鸭沙门菌的随机扩增多态性DNA分析

以5株同一血清型的鸭沙门茵为研究对象，分别提取基因组DNA后，用20条随机引物对其进行RAPD分析。结果，20条随机引物中不能扩出任何条带的引物有2条，能扩出条带但扩增图谱中没有特异性条带出现的引物有10条，能扩出条带且扩增图谱具有多态性的引物有8条。对筛选到的具有多态性的8条引物进行分析，共扩增出46个DNA片段，片段大小为0．2～3．2kb，其中5个菌株共有的片段有13条，显示多态性的片段有33条。     

甘肃省小麦条锈病主要流行小种的RAPD分析及Su11-4小种SCAR标记建立

本研究应用RAPD标记技术对甘肃省小麦条锈菌主要流行的8个生理小种进行多态性标记分析,旨在寻找小麦条锈菌不同生理小种的特异性标记,共选用220条10碱基随机引物进行筛选,其中有147条可得到稳定清晰的扩增条带。研究结果显示,通过使用147条引物对甘肃省流行的8个条锈菌的生理小种进行RAPD分析,发现各致病小种间遗传变异丰富,其中引物S301在条中33号中扩增得到约507bp的特异条带;引物S39在条中32扩增得到长度约183bp的特异条带;引物S36在Hybrid46-8扩增得到约510bp的特异条带;引物S2140在Su11-4扩增得到约317bp的特异条带。另外,本研究还对扩增得到的特异片段进行回收并进行测序分析,其中依据小麦条锈菌生理小种Su11-4特异条带的测序结果设计特异引物,成功将其转化为对Su11-4小种特异的SCAR标记,这对不同条锈菌生理小种的快速准确检测具有重要意义。     

荷斯坦奶牛耐热性状的RAPD标记研究

为了筛选出耐热荷斯坦奶牛的分子遗传标记，并应用这些分子标记进行高产耐热荷斯坦奶牛的选育。从高产奶牛群中筛选出耐热性状差异显著的10头高产荷斯坦牛作为实验材料，采用RAPD作为分子标记筛选方法。优化奶牛RAPD反应最佳体系，并在154条随机引物中筛选出稳定性好、带型清晰的引物64条。通过RAPD结果，并结合红细胞钾测定结果和生产性能进行分析，确定3个分子标记与奶牛耐热性状相关，并对其进行了测序与分析。     

娟姗牛产奶量性状RAPD标记的研究与生物学分析

为了筛选出高产娟姗牛的分子遗传标记,并应用这些分子标记进行高产娟姗牛的选育,笔者选用250条10碱基随机引物在由20头高产(305 d产奶量4000 kg)和20头低产(305 d产奶量3200 kg)娟姗牛所组成的2个DNA池间进行RAPD-PCR扩分子标记筛选。用筛选到的200条引物对所有个体进行PCR检测,得到了3个与奶牛产奶量性状相关的RAPD标记,并对它们进行了克隆测序以及生物信息学分析。试验结果表明,S11、S1110和S120 3个DNA片段与产奶量有关,其中S11与产奶量性状正相关关系,S1110和S120与产奶量性状呈负相关关系。     

泌乳奶牛血浆嘌呤衍生物含量与产奶性能、瘤胃发酵参数及血浆生化指标的相关性

本试验通过分析泌乳奶牛血浆嘌呤衍生物含量与产奶性能、瘤胃发酵参数及血浆生化指标的相关性,揭示影响血浆嘌呤衍生物含量的因素。试验选取284头泌乳日龄为24～77 d、胎次为2胎的健康荷斯坦奶牛,记录产奶量并分别采集奶样、瘤胃液和血液,检测血浆嘌呤衍生物含量、产奶性能、瘤胃发酵参数及血浆生化指标。结果表明:1)泌乳日龄、乳蛋白产量、产奶量与血浆嘌呤衍生物含量呈显著或极显著正相关(P0.05或P0.01)。2)瘤胃异戊酸、戊酸含量与血浆嘌呤衍生物含量呈极显著负相关(P0.01),瘤胃丁酸含量与血浆嘌呤衍生物含量呈显著正相关(P0.05)。3)血浆Δ~(15)N和肌酐含量与血浆嘌呤衍生物含量呈显著或极显著负相关(P0.05或P0.01),血浆游离脂肪酸、葡萄糖含量与血浆嘌呤衍生物含量呈极显著正相关(P 0.01)。由此可见,影响血浆嘌呤衍生物含量的因素主要包括:泌乳日龄、乳蛋白产量、产奶量,瘤胃异戊酸、戊酸、丁酸含量,血浆Δ~(15)N和肌酐、游离脂肪酸、葡萄糖含量。     

荷斯坦奶牛耐热分子遗传标记的研究

选取10头高产荷斯坦牛为实验材料,优化奶牛RAPD反应最佳体系,并在154条随机引物中筛选出稳定性好、带型清晰的引物64条。结合红细胞钾测定结果和生产性能测定,通过RAPD分析并筛选出3个与奶牛耐热性状相关的分子标记,以期应用这些分子标记进行高产耐热荷斯坦奶牛的选育。     

荷斯坦奶牛抗热应激SCAR标记的研究与应用

为能利用抗热应激SCAR标记应用于奶牛抗热应激新品种的选育,随机选取52头高产耐热荷斯坦奶牛和41头高产不耐热荷斯坦奶牛,利用RAPD技术对筛选出的耐热分子标记进行序列分析和SCAR转化,并以S441 SCAR标记对种公牛和核心群的母牛进行检测和分析.结果表明,随机引物S441和S463在高产耐热组中分别扩增了581 bp和680 bp的特异性片段,序列比较显示,前者与KCNN2基因的同源性达90%,后者与NW-001024067.1|BtUn-WGA9442_2同源性达99%;S441 SCAR标记在种牛的检出率为:母牛12.7%[27/213],公牛32.6%[15/46];数据统计分析表明:有无S441 SCAR标记的母牛产奶量差异不显著(P>0.05),但在热应激条件下产奶量下降率差异极显著(P<0.01).研究初步确定S441标记作为荷斯坦奶牛抗热应激分子标记.     

荷斯坦奶牛抗热应激SCAR标记的研究与应用

为能利用抗热应激SCAR标记应用于奶牛抗热应激新品种的选育,随机选取52头高产耐热荷斯坦奶牛和41头高产不耐热荷斯坦奶牛,利用RAPD技术对筛选出的耐热分子标记进行序列分析和SCAR转化,并以S441 SCAR标记对种公牛和核心群的母牛进行检测和分析。结果表明,随机引物S441和S463在高产耐热组中分别扩增了581 bp和680 bp的特异性片段,序列比较显示,前者与KCNN2基因的同源性达90%,后者与NW_001024067.1|BtUn_WGA9442_2同源性达99%;S441 SCAR标记在种牛的检出率为:母牛12.7%[27/213],公牛32.6%[15/46];数据统计分析表明:有无S441 SCAR标记的母牛产奶量差异不显著(P>0.05),但在热应激条件下产奶量下降率差异极显著(P<0.01)。研究初步确定S441标记作为荷斯坦奶牛抗热应激分子标记。     

荷斯坦奶牛耐热性状的分子遗传标记研究

选取高产荷斯坦牛10头，优化奶牛RAPD反应最佳体系，并在154条随机引物中筛选出稳定性好、带型清晰的引物64条。结合红细胞钾测定结果和生产性能测定，通过RAPD分析并筛选出3个与奶牛耐热性状相关的分子标记，以期应用这些分子标记进行高产耐热荷斯坦奶牛的选育工作。     

硒与奶牛免疫能力的相关性研究

为分析硒与奶牛免疫能力的关系,试验随机选取年龄、胎次、体况相近的泌乳奶牛50头。根据血清硒水平高低分为对照组和试验组,通过双抗体夹心法检测每组实验动物血液中的IL-2、IL-6、TNF-α含量。结果显示,试验组奶牛血清中的IL-2均低于对照组,但差异不显著(P>0.05),奶牛血清中硒水平与IL-2呈正相关(R=+0.133,P=0.356);试验组奶牛血清中的IL-6均高于对照组,但差异不显著(P>0.05),奶牛血清中硒水平与IL-6呈显著负相关(R=-0.28,P=0.049);试验组奶牛血清中的TNF-α均低于对照组,差异显著(P<0.05),奶牛血清硒水平与TNF-α呈显著正相关(R=+0.311,P=0.028)。该试验表明适当补充硒,可以提升奶牛机体免疫能力。     

紫花苜蓿品种鉴定的RAPD分子标记技术研究

试验分别以中苜一号(Medicago sativa L. cv.Zhongmu No.1)、肇东(M.sattva L. cv.Zhodong)、甘农三号(M.sativa L. cv.Gannong No.3)、公农一号(M.satzva L. cv.Gongnong No.1)紫花苜蓿品种的混合DNA(由各品种60个单株的DNA等量混合)为模板筛选RAPD特异性引物,分析比较品种鉴定的特异性谱带.结果表明:从120条随机引物中筛选出S1、S78、S89和S¨5共4条随机引物,可以通过特异性分子标记位点反映品种间的差异;另外,筛选出的RAPD标记引物对各品种60个单株DNA的测试显示品种内部存在特异性标记的单株比例较高;通过RAPD分子标记引物的筛选、标记程序的完善,确定品种特异性标记谱带,可以进行紫花苜蓿(Medicago sativa)品种的鉴定.     

奶牛不同泌乳阶段的产奶性能与营养状况血液生化指标相关性研究

研究以不同泌乳阶段荷斯坦奶牛为试验动物,检测分析奶牛血清中各生理生化指标与产奶性能的相关性,采用3×3二因素完全随机试验设计,将180头荷斯坦奶牛分为9组,每组20个重复。因素一为泌乳阶段,分泌乳前期、泌乳中期和泌乳后期;因素二为产奶量,设高产、中产和低产3个水平。研究不同泌乳阶段和产奶量对血清维生素A、维生素E含量的影响,分析血清中VA、VE、游离脂肪酸(NEFA)、尿素氮(BUN)、钙(Ca)、磷(P)、碱性磷酸酶(AKP)浓度的变化规律及其与产奶性能的相关性。试验结果表明:血清中VA和VE含量都随着奶牛泌乳期的延长而升高,泌乳后期高于前期和中期,高产和中产奶牛血清VA含量显著高于低产奶牛,但高产奶牛血清VE含量显著低于中产和低产奶牛;随着泌乳期的延长,奶牛血清中NEFA、Ca和P含量降低,血清AKP活性与BUN含量呈升高趋势。血清生化指标和产奶性能的相关性与泌乳阶段有关,并且在泌乳前期更为明显,泌乳前期,血清中VA、NEFA和BUN含量均与产奶量呈显著正相关关系,但血清中Ca的含量与产奶量呈显著负相关关系,并且相关性较强;泌乳后期VE含量与产奶量呈显著负相关关系。     

水貂自咬症病因的分子遗传研究

自咬症是笼养毛皮动物水貂、狐狸的常见病,严重影响着毛皮质量,然而其发病原因一直未得以明确。作者初步从分子遗传学角度探讨了水貂自咬症的发病原因。采用随机扩增多态DNA（RAPD）技术分别对正常水貂组和自咬水貂组进行了遗传基因差异上的比对分析。从100个随机引物中筛选出40个重复性好的多态引物,提取水貂健康与患病群体DNA各40个,随机抽取10个构建基因池,进行RAPD标记研究。挑选出在健康组与患病组差异明显的S103引物（序列为AGACGTCCAC）并对其进行克隆,将克隆结果交上海生工生物有限公司测序。引物S103扩增出健康与患病水貂的特异条带,仅在患病水貂组中发现750 bp左右的DNA片段,而在健康组中发现600 bp左右的特异片段。此两条特异片段可初步作为区分健康和患病水貂群体的分子遗传标记,为进一步对水貂自咬症的深入研究奠定了基础。     

围产期奶牛氧化应激初步预警体系的建立

旨在通过对围产期奶牛能量负平衡指标与其他血液生化指标的分析,初步建立围产期奶牛氧化应激的预警体系。本试验以能量负平衡为判定标准,BHBA>1.2 mmoI/L,NEFA>0.4 mmoI/L,GLU<3 mmoI/L为发病组,BHBA<1.2 mmoI/L,NEFA<0.4 mmoI/L,GLU>3 mmoI/L为健康对照组,各采集围产期发病组和对照组各25头奶牛的血液并对血中能量代谢、矿物质代谢、微量元素代谢、氧化应激、免疫抑制指标进行独立样本T检验和spearman相关分析,并利用logistic二元逻辑回归预测疾病,最后利用ROC分析确立分界值和诊断效果。结果显示:发病组奶牛血液中的Ca、GSH-Px、CAT、Ve、Mg、Se、Cu水平小于健康组;发病组奶牛血液中的IL-1、IL-6、CRP、IL-2、HP、TNF-α的水平高于健康组,表明能量负平衡的奶牛机体存在氧化应激并伴有炎症和矿物质代谢紊乱。奶牛血液中的Ca、Mg、GSH-Px、CAT、Cu、Se、Ve与BHBA呈显著的负相关,IL-1、IL-2、IL-6、HP、TNF-α与BHBA呈显著的正相关;奶牛血液中的Ca、Mg、GSH-Px、CAT、Ve、Cu与NEFA呈显著的负相关,IL-2、HP、TNF-α与NEFA呈显著的正相关;奶牛血液中的Ca、GSH-Px与GLU呈显著的正相关,IL-6、HP与GLU呈显著的负相关。经回归分析确定Ca、Mg、GSH-Px、CAT、Cu、Se、Ve、IL-1、IL-2、IL-6、TNF-α、HP、BHBA 13项指标与围产期泌乳奶牛氧化应激相关,经ROC分析确立GSH-Px、CAT、Se、IL-6、IL-2、TNF-α、BHBA 7项指标可作为氧化应激发生的预警指标。结果表明,因此,能量负平衡、VE、Se缺乏、炎性因子增多和矿物质代谢紊乱是奶牛产后氧化应激发生的风险因素,但VE和Ca未成为氧化应激的预警指标。初步证实了围产期奶牛氧化应激发生的预警指标,为今后更有效的监控和预防奠定理论基础。     

牙釉质基因鉴定山羊性别的研究

根据牙釉质(amelogenin,AMEL)同源基因在山羊X、Y染色体上存在不同程度碱基缺失的特点,设计1对引物,对山羊血液基因组DNA混合样进行PCR扩增,将PCR产物纯化、克隆并测序;然后对46个山羊血液DNA样本(♀:22个,♂:24个)进行性别鉴定。结果显示,雌性山羊样品经扩增只产生一条非特异性条带,雄性山羊样品产生一条非特异性条带和一条特异性条带;非特异性片段长度为349 bp,特异性片段为289 bp;46个山羊血液DNA样本鉴定结果与实际性别对比,雌性准确率为100%(22/22),雄性准确率为100%(24/24)。     

三江白猪相对于亲本特异性条带的筛选

本试验是出于三江白猪的保种计划所做的研究。利用RAPD技术,在前期研究的基础上,利用已筛选出的15条10bp的随机引物,在已经优化的RAPD反应条件基础上,对三江白猪及其亲本长白猪与东北民猪组织DNA进行PCR分析。从中筛选出三江白猪相对于亲本的特异性条带,找出三江白猪相对于亲本的基因组变异情况,为三江白猪种间特异性条带的确定奠定基础。     

奶牛血液抗氧化酶活性的季节变化

为了研究奶牛耐热性与体内抗氧化酶活性的相关性,本试验选择胎次相近的35头荷斯坦奶牛,按夏季产奶量下降率分为耐热组(下降率10%以下)和热应激组(下降率40%以上),分别测定春季、夏季试验牛血浆中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力,以及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。结果表明:(1)奶牛血液抗氧化指标受季节性影响较大,夏季血浆中SOD活力、GSH-Px活力极显著低于春季(P<0.01),夏季MDA含量极显著高于春季(P<0.01);(2)血液中抗氧化指标在同一季节、不同组别之间差异较大,春季耐热组SOD活力极显著高于热应激组(P<0.01),耐热组MDA含量显著低于热应激组(P<0.05),夏季耐热组SOD活力、GSH-Px活力显著高于热应激组(P<0.05),耐热组MDA含量显著低于热应激组(P<0.05);(3)夏季奶牛血液中GSH-Px活力及MDA含量分别与夏季奶牛产奶量下降率极显著强负相关(r=?0.710,P<0.01)和极显著强正相关(r=0.733,P<0.01),夏季血液中SOD活力与夏季奶牛产奶量下降率之间没有显著的相关性,夏季GSH-Px活力下降率与产奶量下降率间呈显著正相关(r=0.493,P<0.05),但夏季血液中SOD活力下降率和MDA上升率与夏季奶产量下降率之间无显著的相关性。以上结果提示:(1)奶牛血液抗氧化酶受季节影响较大;(2)奶牛的耐热性可能与血液的抗氧化性相关。     

不同温度下荷斯坦奶牛外周血抗氧化指标的变化及其与淋巴细胞凋亡的关系

选择体重、胎次、泌乳量均接近的健康荷斯坦奶牛32头,研究不同温度条件下奶牛生理常数、外周血淋巴细胞凋亡和细胞周期以及血液抗氧化指标的变化,探讨血液抗氧化指标与细胞凋亡的关系。结果表明:(1)夏季热应激时期奶牛的呼吸频率和直肠温度极显著高于冬季非热应激对照组(P<0.01)。(2)热应激可明显地增加奶牛外周血淋巴细胞的凋亡率,淋巴细胞凋亡率在33.17℃时达到最高,为17.79%,与对照组相比差异极显著(P<0.01)。(3)在28.53℃时,G_0/G_1期细胞比例下降到最低,S期和G_2/M期细胞比例达到最高,与对照组相比较均差异极显著(P<0.01)。同时外周血淋巴细胞的增殖指数在此时达到最大值。(4)奶牛外周血超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-P_x)的活性在夏季高温季节比对照组均呈现极显著的下降(P<0.01)。丙二醛(MDA)的活性在夏季高温季节时表现极显著的上升(P<0.01)。抗活性氧(anti-ROS)活力单位在33.17℃时最低,同时表明血液中活性氧(ROS)海性在此时达到最高。(5)血液中SOD、GSH-Px以及抗ROS活力与奶牛淋巴细胞凋亡率均呈中等强度负相关(P<0.01);MDA含量与ROS活力与淋巴细胞凋亡率呈正相关(P<0.01)。结论:(1)高温对奶牛血液抗氧化指标与淋巴细胞凋亡率的变化影响显著;(2)奶牛外周血抗氧化指标的变化与淋巴细胞凋亡存在一定的相关性。     

鸭疫里氏杆菌鸭源致病性大肠埃希氏菌和鸭沙门菌的RAPD研究

以4株不同血清型的鸭疫里氏杆菌、5株不同血清型的鸭源致病性大肠埃希氏菌和5株同一血清型的鸭沙门为研究对象，分别提取基因组DNA，利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对其基因组DNA进行了分析。结果，从20条随机引物中筛选出了38条能在这3种菌中有较好多态性的随机引物，8个有效引物共扩增出了102个DNA片段，其中14个菌株共有的谱带仅有1条，显示多态性的片段有101个，占99．0％；对RA的4个菌株扩增出的谱带数为51条，共同片段有12条，多态性片段39条，占76．5％；对沙门菌的5个菌株扩增出的条带数为46条，共同片段为13条，多态性片段33条，占71．79／6；对大肠埃希氏菌的5个菌株扩增出的条带数为48条，共同片段4条，多态性片段44条，占91．7％。在8条引物中进一步筛选出1条引物G12，其图谱中535bp的条带为鸭疫里氏杆菌所特有，330bp的条带为沙门菌所特有，1227bp的条带为大肠埃希氏所特有，表明G12可作为分子标记用来鉴别这3种细菌。     

中华拟德氏吸虫与日本血吸虫的RAPD遗传标志分析

中华拟德氏吸虫(Paradeontacylix sinensis)是冷血吸虫,日本血吸虫(Schistosoma japonicum)是温血吸虫的重要代表。分别对中华拟德氏吸虫和日本血吸虫成虫的全基因组进行随机扩增多态性研究,筛选出31种随机引物,对2种成虫扩增得到189条多态性基因片断,S6、S46对中华拟德氏吸虫全基因组有特异性,分别扩增出一条大小约399bp和695bp的特异性强条带;引物S2对日本血吸虫基因组有特异性,只扩增1条1670bp的特异性强条带。多数引物对中华拟德氏吸虫和日本血吸虫成虫全基因组扩增出大小相似的条带,推测中华拟德氏吸虫与日本血吸虫的亲缘关系密切。