视黄醇对大肠杆菌诱发的急性乳腺炎大鼠氧化应激的作用研究

本文探讨视黄醇对大鼠大肠杆菌乳腺炎氧化应激的调节作用.选用72只清洁级SD大鼠,随机分成实验组和对照组(n=36).怀孕后10d起,灌胃视黄醇(溶剂为大豆油)8000I.U/kg·d,连续灌注10d;对照组灌胃等体积的大豆油.产后72h,经乳头管灌注LPS 10μɡ/侧到第四对乳腺内.分别于灌注前(0h)及灌注后2、4、8、16和24h(n=6)颈静脉放血处死大鼠后采样.髓过氧化物酶活力检测结果与组织病理学观察显示,视黄醇降低了LPS诱发炎症过程中中性粒细胞在组织中的积聚与持续激活,有效控制了细胞损伤,并加快了组织修复;同时,视黄醇处理显著降低LPS灌注后IL-8及外周血PMN活性氧的释放.实验结果表明,灌胃视黄醇对LPS诱导的实验性乳腺炎大鼠PMN引起的氧化应激具有一定的保护作用.     

NLRP3炎症小体激活在急性大鼠乳腺炎中的作用

为探讨炎症小体NLRP3在大肠杆菌诱发的实验性大鼠乳腺炎中的作用，36只SD大鼠随机分为对照组、大肠杆菌组和抑制剂组。其中：大肠杆菌组于大鼠产后72 h经乳头管注入2×10¹² CFU/mL大肠杆菌悬液100μL/侧到第4对乳腺(两侧)内；抑制剂组在注射大肠杆菌悬液前0.5 h腹腔注射500 mg/kg格列本脲；对照组注射等量灭菌生理盐水，注射后12 h收集血清及乳腺组织。结果：大肠杆菌诱发能显著提高乳腺组织NLRP3及衔接蛋白ASC和炎症相关蛋白激酶Caspase-1的表达，促进炎性细胞因子IL-1β的释放，从而引起N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活性及丙二醛(MDA)水平的显著升高。NLRP3的抑制剂格列本脲预处理能抑制NLRP3及ASC和Caspase-1的表达，降低炎性细胞因子IL-1β的释放，下调NAGase的活性和MDA水平。可见NLRP3炎症小体的激活在大肠杆菌诱导的实验性乳腺炎症反应中发挥了重要的作用。     

复方桉叶注射剂对金黄色葡萄球菌型小鼠乳腺炎的影响

奶牛乳腺炎是造成奶牛业经济损失最大的一种疾病.本试验利用金黄色葡萄球菌人工诱发小鼠乳腺炎,研究复方桉叶注射剂对实验性乳腺炎的治疗作用.与模型组相比,在接种后24h给药组小鼠乳腺组织内细菌数均显著降低(P<0.05),给药组小鼠血清中AKP、NAGase活力显著升高(P<0.05).在接种后24h,给药组小鼠乳腺组织中AKP活力、NAGase活性、LPO活力显著降低(P<0.05),IL-2显著增高(P<0.05).本试验表明复方桉叶注射剂能抑制金黄色葡萄球菌在乳腺内的繁殖,降低其对乳腺组织的损伤,发挥对乳腺的保护作用,同时能阻止炎症时中性粒细胞的迁徙,通过刺激IL-2的产生来缓解金黄色葡萄球菌感染引起的免疫抑制,减少乳腺组织的细菌数量,减弱炎症介质对细胞和血-乳屏障完整性的损伤.     

金黄色葡萄球菌诱导大鼠乳腺炎模型的建立

妊娠Wistar大鼠84只,随机分为试验组和对照组(n=42)。产后第4天,试验组经第4对乳腺的乳导管灌注金黄色葡萄球菌0.1 m L(2×107CFU/m L),对照组注射同量的生理盐水。动态观察和记录大鼠的临床症状、病理组织学变化、胸腺和脾脏指数、乳腺组织内细菌数和血液学变化。结果显示,注菌后,试验组胸腺和脾脏指数显著或极显著升高(P0.05或P0.01);乳腺组织内细菌量在接种后6 h迅速升高,之后开始下降,直至96 h,乳腺组织仍可以检测到金黄色葡萄球菌,高于300 CFU/mg乳腺组织;外周血中的嗜中性粒细胞在接种后6 h,12 h,极显著升高(P0.01),之后差异不显著;病理组织学检查显示,接种细菌后可导致明显的炎症反应。表明本研究建立了经乳腺导管灌注金黄色葡萄球菌诱发大鼠乳腺炎的动物模型。     

视黄醇对试验性乳腺炎大鼠炎性细胞因子释放的影响

为研究视黄醇对脂多糖(LPS)诱发的乳腺炎大鼠炎性细胞因子释放的影响,40只清洁级SD孕鼠自怀孕第10天起,3个试验组(每组8只)分别为低(L)、中(M)、高(H)剂量组,分别灌胃视黄醇(溶解于大豆油)4 000、8 000和16 000 U/kg·d,对照组灌胃等量的大豆油,连续灌胃1 d。产后72 h分别灌注灭菌生理盐水和10μg/侧LPS到大鼠第4对乳腺(两侧)内,12 h处死大鼠。LPS灌注乳腺12 h后,乳腺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)均显著升高,白细胞介素-2(IL-2)水平显著降低。与阳性对照组相比,灌胃中、高剂量的视黄醇显著降低乳腺组织中TNF-α水平,低、中、高剂量视黄醇能显著降低血清中TNF-α水平,显著提高血清中IL-2水平。结果证实:视黄醇能抑制炎性细胞因子过度释放,提高机体免疫力,对LPS诱发的试验性乳腺炎大鼠有一定的保护作用。     

移植骨髓间充质干细胞对乳腺炎模型大鼠乳腺组织及血清中酶活性变化的影响

旨在研究乳腺基部移植骨髓间充质干细胞(BMSC)对试验性乳腺炎大鼠模型血清中N-乙酰基-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、髓过氧化物酶(MPO)的影响,70只产后SD雌性大鼠,其中5只于产后72h(试验前1d)处死,作为空白对照组;另外65只大鼠乳头管灌注内毒素制作乳腺炎动物模型。造模处理1d后(试验0d),随机选取5只模型大鼠处死,作为试验对照组;其余60只随机分为生理盐水组,抗生素组和BMSC移植组,每组20只,并于试验1、3、5、7d各组分别处死5只,所有屠宰大鼠心脏采血,制备血清,检测血清中NAGase、ALP、LDH、MPO水平;同时采集乳腺组织,制作石蜡切片,进行病理组织学检测。结果表明,空白对照大鼠乳腺组织无异常,腺泡上皮细胞排列整齐;灌注内毒素的试验对照大鼠,在注射内毒素24h后乳腺腺泡结构破坏严重,腺上皮细胞脱落、坏死,腺泡腔内有大量中性粒细胞和脱落上皮细胞浸润,间隔增宽。血清中ALP、LDH、NAGase、MPO活性与灌注前相比显著升高(P0.05)。治疗后各组乳腺组织逐渐恢复;试验7d时移植BMSC组已恢复到正常水平;灌注内毒素后血清中NAGase、ALP、LDH、MPO活性与灌注前相比显著升高(P0.05),治疗后,移植BMSC组血清中ALP、NAGase活性于1、3、7d时、MPO活性于1、3、5、7d时、LDH活性于7d时与对照组差异显著(P0.05)。研究结果说明,BMSC能修复受损乳腺组织,降低血清中ALP、LDH、NAGase、MPO等乳腺炎相关酶的活性。     

家兔乳头管灌注脂多糖诱发血清急性期蛋白的动态变化

检测和分析经乳头管灌注脂多糖(LPS)前后家兔血清急性期蛋白含量的动态变化。11只泌乳家兔(产后7d)经乳头管灌注LPS建立乳房炎模型,在灌注前2h,灌注后6、12、24、48、72h和5、7d分别测定血清中结合珠蛋白(HP)、C-反应蛋白(CRP)和白蛋白(ALB)含量,同时取乳腺组织观察病理变化。组织病理学结果显示,灌注LPS后6h后乳腺组织出现病理变化,腺泡腔中观察到嗜中性粒白细胞;灌注24h时组织损伤加重,乳腺组织结构紊乱,浸润大量嗜中性粒白细胞;48h后乳腺组织开始自我修复,7d时恢复正常。灌注LPS前血清中HP含量低于检出限,灌注LPS后6h时HP含量显著升高(P<0.05),12h时达到峰值,48h开始显著降低(P<0.05);CRP含量在灌注LPS后6～72h内显著升高(P<0.05),12h时达到峰值,72h后逐渐降低,5d时恢复到健康水平;ALB含量在灌注LPS后12～72h内显著降低(P<0.05),5d时恢复到健康水平。结果表明,HP、CRP和ALB含量在灌注LPS前后发生了规律性的变化,其中HP含量对LPS诱导的急性乳房炎反应敏感,提示HP可作为评价乳腺组织炎症程度和乳房炎的早期诊断...     

中毒休克综合征毒素-1在小鼠金黄色葡萄球菌乳腺炎中的作用

为探究金黄色葡萄球菌(S.aureus)超抗原毒素在其产生菌引起的乳腺炎中的作用,本研究纯化制备了重组中毒休克综合征毒素1(rTSST-1),并以5μg、15μg和30μg 3个剂量接种小鼠乳腺,结果显示3个剂量均引起了小鼠乳腺眼观炎症变化,并随着感染剂量加大病变呈现加重趋势。以1×10~2cfu和1×10~3cfu两个剂量的S.aureus R8菌株感染乳腺后24h眼观均出现了红肿变化,48h、72h时出现了化脓、干酪样坏死,且高剂量组病变重于低剂量组。进一步比较研究了以rTSST-1(15μg)、S.aureus R8(1×102cfu)和rTSST-1(15μg)+S.aureus R8(1×102cfu)等接种小鼠乳腺后对乳腺的影响,结果显示rTSST-1组小鼠乳腺眼观病变最轻,S.aureus R8组最重;接种24h后观察组织病变,结果显示rTSST-1组与rTSST-1+S.aureus R8组病变相近,小鼠乳腺腺泡形态边缘不完整、腺泡内有大量嗜中性粒细胞浸润。然而S.aureus R8组小鼠乳泡形态边缘破坏严重但嗜中性粒细胞等免疫细胞浸润数量明显少于前两组。乳腺活菌计数结果显示,S.aureus R8组小鼠的活菌数显著高于rTSST-1+S.aureus R8组。本研究结果显示TSST-1可单独引起小鼠乳腺炎症,而在TSST-1与S.aureus同时感染乳腺时,TSST-1减轻了乳腺组织的炎症程度。这一结果显示TSST-1引起的小鼠腺泡中嗜中性粒细胞的大量浸润可能对促进乳腺中S.aureus的有效清除具有重要作用。本研究将为有效防控S.aureus引起的奶牛乳腺炎提供新的参考依据。     

CpG-DNA对金黄色葡萄球菌诱导的大鼠实验性乳腺炎的作用

72只泌乳期SD雌性大鼠随机均分成对照组和试验组(n=36),对照组于产后0h左后腿胫骨前肌内注射0.01mol/L、pH7.2 PBS100μL/只;试验组肌注CpG-DNA 200μg/只。产后72h经乳头管灌注2×1012CFU/mL金黄色葡萄球菌各100μL/侧到第4对乳腺(两侧)内。分别于灌注前0h,灌注后8、16、24、48和72h(n=6)颈静脉放血处死。结果显示,乳腺组织细菌数在灌注后24h上升至最高,CpG-DNA能显著降低8、16和72h的细菌数。IL-2在不同时间点有显著下降,对照和试验组乳腺组织IL-2分别在16和24h下降至最低。TNF-α在24h达最高,CpG-DNA能显著提高0、24和72h乳腺组织TNF-α水平。CpG-DNA能显著提高血清感染后各时间点及乳腺组织0和16h MPO水平。乳腺组织NAGase和白蛋白在24h上升至最高,血清中24h下降至最低。CpG-DNA能显著降低48和72h乳腺组织NAGase活力,并极显著降低8和72h乳腺白蛋白浓度。上述结果显示,CpG-DNA可促进细胞因子的产生,减少乳腺组织细菌数量,减轻炎症介质对细胞和血-乳屏障完整性的损伤,提示CpG-DNA对金黄色葡萄球菌感染诱发的大鼠乳腺炎有一定的保护作用。     

孕酮诱导猪中性粒细胞胞外诱捕网形成及其机制

中性粒细胞(polymorphonuclear neutrophils,PMN)胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)是一种重要的先天性免疫反应机制。为了探究孕酮是否与猪PMN NETs形成相关,本研究通过分离母猪外周血获得PMN,与不同质量浓度孕酮(10,20,40μg/L)共孵育2 h后,通过激光共聚焦显微镜观察NETs的形成;运用picoGreen~?试剂盒定量分析NETs的释放水平;通过乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒分析细胞外LDH活性。结果表明,孕酮可以显著诱导以DNA为骨架,装饰有PMN弹性蛋白(neutrophil elastase,NE)和髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)等蛋白颗粒的NETs形成,NETs形成与孕酮诱导剂量以及孵育时间呈正相关,且孕酮诱导猪PMN释放NETs的过程中,细胞外LDH活性无改变。本研究为有关雌性生殖激素参与调节母猪免疫系统的相关研究提供了新思路。     

奶牛低血钙症降低中性粒细胞上ORAI1蛋白的表达

旨在研究泌乳初期高产奶牛高发的低血钙症是否影响细胞内Ca~(2+)通路进而影响中性粒细胞活性并增加泌乳初期的炎症反应。尾静脉肝素抗凝采集血液分离中性粒细胞(PMN),采用Western blot检测ORAI1蛋白的表达,利用流式细胞仪测定静息状态下、离子霉素刺激的中性粒细胞表面ORAI1蛋白丰度以及ROS水平。结果显示,健康对照组奶牛中性粒细胞表面ORAI1蛋白丰度与表达水平均显著高于低血钙症试验组。低血钙症中性粒细胞经离子霉素刺激后细胞表面ORAI1蛋白丰度显著高于未经刺激的低血钙症PMN。健康对照组奶牛中性粒细胞中的ROS水平显著低于低血钙症试验组。这些结果表明,奶牛低血钙症降低中性粒细胞内钙离子进入的调控,以及低血钙症能降低中性粒细胞内的ROS水平,导致泌乳初期的炎症反应。     

脂多糖诱导哺乳期SD大鼠乳腺炎模型的建立

本试验旨在建立脂多糖(LPS)诱导哺乳期SD大鼠乳腺炎病理模型,为后续治疗乳腺炎的深入研究奠定基础。SD大鼠30只,于产后72h随机分为对照组(5只)和试验组(25只),试验组随机分为5组,各试验组大鼠经第4对乳头灌注LPS,剂量分别为10、20、30、40、50μg/侧,对照组灌注等量PBS。灌注后24h观察记录各大鼠临床症状、乳腺组织病理学变化。结果发现,在各试验组大鼠第4对乳腺均可观察到不同程度的炎症反应,且与LPS剂量呈正比例关系。结果表明,成功建立了LPS诱导哺乳期SD大鼠乳腺炎模型。     

乳头灌注脂多糖对奶牛乳腺组织及机体免疫的影响

旨在通过乳头灌注脂多糖(LPS)体外模拟奶牛急性乳腺炎,研究奶牛乳腺组织及机体免疫活化状态。选用4头泌乳后期的荷斯坦奶牛16个乳区为研究对象,采用交叉试验设计,每期试验2 d,试验间隔10 d,试验组乳头管乳头灌注LPS 0. 1 mg,对照组乳头管灌注等量生理盐水。结果:试验组灌注LPS后,奶牛体温值和乳汁中体细胞数随时间变化而逐渐升高,而奶牛血液中白细胞数随时间变化而逐渐降低;乳腺组织的腺泡腔内充斥大量炎性细胞,部分腺泡组织萎缩甚至崩塌;试验组灌注LPS 12 h后奶牛血清中的髓过氧化物(MPO)活性极显著下降(P<0. 01),而乳腺组织中的MPO活性则极显著上升(P<0. 01);奶牛血清及乳清中炎症因子肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)的蛋白含量明显上升(P<0. 01);乳腺组织中Toll样受体4 (TLR4)、核因子NF-κB (p65)蛋白的表达量相比对照组极显著上升(P<0. 01)。研究表明,LPS能够诱导奶牛发生乳腺炎,使乳腺组织发生损伤,并激活机体的TLR4/NF-κB信号通路进而促进其下游炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的基因的表达,使机体发生免疫应答。     

奶牛血和乳中性粒细胞的形态与功能研究概述

中性粒细胞(PMN)是感染性奶牛乳腺炎的重要防御屏障。文章着重介绍了奶牛PMN在光学显微镜、透射电子显微镜和扫描电子显微镜下的形态特点,并叙述了PMN动力学和各类PMN的生长期、PMN生存期调节与发生奶牛乳腺炎之间的关系,最后提出奶牛PMN的研究方向。     

复方氨基酸螯合钙对产后奶牛PMN功能和乳腺炎发病率的影响

为明确复方氨基酸螯合钙口服液对产后奶牛外周血嗜中性粒细胞(PMN)功能和乳腺炎发病率的影响,课题组成员采用趋化试验和吞噬功能试验研究复方氨基酸螯合钙口服液对产后奶牛外周血嗜中性粒细胞功能和乳腺炎发病率进行测定。结果表明:产后每天灌服复方氨基酸螯合钙口服液1周后奶牛嗜中性粒细胞趋化功能和吞噬指数显著提高(P0.05),乳中体细胞数和隐性乳房炎发病率显著降低(P0.05)。说明复方氨基酸螯合钙口服液适合作为产后奶牛专用保健品在临床上应用。     

奶牛大肠杆菌性乳房炎的家兔病理模型建立

为了建立家兔乳房炎疾病模型,采用,选取体重4.0~5.0 kg的健康怀孕新西兰兔20只,随机分成对照组(n=4)和试验组,试验组于泌乳期(分娩后7~10 d)在健康家兔的第2对乳池内注入1.0 m L(106CFU/m L)致病性大肠杆菌制成的细菌悬液,并于灌注后8、16、32和64 h通过临床症状、乳腺组织病理变化、血常规等主要指标以及回归试验等方法验证造模是否成功。结果显示:自造模8 h后家兔出现食欲下降,呼吸、体温以及脉搏不同程度增加,乳腺出现不同程度肿胀,触诊敏感性增强等炎性表现;造模乳腺组织镜检发现有炎性细胞浸润、组织结构破坏等现象;血常规显示试验组白细胞、淋巴细胞、中性粒细胞总数与对照组相比显著增加(P<0.05);回归试验结果全部呈阳性,通过形态学以及生化鉴定为大肠杆菌。结果表明:致病性大肠杆菌诱发家兔乳房炎模型与炎症的病理过程一致,可用作乳房炎疾病模型使用。     

乳头管灌注金黄色葡萄球菌对家兔血清中酶活性的影响

检测和分析乳头管灌注金黄色葡萄球菌前后家兔血清酶活性的动态变化,筛选奶牛乳房炎早期诊断指标。18只健康的怀孕家兔于产后7 d经第4对乳腺乳头管灌注金黄色葡萄球菌建立乳房炎模型。在灌注前2 h与灌注后6、12、24、48、72 h分别采血测定血清中碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、过氧化物酶(LP)和髓过氧化物酶(MPO)的活性并同时采集乳腺组织观察病理学变化。结果显示,血清酶ALP、LDH和MPO活性在灌注后6～48 h时显著升高(P0.05),LP活性在灌注后12～48 h时显著升高(P0.05),4种酶活性均在灌注后24 h时达到峰值;LDH活性变化与不同时相之间的拟合度(R2=0.9704)均大于其他3种酶与不同时相之间的拟合度;LDH活性与乳腺组织损伤程度密切相关。研究结果提示,LDH可以作为乳房炎早期诊断候选指标进一步研究。     

内毒素诱发睢宁白山羊实验性乳腺炎模型的建立及黄芪多糖对其的影响

选择同处于泌乳初期的睢宁白山羊6头,体质量30~40 kg,C.M.T.法检测每头山羊2个乳区乳的体细胞数(SCC)均低于5&#215;105/mL。每头山羊每天早上挤奶后,于右乳区经乳头管灌注黄芪多糖(APS)5 mL,左乳区则通过乳头管灌注等量生理盐水(PSS)作为对照,连续灌注5 d。第6天早上挤奶后,按50μg/kg剂量于左、右乳区通过乳头管注入大肠杆菌内毒素,分别于内毒素处理前1 h及处理后1、2、3、4、5、6、7、8、9、24 h观察乳房的变化并记录直肠温度;并于内毒素处理前1 h、处理后3、6、9、24 h取颈静脉血和采集左、右2个乳区的乳样,采用放射免疫法测定乳汁及血清中TNF-α和IL-2的水平;内毒素处理后24 h,处死动物,取乳腺组织,Bouin氏液固定,H.E.染色进行病理组织学观察。临床症状与病理切片观察均显示,通过乳导管将50μg/kg的内毒素灌注到山羊的乳腺内迅速诱导出典型的急性乳腺炎症状。灌注APS的乳区,乳中TNF-α的水平内毒素处理后3 h显著高于灌注PSS的乳区,92、4 h显著低于灌注PSS的乳区(P&lt;0.05)。与内毒素处理前相比,灌注APS的乳区在内毒素处理后,乳中IL-2...     

CpG-ODN对S.aureus诱导的山羊实验性乳腺炎乳腺的保护作用研究

选择同处于泌乳初期的睢宁白山羊6头，于右乳区经过乳导管灌注10μg／kgCpG—ODN，左乳区则灌入等体积的灭菌100μL0．0lmol／LpH7．2磷酸盐缓冲液（PBs）作为对照，灌注后第3d按同等剂量进行二次灌注；次灌注后第2d，分别于左右乳区经乳导管灌注3mL（2&#215;10^9CFU／mL）金黄色葡萄球菌（S．aurcus），于灌注细菌前（0h），灌注后8h，16h，24h，48h和72h分别收集左右乳区乳汁进行检测。临床症状观察显示，乳腺内灌注3mL（2&#215;10^9CFU／mL）的S．aureus能迅速诱导山羊典型的急性乳腺炎症状。组织学观察显示感染S．aureus后72h乳腺腺泡内仍有嗜中性粒细胞（PMN）浸润，但实验乳区明显减少。乳汁S．aureus数同在感染后24h上升至最高，CpG—ODN能显著降低各个时间点乳汁细菌数。乳汁白细胞介素-6（IL-6）水平同在感染后24h上升至最高，CpG-ODN能显著提高感染后24h乳汁IL．6水平。对照和CpG—ODN处理乳区乳汁肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平分别在感染后24h和16h上升至最高，其中在感染后24h实验乳区比对照下降40．63％（P〈0．051。乳汁N-乙酰-β—D-氨基葡萄糖苷酶（NAGase）水平同在感染后16h达最高（P〈0．01），CpG—ODN能显著提高感染后8h乳汁NAGase水平。上述结果表明CpG—ODN可通过提高乳汁IL-6水平、加速并促进乳汁TNF-α的释放，从而减少了乳汁中S．aureus数量，减轻了炎症介质对细胞的损伤，对缩短炎症过程也有一定的作用，实验结果证实了CpG—ODN对S．aureus感染诱发的山羊乳腺炎的乳腺有保护作用。     

人工诱导家兔实验性乳房炎模型的建立

将48只分娩后7 d的健康新西兰泌乳家兔随机分成空白对照组(T1组)、金黄色葡萄球菌组(T2组)和大肠杆菌组(T3组),分别按每个乳腺0.5 m L量向家兔乳头管内灌注无菌肉汤、金黄色葡萄球菌菌液和大肠杆菌菌液,并于灌注前2 h和灌注后6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、5 d、7 d,采集家兔耳缘静脉血和乳腺组织,测定全血中WBC、LYM和GRA总数以及血清中CRP含量。结果显示:家兔血液中WBC、LYM和GRA总数出现了相应的变化,T2组和T3组血清中的CRP含量有相应程度的升高,表明机体出现炎症反应。