新西兰兔精液冷冻保护剂的筛选

本试验的目的是分析在新西兰兔精液冷冻保存稀释液中分别添加不同浓度的海藻糖、透明质酸、维生素E(Ve)、超氧化物歧化酶(SOD)对兔精液冷冻保存效果的影响,以冻后精子活率、质膜完整性、顶体完整率等作为质量评定指标,筛选出效果较好的新西兰兔精液的冷冻保护剂种类及浓度。结果表明,精液冷冻保存稀释液中添加3种浓度的海藻糖均未提高兔精液冷冻后的精子活率、质膜完整率和顶体完整率(P0.05);添加0.5%和1%的透明质酸提高了兔精液冷冻后的精子活率(P0.05),但各组间质膜完整率和顶体完整率无显著差异;添加2 g/L Ve提高了兔精子4℃平衡后的活率、冷冻后精子活率、质膜完整率和顶体完整率(P0.05);添加4 000 IU的SOD提高了兔精子4℃平衡后的活率、冷冻后精子活率、质膜完整率和顶体完整率(P0.05)。结果证实,在新西兰兔精液冷冻保存稀释液中添加适宜浓度的Ve和SOD可提高兔精液冷冻后的精子活率、质膜完整率和顶体完整率。     

不同冷冻保护液和解冻温度对猪精液冷冻效果的影响

在BF5稀释液中分别添加不同水平的牛血清白蛋白(BSA)(0.5,1,1.5 g/L)、二甲基乙酰胺(DMA)(0.5%,1%,1.5%)、甲基-β-环糊精载胆固醇(CLC)(1,2.5,5 g/L),对成年健康猪精液进行冷冻保存,于不同温度(37,50,70℃)解冻后分别检测冷冻后精子的活率、活力、质膜完整性、项体完整率、线粒体活性.结果显示,0.5 g/L BSA组冷冻后精子活力、质膜完整率、顶体完整率和线粒体活性均高于其他组,但差异不显著(P0.05).1% DMA组冷冻后精子活率和活力显著优于1.5%DMA组(P＜0.05),同时也高于对照组(3%甘油)冻后精子活率和活力,但差异不显著.不同质量浓度CLC组冷冻后精子的活率、活力、质膜完整性和线粒体活性与对照组相比差异不显著.50℃和70℃解冻组精子的活率和线粒体活性显著高于37℃解冻组的精子;50℃解冻组精子的活力和质膜完整率显著高于其他2组.因此,在猪精液冷冻稀释液中,用DMA可以代替甘油作为渗透性保护剂,且以1%DMA,50℃解冻最佳.     

解冻稀释液及孵育温度对冷冻-解冻后犬精液品质的影响

实验旨在比较解冻后解冻稀释液(Tris-柠檬酸-葡萄糖稀释液)的添加比例(1:0、1:1、1:2)对精液品质的影响,并比较了4种孵育温度(37、34、25、4℃)对精子寿命及精子活力的影响,探索合适的冷冻-解冻后犬精液的孵育条件。结果显示:解冻稀释液的添加与否及添加比例对解冻后孵育30 min的精子活力、活率、质膜完整率及顶体完整率均无显著影响;解冻后,在不同温度下孵育30 min,4组精子活率和质膜完整率无显著差异,而4℃孵育温度下精子活力和顶体完整率高于37℃(P0.05);解冻后孵育2 h,4℃孵育温度下的精液品质(精子活率、精子活力、质膜完整率、顶体完整率)最佳(P0.05),34℃和25℃组之间差异不显著,而37℃组的精液品质最差。结果表明,解冻稀释液对解冻后精液的孵育效果无影响,而解冻后精液的孵育温度以4℃最佳。     

海藻糖、二甲乙酰胺对公猪精液冷冻保存效果的研究

采用5% 二甲乙酰胺(DMA)(V/V)完全替代甘油,比较乳糖、海藻糖对精液冷冻保存效果的影响。结果表明,海藻糖显著提高了冷冻——解冻后精子成活力(49.32%±1.52%)与顶体完整性 (47.33%±1.16%)(P<0.05)。然后利用海藻糖替代乳糖,评价不同浓度的DMA对公猪精液冷冻保存的影响。结果表明,当DMA添加量为4%时,解冻后精子活率、成活力、顶体完整率分别为(45.17±0.56)%、(50.33±0.67)%、(48.30±1.44)%,均显著高于3% DMA、6% DMA添加组(P<0.05),精子活率显著高于5% DMA添加组(P<0.05),但精子成活力、顶体完整性与其差异不显著(P>0.05)。因此,当利用海藻糖作为冷冻保存基础稀释液,DMA最适添加量为4%。     

不同稀释液配方对奶牛冷冻精液的影响

采用假阴道法采集成年种公牛精液,经精液品质检查后,合格精液用四种不同冷冻稀释液进行稀释、冷冻、以筛选出适宜的冷冻稀释液和最佳冷冻保护剂.结果表明:Ⅱ号稀释液优于其它3种稀释液(P＜0.05);甘油为最佳冷冻保护剂.优于乙二醇和DMSO冷冻效果(P＜0.05),其最佳浓度为7%,精子冷冻后活率平均可达0.45±0.575,畸形率15.44%,项体完整率57.82%;奶牛细管冻精的解冻效果以75℃水浴,2 S到6 S的解冻时间最佳.     

兔精液冷冻保存的研究

本试验采用不同的稀释液对兔精液进行冷冻保存,并比较了在稀释液中添加不同防冻剂以及平衡时间对兔精液冷冻保存效果的影响.结果表明:稀释液Ⅱ稀释的精液,解冻后,精子活率明显高于稀释液Ⅰ稀释的(P＜0.01),其复苏率显著高于后者(P＜0.05).以稀释液Ⅱ为基础液,添加不同浓度(27.3%,15%,12%,9%)的DMSO对兔精液冷冻保存,结果解冻后精子活率以15%及12%两组较好,其中添加15%的优于12%的,但差异不显著(P＞0.05).选择不同种类的防冻剂(7%甘油与15%DMSO)比较时,发现7%甘油组解冻后精子活率明显低于15%DMSO组,二者差异极显著(P＜0.01),其复苏率显著低于后者(P＜0.05).以15%DMSO作为防冻剂,采用不同的平衡时间在5 ℃平衡,结果发现平衡30 min和60 min的解冻后精子活率较好,但差异不显著(P＞0.05),而90 min和120 min的冷冻效果较差.     

鸵鸟卵黄对猪精子冷冻后质量的影响

为了提高猪冷冻精液品质和精子抵抗低温打击的能力,本研究以5%、10%、15%、20%和25%等不同浓度的鸵鸟卵黄作为冷冻保护剂,以20%的鸡蛋卵黄和20%的鸽蛋卵黄为对照,将冷冻-解冻后的精子活率、质膜完整率和顶体完整率作为评价指标,分析鸵鸟卵黄对猪精子的抗冷冻保护作用。结果表明：稀释液中添加20%鸽蛋卵黄时,精子活率、顶体完整率和质膜完整性分别为52.11%、55.62%和54.94%,显著高于其他组（P〈0.05）。虽然稀释液中添加15%鸵鸟卵黄时,冷冻-解冻后精子活率、顶体完整率和质膜完整率显著高于5%、10%、20%和25%鸵鸟卵黄组,但仍然显著低于稀释液中添加20%鸽蛋卵黄处理组。本研究表明,鸵鸟卵黄在冷冻过程中对猪精子具有一定的保护作用,但相对于鸽子蛋和鸡蛋卵黄效果并不理想。     

猪精液5mL大管冷冻方法的初步研究

以5 mL大管解冻后的精子活力、质膜完整率、顶体完整率以及人工授精结果为判定指标,筛选冷冻液Ⅰ和冷冻液Ⅱ中N-乙酰-D-氨基葡萄糖(N-Acetyl-D-Glucosamine,N-AcGA)、甘油和卵黄的适宜浓度,寻找适宜的平衡时间和冷冻高度.结果显示:(1)在冷冻液Ⅰ中添加0.1%的N-AcGA,解冻后精子的活力和顶体完整率最高,分别为50.00%和56.60%;(2)冷冻液Ⅱ中以4%的甘油浓度最好,解冻后精子的活力、弯尾率和顶体完整率可分别达52.50%、52.08%和77.67%;(3)冷冻液中的卵黄终浓度以10%效果最佳;(4)在4℃中平衡2 h,冻后顶体完整率比对照组(0 h)有显著提高(P<0.05);(5)在冷冻高度方面,距液氮面1 cm处冷冻对精子活力和顶体完整性都有明显的保护作用;(6)在人工授精方面,5 mL大管冷冻精液平均获得了超过80%的受胎率.     

香菇多糖对牛精液冷冻保存效果的研究

为了研究香菇多糖对牛精液冷冻保存效果的影响,在牛精液冷冻稀释液中添加不同质量浓度(1、5、25、125、625mg/L)的香菇多糖,冻融后检测牛精子活率、动力学参数以及顶体完整率、质膜完整率等。结果表明,25 mg/L组的冷冻保存效果最好,精子活率、质膜完整率、顶体完整率分别达到42.04%、43.57%和63.87%,显著高于对照组(P0.05)。而过高浓度的香菇多糖(125、625mg/L)则显著降低了冻融精子的质量。牛精液冷冻稀释液中添加香菇多糖具有显著的保护作用,其最佳添加浓度为25mg/L。     

二甲基甲酰胺对猪精液冷冻保存效果的影响

用二甲基甲酰胺(DMF)完全替代甘油,比较不同平衡时间和不同DMF添加量对猪精液冷冻保护效果的影响。结果表明,DMF能完全替代甘油,获得较好的冷冻保护效果。最佳平衡时间为90 min,解冻后精子活力为(44.57±0.72)%,显著高于对照组和其他组(P0.05)。当DMF添加量为5%时,冻后精子活力、活率、线粒体活性、顶体完整率和质膜完整率分别为(49.91±0.39)%(、46.51±0.26)%、(47.51±0.52)%(、49.84±0.56)%、(46.30±1.61)%,均显著高于2%、3%、6%DMF添加组(P0.05),但与4%DMF添加组相比,冻后精子活力、活率和质膜完整率差异不显著(P0.05)。本试验结果表明,DMF最适添加量为5%。     

新疆驴冷冻精液的研究

试验旨在探究新疆驴冷冻精液的最佳稀释保护液与处理方法。以假阴道采集新疆驴精液,并用5种不同稀释保护液稀释冷冻后,选取其中较为理想的稀释液作为对照组,再通过分别添加4%、5%、6%、8%甘油处理试验,最后再选用添加甘油后冷冻效果最优的稀释液为对照来进行离心浓缩试验。结果表明：①5号稀释液冷冻—解冻精液后,其活力、顶体完整率要显著高于其他4种稀释液（P<0.05）;②以5号稀释液为对照组,添加6%甘油(7号稀释液)冷冻后,精子的活力、顶体完整率要显著高于添加4%、5%、8%甘油组（P<0.05）;③以7号稀释液为对照组,通过离心浓缩,精液在冷冻后其活力和精子顶体完整率都显著提高（P<0.05）。结果提示,将驴精液用6%葡萄糖、2%乳糖、6%甘油为主的稀释液稀释,并经500 r/min离心浓缩10 min处理后,其冷冻效果最好。     

改进的昆明犬精液冷冻保存方法

为了对现有的犬精液冷冻方法进行改进,进一步提高精子冷冻保存效率,试验采用4种降温时间(30,60,90,120 min)和2种添加甘油方法(一步加或五步加),以冷冻复苏精子的运动度、复苏率、质膜完整率和顶体完整率为指标,比较不同降温时间和不同添加甘油方法对昆明犬精液超低温冷冻保存的效果。结果表明:在相同降温条件下,五步加甘油进行冷冻的精子,复苏后精子运动度、复苏率和质膜完整率均高于一步加甘油组,顶体完整率高于一步加甘油组或与其相当;降温处理60 min,五步加甘油后进行冷冻的精子,其运动度、质膜完整率显著高于其他组(P0.05),而复苏率比其他组高,但差异不显著(P0.05)。     

褪黑素对绒山羊精液冷冻保存效果的影响

为了研究褪黑素对绒山羊精液冷冻保存效果的影响,在冷冻稀释液中外源补充不同浓度(0.125,0.250,0.500,1.000 mg/mL)的褪黑素进行冷冻试验,冷冻解冻采用计算机辅助精液分析系统(CASAS)和流式细胞仪分别检测精子活率、质膜完整率、顶体完整率以及精子细胞中活性氧(ROS)的含量。结果表明:在冷冻稀释液中添加褪黑素能够显著降低精子细胞中ROS的含量,而且在冷冻稀释液中添加浓度为0.500 mg/mL的试验组绒山羊精子活率(53.3%)、质膜完整率(44.6%)、顶体完整率(77.9%)均显著高于空白对照组(47.8%、36.3%和53.2%)(P0.05)。说明在绒山羊精液冷冻稀释液中添加0.500 mg/mL褪黑素能够显著提高绒山羊精子抗氧化能力和冷冻保存效果。     

不同甘油浓度下稀释液中添加棉子糖对绒山羊冷冻精液品质的影响

在甘油浓度为3%和6%的冷冻精液稀释液中添加不同浓度的棉子糖,旨在优化绒山羊冷冻稀释液配方。结果表明:甘油浓度为3%时,山羊精液稀释液的抗冻保护效果较好,在此基础上添加10 mmol/L棉子糖,精子活率、顶体完整率、生存指数、质膜完整率均高于其他实验组(P<0.05),并且畸形率显著降低(P<0.05);在脂质过氧化反应和抗氧化酶活性方面,该实验组CAT活性高于其他实验组(P<0.05),而MDA浓度低于其他实验组(P<0.05)。     

不同保护剂对藏羊冷冻精液品质影响的研究

本实验研究了不同保护剂对藏羊细管冷冻精液的品质影响。结果表明:含T ris的柠檬酸盐缓冲液可以提高冷冻-解冻后的精子活率(0.41±3.23)和精子顶体完整率(74.45±1.45),以等体积乙二醇替代甘油作防冻剂制作的细管冷冻精液,解冻后的精子活率(0.41±2.87)和顶体完整率(81.23±1.45)。稀释液中添加维生素B12对提高冷冻后精子活率(0.44±3.26)与保护顶体完整率(83.33±1.93)具有良好的作用。     

辽宁绒山羊细管冷冻精液研究

本实验研究了辽宁绒山羊细管冷冻精液的稀释液及制作工艺。结果表明:离心洗涤去精清可以提高冷冻-解冻后的精子活率,与不去精清的对照组相比差异显著(P<0.05);以等体积乙二醇替代甘油作防冻剂制作的细管冷冻精液,解冻后的精子活率和顶体完整率显著(P<0.05)高于甘油作防冻剂的对照组。实验还证明,含Tris的柠檬酸盐缓冲液对提高冷冻后精子活率与顶体完整率具有良好的作用。     

己酮可可碱对吐鲁番黑羊冷冻精液生理活性的影响

为探究己酮可可碱(PTX)对吐鲁番黑羊冷冻-解冻后精子生理活性的影响，本实验在冷冻-解冻后的精液中分别添加不同浓度(0、1、2、3 mg/mL)的PTX在37℃恒温水浴锅中进行孵育，检测孵育10 min、20 min、30 min、1 h、2 h、3 h、4 h、5 h后的精子活力、活率、运动速率、畸形率、质膜完整率、顶体完整率以及总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)等指标，评价PTX对吐鲁番黑羊精液解冻后质量的影响。结果表明：与对照组相比，添加1～3 mg/mL PTX可以在5 h内提高精子活率、活力、运动速率、质膜完整率、顶体完整率、T-AOC活性以及GSH-Px活性(P<0.05)，降低精子畸形率(P<0.05)，其中以2 mg/mL PTX组孵育20 min精液品质最佳，即吐鲁番黑羊精子活率、活力、直线速率、曲线速率、平均路径速度、畸形率、质膜完整率、顶体完整率、GSH-Px活性分别为68.99%、61.18%、29.3μm/s、32.2μm/s、22.8μm/s、14.45%、56.99%、57.99%、4235.92U/mL。在本实验条...     

羧甲基纤维素钠对猪精液常温保存效果的影响

在猪人工授精技术中,良好的稀释剂是提高猪精子质量的关键因素之一。为探讨羧甲基纤维素钠(CMC)对猪精液常温保存效果的影响,本研究以传统的猪精液保存稀释剂Zorlesco(-BSA)为基础稀释液,通过添加不同浓度的CMC(0、8、16和24μmol/L)对原精液进行稀释和保存。采用计算机辅助精液分析仪(CASA)检测精子活率和活力,低渗肿胀法(HOST)检测精子质膜完整性,考马斯亮蓝染色检测精子顶体完整性。结果显示,在猪精液保存的前3d内,添加不同浓度CMC组的精子活率和活力与对照组相比较高,但差异不显著(P0.05);保存4~7d时,与对照组相比添加16μmol/L CMC组的精子活率和活力明显升高(P0.05)。在保存的前4d内,添加不同浓度CMC组的精子质膜完整率和顶体完整率与对照组相比差异不显著(P0.05),但在保存至5~7d时,添加16μmol/L CMC组的质膜完整率和顶体完整率显著高于对照组(P0.05)。猪精子活力、活率、质膜完整率、顶体完整率之间存在极显著的正相关关系(P0.01),在Zorlesco稀释剂中添加8~24μmol/L的CMC能显著改善和提高猪精子活率、活力、质膜完整性以及顶体完整率,其最佳添加浓度为16μmol/L。CMC可作为精液稀释剂中的悬浮剂,用于减缓精子沉降速率,提高猪精液保存质量。     

添加低剂量大豆卵磷脂稀释液低温保存绵羊精液的优化研究

本实验旨在探讨添加低剂量大豆卵磷脂稀释液对绵羊精液低温保存效果。实验一采用6个浓度(0%、0.25%、0.5%、0.75%、1.0%、1.25%)大豆卵磷脂替代TRIS专利稀释液中卵黄低温保存绵羊精液,在第0、1、4、7、10、12、18天检测精子活率、顶体完整率;实验二选用实验一中最优添加组(0.5%组)和TRIS专利稀释液制成粉剂低温保存绵羊精液,在保存第0、1、4、7、10、12天对精子活率和顶体完整率进行测定,并在保存第10天对绵羊进行人工授精。结果表明:实验一中,0%组从第1天精子活率低于其他组(P<0.05),0.25%组精子活率观测值从第10天开始低于0.25%以上浓度组(P<0.05),0.5%、0.75%、1.0%、1.25%组保存第10天精子活率均大于50%,0.5%组保存第18天精子活率高于1.0%、1.25%组(P<0.05);各组顶体完整率缓慢下降,各时间点均无显著性差异;实验二中,0.5%组与TRIS组在各时间点的精子活率、顶体完整率与受胎率均无显著性差异,保存第10天精子活率均高于50%;0.5%组受胎率为65.49%,略低于TRIS组67.65%(P>0.05)。本实验条件下,绵羊精液低温保存稀释液中添加0.5%大豆卵磷脂替代卵黄效果最佳。     

咖啡因对猪精液冷冻的影响及冷冻－解冻方法的优化

本试验对猪精液冷冻保护液中添加咖啡因的作用进行了研究,并优化冷冻－解冻程序,提高0.5 mL细管猪精液冷冻解冻后的质量。在预先设计稀释液配方的基础上,使咖啡因终浓度为0、0.2、0.4、0.6 mg/mL,选择最佳咖啡因浓度,选出最优组合与传统的TCG稀释液和商业用Androhep〖XC1.TIF〗CryoGuardTM冷冻稀释液进行比较,比较3种不同的冷冻曲线对猪冷冻精液解冻后精子品质的影响,最后对38 ℃下30 s、50 ℃下13 s 2种解冻方法进行比较。结果表明,咖啡因浓度为0.2、0.4 mg/mL的精子冷冻后活力、质膜完整率、顶体完整率显著高于0、0.6 mg/mL（P＜0.05）,最佳添加浓度为0.2 mg/mL;预设计的稀释液配方及冷冻方案优于传统的TCG法（P＜0.05）,但与Androhep〖XC1.TIF〗CryoGuardTM稀释液(美国商业用)有一定差距（P＜0.05）;A曲线在猪精液冷冻－解冻后活力、质膜完整率和顶体完整率方面均显著优于B和C冷冻曲线（P＜0.05）;50 ℃水浴解冻13 s显著优于38 ℃解冻30 s（P＜0.05）。