收，回收供体卵巢上正常黄体总计2751枚，回收卵总数2504枚，回收率达到92．3％。采用这种自行研制的胚胎移植器械进行胚胎的子官移植，将2127枚波尔山羊胚胎移植给1182只受体，受体妊娠率达到63．0％（745／1182），证明该胚胎移植器械和制定的应用程序是可行的。     

提高牛冷冻胚胎成活率和移植受胎率的研究

本文从冻前胚胎质量（等级）、胚胎的发育阶段、脱除冷冻保护剂的方法等对冷冻胚胎成活率的影响进行了比较系统的研究；从冻后胚胎质量（等级）、受体牛子宫及卵巢黄体生理状况，移植者技术水平对冷冻胚胎移植受胎率的影响进行了比较详细的研究。冻胚解冻成活率和移植受胎率分别达到７６．２％（１２８／１６８）和４６．６％（５７／１２２），其中１９９５年的同项研究结果分别为８４．４％（３８／４５）和５５．６％（２０／３６），不仅达到实际应用水平，而且与国际先进水平相当。     

波尔山羊超数排卵胚胎冷冻及移植试验研究

进行不同的外源激素超排处理供体、不同冷冻保护剂的胚胎保存与受体同步时间差的胚胎移植试验。结果表明,进口激素与国产激素的超排平均回收胚胎分别为22．1枚与12、25枚,两者差异显著（P〈0．01）;经产高龄（〉5y）的回收胚胎受精率为47．06％,低于经产低龄（2～3y）的89．02％,差异极显著（P〈0．01）。1．5M的乙二醇作冷冻保护剂的胚胎复苏率达88．46％,而10％的甘油作冷冻保存的复苏率为66．67％;研究还表明,受体发情时间差＋12〈＋24h的受胎率仅为37．50％。     

牛胚胎玻璃化冷冻应用研究

试验采用ＩＳＨＩＭＯＲＩ等（１９９３）首创的玻璃化冷冻牛胚胎方法，把冷冻及解冻后的黑白花奶牛胚胎移植到贵州本地黄牛，产出３头犊牛。     

初情期前枫泾小母猪超数排卵及其胚胎发育研究

２４头初情期前的枫泾小母猪以ＰＭＳＧ、ＨＣＧ进行超排处理,平均获得２３．４枚卵子,人工授精后２８￣５０ｈ超排的卵母细胞的受精率为９８．１％,受精卵发育至桑椹胚和囊胚的比例为８９．７％。采用外科手术将１８０枚受精卵移植至８头同期发情的枫泾母猪子宫,其中有５头妊娠,产仔４４头,胚胎移植妊娠率为６２．５％