欧美杨渤丰1号高效组培再生体系建立

与白杨派树种相比,黑杨派树种一直因组培再生困难而限制了其在林木基因工程研究中的应用。本文以欧美杨优良新品种——渤丰1号为试验材料,以其再生培养基中的植物生长调节剂配比、铜离子浓度、光照强度、卡那霉素选择压等方面为切入点开展研究,建立了渤丰1号杨高效组培再生体系。使用该再生体系时,外植体的分化率和生根率均达100%,叶片的平均分化芽数多达20个以上,组培苗移植成活率可达98%,40 mg·L^-1卡那霉素可以抑制渤丰1号杨叶片的诱导与分化,20 mg·L^-1卡那霉素可以抑制渤丰1号杨不定芽的生根;同时发现铜(Cu)元素是渤丰1号杨外植体分化再生的一个关键因素,增加Cu²⁺浓度能显著促进不定芽的诱导和分化。     

巨桉无性系EG5叶片高效再生体系的建立

以巨桉栽培无性系EG5无菌苗的叶片为外植体进行愈伤组织诱导与植株再生研究。结果表明:愈伤组织高效诱导和不定芽分化的最适培养基为改良MS+0.12 mg·L-1TDZ+0.25 mg·L-1NAA;硝酸铵对EG5叶片愈伤组织生长及植株分化的影响较大,最适宜质量浓度为0.412 5 g·L-1;最佳伸长培养基配方为改良MS+0.3 mg·L-16BA+0.05 mg·L-1IBA+0.3 mg·L-1IAA;暗培养10 d能促进不定芽分化,延缓愈伤组织老化和褐变速度。生根培养基为改良MS+0.4 mg·L-1NAA时生根率最高,为65.47%,移植成活率为90%以上。     

五叶地锦离体培养及植株再生

以五叶地锦(Parthenocissus quinquefolia)子叶柄、下胚轴、叶片为外植体进行离体培养,以1/2 MS、B5和Heller为基本培养基,附加不同浓度的细胞分裂素(6-BA,KT, TDZ)及生长素(NAA)诱导下胚轴直接再生不定芽.实验结果表明,暗处理30 d,靠近下胚轴的子叶柄接种在1/2 MS 0.3 mg·L-16-BA培养基上,其不定芽分化率最高达64.67%;下胚轴接种在1/2 MS 2.0 mg·L-1KT 0.05 mg·L-1NAA和Heller 0.5 mg·L-1BA 0.1 mg·L-1NAA培养基上,其不定芽分化率接近,达到24%左右;无菌苗的叶片接种在B5 0.5 mg·L-1TDZ 0.05 mg·L-1NAA培养基上,其不定芽分化率达17.7%.芽增殖培养基为1/2 MS 0.5 mg·L-16-BA 0.1 mg·L-1NAA增殖系数为3～5, 1/2 MS 0.5 mg·L-1IBA 500 mg·L-1活性炭适于再生幼苗的生根,生根苗经移栽全部成活.     

虎眼万年青离体快繁体系及无糖生根培养

以虎眼万年青的叶片为外植体,对不同激素浓度的愈伤组织和不定芽的诱导情况以及再生芽的无糖培养情况进行了研究.结果表明:适于愈伤组织诱导及不定芽分化的培养基为MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L,适宜的继代培养基为MS+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L;用无糖培养体系进行生根培养时,基质中NAA浓度为0.1mg/L时,再生芽的生根率达94%,种苗质量优于常规组培.     

悬铃木叶片再生体系的建立

以悬铃木为试验材料 ,系统地研究了激素浓度、叶片生理状态、光照条件等诸多因素对叶片再生的影响 ,建立了悬铃木叶片外植体的不定芽高频再生体系。研究结果表明 ,以顶部充分伸展的 4 0d叶龄的无菌苗叶片为外植体 ,再生效果最好 ,将此类叶片放在含 1 5mg·L- 1 6 -BA ,0 5mg·L- 1 IBA和 0 5mg·L- 1 KT的MS分化培养基上 ,暗培养 7d后转到光下培养 ,15d后便可见到不定芽不经过或经过很少的愈伤组织阶段 ,直接从叶片上分化产生 ,出现的高峰期在接种后的 2 0～ 30d ,芽分化率高达 98%以上。待小芽长至 1～ 2cm ,将其从叶片上切下 ,转到芽伸长培养基 (MS 0 3mg·L- 1 6 -BA 0 0 5mg·L- 1 NAA 30mg·L- 1 Ad)上使小芽长大成苗 ,最后移到生根培养基(1 2MS 0 1mg·L - 1NAA)上 ,最终得到完整的植株。该再生体系可作为基因转化的受体系统。     

苹果叶片再生体系建立研究

以乔纳金苹果试管苗叶片为外植体诱导不定芽再生，在培养基中添加不同浓度TDZ与NAA或IAA配合，使用琼脂或Polygel作为固化剂。结果表明，较适宜的叶片再生不定芽的培养基为TDZ 2．0mg／L和NAA 1．0mg／L，或TDZ 2．0mg／L与IAA 4．0mg／L。较适宜的组培固化剂为5．0g／L的Polygel。在不同的组培固化剂中，卡那霉素均能抑制不定芽的发生数量，但琼脂和Polygel效果不同。     

湿地松成熟合子胚直接器官发生及植株再生

以湿地松成熟胚为外植体诱导不定芽发生,初步建立植株再生体系.先用含不同浓度6-BA的液体培养基处理湿地松成熟胚12～36 h,吸干后转移到无激素的培养基上培养.6周后,经60mg·L-1 6-BA液体培养基预处理12 h的胚不定芽诱导率最高达69%,预处理24 h平均每个外植体产芽数达到最高(9～12个),但芽体较小,在继代培养基中伸长较慢;经30 mg·L-1 6-BA液体培养基预处理的胚不定芽诱导频率较低,仅25%～38%,但芽体健壮,在继代培养基中伸长较快;6-BA浓度大于80 mg·L-1时不利于不定芽分化.不定根诱导的研究结果表明,NAA对不定芽生根具有促进作用,在改良1/2GD NAA0.05mg·L-1培养基中培养4周后,生根率达50%,移栽成活率为60%左右.     

孔雀草杂交F1代的植株再生

以孔雀草（Tagetes patula）子叶、下胚轴和叶片为外植体,通过器官直接发生途径诱导形成不定芽,探讨植物生长调节剂组合、AgNO3浓度、蔗糖浓度和外植体类型等因素对植株再生的影响,建立了再生体系。结果表明：MS＋6-BA 1.0 · L^- 1＋NAA 0.5 · L^- 1＋AgNO31.0 · L^- 1＋蔗糖40 g·L^-1培养基最适合不定芽的分化和增殖,子叶不定芽分化率达90%以上,平均每外植体分化不定芽数达5.3个。不定芽较适生根培养基为1/2MS＋IAA 0.2 · L^- 1＋NAA 0.1 · L^- 1,生根率达到90%。     

欧美杨111号组织培养再生体系的建立

以欧美杨111号叶片为外植体,以MS和1/2MS为基本培养基,附加不同浓度的NAA、6-BA和IBA,观察不定芽诱导和生根情况,确定欧美杨111号植株再生体系。结果显示:欧美杨111号叶片最佳分化培养基为MS+6-BA 0.5 mg·L~(-1)+NAA 0.1 mg·L~(-1)+蔗糖25 g·L~(-1)+琼脂6 g·L~(-1),pH值6.5,不定芽分化率为96.67%;最佳生根培养基为1/2MS+IBA 0.3 mg·L~(-1)+蔗糖20 g·L~(-1)+琼脂6 g·L~(-1),pH值6.0,全部生根,平均根数13.2条。     

京2杨组培条件的优化及再生体系建立

以京2杨为研究对象,确定了影响其组培苗生长的关键因子及组培苗生长的最佳条件,并为其建立了稳定高效的再生体系.试验结果表明:京2杨组织培养的最适基本培养基为MS培养基,继代培养基和不定芽最佳生根培养基均为1/2MS NAA 0.08 mg·L-1 IBA 0.08 mg·L-1;培养基中加入活性碳不利于京2杨生长;光周期对京2杨的生长影响较小,但光照强度和继代培养基pH值对其生长影响显著,最适光照强度为2500 lx,最适pH值为6.5;无菌苗叶片最佳不定芽诱导培养基为MS BA 1.0 mg·L-1 NAA 0.1 mg·L-1,叶柄最佳不定芽诱导培养基为MS BA 1.0 mg·L-1 NAAO.2 mg·L-1.     

木棉离体再生体系的建立

为给木棉的快速繁殖和转基因研究奠定基础,以木棉下胚轴为外植体,探讨基本培养基种类、植物生长调节剂组合和AgNO3等因素对木棉不定芽诱导和植株再生的影响,建立了下胚轴高效再生体系。结果表明:MS+6-BA 1.5 mg.L-1+NAA 0.1 mg.L-1+KT 0.5 mg.L-1+AgNO31.0 mg.L-1+蔗糖30 g.L-1培养基最适合不定芽的分化和增殖,不定芽分化率达72%,平均每外植体分化不定芽数达3.85个。较适生根培养基为MS+NAA0.5 mg.L-1,生根率达到90%。     

墨西哥落羽杉离体培养及再生体系的建立

以墨西哥落羽杉的幼苗为起始外植体,研究其离体培养及再生体系的建立.结果表明:幼苗在DCR BA0.5 mg·L-1 IBA 0.2 mg·L-1培养基上诱导分化效果最好,分化频率80%以上,平均每个外植体产芽2～5个;诱导的丛生芽转入DCR Gln 500 mg·L-1培养基中伸长效果最佳;生根培养基为3/4DCR 0.05?,生根率在75%以上.     

银腺杨优良无性系HYS-1叶片再生体系的建立

以银腺杨无性系HYS-1组培苗叶片为材料,MS为基本培养基,通过单因素试验及正交试验L16(45),探究不同浓度TDZ、6-BA以及不同生长素种类对银腺杨无性系HYS-1叶片再生体系建立的影响并筛选最佳培养基。结果表明:不定芽主茎高于1cm的芽占总芽数的比率随TDZ浓度的增加而降低。不定芽再生频率随6-BA浓度的增加而降低。在TDZ(0.05~0.10)mg/L+6-BA(0.50~1.50)mg/L的范围内,叶片通过愈伤组织间接诱导大量不定芽,无明显主茎;只有6-BA(0.50~1.50)mg/L时叶片直接诱导不定芽,且主茎明显。叶片基部是最佳不定芽诱导位置;TDZ0.05mg/L+6-BA0.30mg/L+NAA0.05mg/L处理15d后即出现不定芽,且主茎较高,是银腺杨无性系HYS-1叶片诱导不定芽再生的最佳培养基。再生不定芽在1/2MS+0.50mg/LIBA生根培养基上,5d开始生根,生根率95%以上。     

巨尾桉组织培养快繁技术研究

以巨尾桉优良无性系无菌苗带腋芽的茎段为外植体,诱导产生丛生芽,探讨不同浓度无机盐对诱导产生的丛生芽黄化率的影响,并开展丛生芽壮苗和生根培养.结果表明:诱导产生丛生芽的最佳培养基为:改良MS+ZT 0.5 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1;降低丛生芽黄化率的最佳无机盐离子浓度是在MS大量元素的基础上增加Ca2+和Mg2+浓度、Fe2+和Mn2+浓度;壮苗后生根最佳培养基为:改良1/2 MS+IBA 1.0mg·L-1+NAA 1.5 mg·L-1.从而建立了高效巨尾桉组培再生系统,为桉树良种选育和遗传转化等研究提供材料和基础手段.     

杂交鹅掌楸离体培养中器官发生的研究

以杂交鹅掌楸的叶片、叶柄、无菌苗的茎段及其芽基部切段为外植体,进行愈伤组织途径的器官发生及不定芽途径的直接器官发生培养。结果表明,多种外植体在诱导培养基上均能脱分化产生愈伤组织,其中无菌苗芽基部具有最高的愈伤组织诱导率。愈伤组织在MS 6-BA 2.0 mg.L-1 NAA 0.5 mg.L-1和MS 6-BA 4.0 mg.L-1 NAA 0.5 mg.L-1的分化培养基上能分化出不定芽。部分外植体在MS 6-BA 4.0 mg.L-1 NAA 0.5 mg.L-1的分化培养基上直接分化产生不定芽。器官发生途径再生体系的建立为抗逆基因工程等工作奠定了基础。     

84k杨叶片离体快繁体系的优化

以84k杨成熟叶片为外植体,诱导愈伤组织及不定芽的分化,经过壮苗、生根过程获得再生植株,建立了84k杨组织培养和快速繁殖技术新体系。结果表明:最佳叶片不定芽诱导培养基MS+6-BA 0.8mg/L+NAA0.1mg/L,诱导率100%,平均丛生芽数为15.06;最佳壮苗培养基为MS+IBA 0.6mg/L+6-BA 0.1mg/L;最佳生根适宜培养基为MS+IBA 0.6mg/L+NAA 0.4mg/L,生根率100%;将生长良好的组培苗移栽并扣瓶培养1周,成活率达97%。     

白林2号杨组织培养与快繁技术研究

以白林2号杨优树萌发枝条(已木质化)为外植体进行组织培养快繁技术研究,结果表明:初代分化最适培养基为MS+6-BA0.3 mg·L-1+IAA0.5 mg·L-1,分化仅为7 d,并有丛生芽发生;使用MS+6-BA0.3 mg·L-1+NAA0.01 mg·L-1+IAA0.3 mg·L-1进行继代培养效果最好,丛生芽粗壮,数量较多;以附加不同含量NAA和IAA诱导生根,可获得再生植株,其中1/2MS+NAA0.01 mg·L-1+IAA0.2 mg·L-1培养基生根率达到88%。     

美国黄松离体胚培养条件下不定芽的形成与根产生的研究

以美国黄松成熟胚为外植体在MS、GD、SH和N6 培养基上诱导不定芽 ,试验结果表明 ,基本培养基的种类对外植体不定芽的诱导起主要作用 ,GD最好 ,SH次之 ,MS和N6 最差。GD 0 5mg·L- 1 6 BA ,对外植体不定芽的诱导率达 5 5 % ,平均增殖率为 6 ,最大增殖率达 10 ;NAA不利于外植体不定芽的诱导 ;培养基中加入适量的活性炭有利于不定芽的形成和生长。对不定芽在GD、SH和 1 2SH培养基上进行生根诱导 ,试验结果表明 ,基本培养基的种类对不定芽形成根起主要作用 ,GD、SH不能诱导不定芽生根 ,1 2SH可以使不定芽生根 ,其对不定芽的诱导率为 2 2 % ,1 2SH NAA 0 5mg·L- 1 对不定芽生根的诱导率为 3 3% ;NAA对不定芽生根具有促进作用。在离体培养条件下 ,以美国黄松种胚为外植体获得了再生小植株     

银中杨茎段离体培养再生植株研究

以银中杨茎段为外植体,建立组织培养系统.试验结果表明,MS为最适基本培养基;各激素对诱导不定芽的作用大小为TDZ＞6-BA＞KT,诱导不定芽的最佳培养基为MS+0.1 mg·L-1TDZ+蔗糖20 g·L-1+琼脂0.7%;诱导不定芽再生的最佳光质为白光或黄光;生根培养基以1/2MS+0.5 mg·L-1IBA+蔗糖2...     

离体条件下西黄松成熟合子胚不定芽的诱导及植株再生

以西黄松成熟胚为外植体诱导不定芽,在GD 9.85～19.70 μmol·L'-1 6-BA 0.0～14.42 μmol·L-1 NAA上不定芽诱导率最高达65.8%,平均增殖率为7,最大增殖率达10;不定芽形成有2种途径,即子叶直接形成不定芽和子叶组织再分化形成不定芽;NAA不利于外植体不定芽的诱导;不定芽的生长和扩繁采用不加生长调节剂的1/2 GD和1/2 SH培养基;培养基中加入适量的活性炭有利于不定芽和根的生长.不定嫩梢在1/2 GD和1/2 SH附加不同浓度NAA和GA,3的培养基上进行生根诱导,试验结果表明:NAA对不定根的形成起主要作用,在1/2 GD 28.84 μmol·L'-1 NAA 4.17 μmol·L'-1 GA,3培养基中不定梢的生根率为16.7%.在离体培养条件下,以西黄松成熟胚为外植体获得了再生植株.