荷斯坦奶牛耐热性状的分子遗传标记研究

选取高产荷斯坦牛10头，优化奶牛RAPD反应最佳体系，并在154条随机引物中筛选出稳定性好、带型清晰的引物64条。结合红细胞钾测定结果和生产性能测定，通过RAPD分析并筛选出3个与奶牛耐热性状相关的分子标记，以期应用这些分子标记进行高产耐热荷斯坦奶牛的选育工作。     

荷斯坦奶牛耐热分子遗传标记的研究

选取10头高产荷斯坦牛为实验材料,优化奶牛RAPD反应最佳体系,并在154条随机引物中筛选出稳定性好、带型清晰的引物64条。结合红细胞钾测定结果和生产性能测定,通过RAPD分析并筛选出3个与奶牛耐热性状相关的分子标记,以期应用这些分子标记进行高产耐热荷斯坦奶牛的选育。     

荷斯坦奶牛抗热应激SCAR标记的研究与应用

为能利用抗热应激SCAR标记应用于奶牛抗热应激新品种的选育,随机选取52头高产耐热荷斯坦奶牛和41头高产不耐热荷斯坦奶牛,利用RAPD技术对筛选出的耐热分子标记进行序列分析和SCAR转化,并以S441 SCAR标记对种公牛和核心群的母牛进行检测和分析。结果表明,随机引物S441和S463在高产耐热组中分别扩增了581 bp和680 bp的特异性片段,序列比较显示,前者与KCNN2基因的同源性达90%,后者与NW_001024067.1|BtUn_WGA9442_2同源性达99%;S441 SCAR标记在种牛的检出率为:母牛12.7%[27/213],公牛32.6%[15/46];数据统计分析表明:有无S441 SCAR标记的母牛产奶量差异不显著(P>0.05),但在热应激条件下产奶量下降率差异极显著(P<0.01)。研究初步确定S441标记作为荷斯坦奶牛抗热应激分子标记。     

荷斯坦奶牛抗热应激SCAR标记的研究与应用

为能利用抗热应激SCAR标记应用于奶牛抗热应激新品种的选育,随机选取52头高产耐热荷斯坦奶牛和41头高产不耐热荷斯坦奶牛,利用RAPD技术对筛选出的耐热分子标记进行序列分析和SCAR转化,并以S441 SCAR标记对种公牛和核心群的母牛进行检测和分析.结果表明,随机引物S441和S463在高产耐热组中分别扩增了581 bp和680 bp的特异性片段,序列比较显示,前者与KCNN2基因的同源性达90%,后者与NW-001024067.1|BtUn-WGA9442_2同源性达99%;S441 SCAR标记在种牛的检出率为:母牛12.7%[27/213],公牛32.6%[15/46];数据统计分析表明:有无S441 SCAR标记的母牛产奶量差异不显著(P>0.05),但在热应激条件下产奶量下降率差异极显著(P<0.01).研究初步确定S441标记作为荷斯坦奶牛抗热应激分子标记.     

用RAPD技术筛选中国荷斯坦牛产奶量性状遗传标记

选用320条10碱基随机引物在由36头高产（305d产奶量〉8500kg）和32头低产（305d产奶量〈5600kg）中国荷斯坦牛所组成的2个DNA池间进行RAPD-PCR扩增，从中筛选出稳定性好、带型清晰且在2个DNA池间有明显差异的RAPD引物24条。用筛选到的24条引物对所有个体进行PCR检测，得到了5个与奶牛产奶量性状相关的RAPD标记，并对其中4个进行了克隆测序和SCAR标记转化以及生物信息学分析。结果表明：SCAR标记yield—s139与产奶量密切相关，应用电子克隆方法已将该标记由921bp延伸到2141bp，经同源性比较发现，此标记对应于奶牛基因组中LINEs家族中的一个重复元件，推测该元件附近可能存在与产奶量性状相关的QTLs或主效基因。     

荷斯坦牛耐热性RAPD和SCAR标记的研究

以52头高产耐热组和41头高产不耐热组中国荷斯坦牛的DNA为材料,选用200条RAPD引物,利用RAPD-PCR技术,对荷斯坦牛的耐热性进行研究。结果发现,使用S441引物和S463引物在高产耐热组中分别发现了581 bp（RAPD-S441标记）和680 bp（RAPD-S463标记）2条特异性片段。通过测序和序列比较显示：581 bp的片段与KCNN2基因的同源性达90%;680 bp片段与NW_001024067.1｜BtUn_WGA9442_2的同源性达99%。根据已知KCNN2基因的功能,初步判断KCNN2基因为影响耐热性能的候选基因。得到GenBank登录号EF123743和EF123744。利用NCBI的ORF finder在581 bp中没有发现ORF,与预测其是KCNN2基因内含子3的结论相符合。在680 bp中发现4个开放阅读框（ORF）,分别为ORF1、ORF2、ORF3、ORF4。这4个阅读框分别编码48AA、34AA、45AA、34AA。根据RAPD-S441、RAPD-S463标记的测序结果,利用Premier 5.0软件设计对应的SCAR引物。成功将RAPD-S441标记转化为耐热SCAR标记。     

荷斯坦奶牛耐热性RAPD分子标记的筛选

以耐热性不同的荷斯坦奶牛DNA样品为材料,用170条S系列随机引物对其进行PCR扩增,获得两条特异性条带,通过分析RAPD多态性结果与奶牛生产性能和血液指标的相关性,S275和S2011的差异片段与生产性能中的产奶量呈高度的负相关,与乳脂率呈中度的正相关,其中S275的差异片段还与乳蛋白率呈低度的显著正相关,S275和S2011的差异片段与血液生化指标中的T3、T4呈中度负相关。另外,S275的差异片段还与CK含量呈显著正相关,与钾离子含量呈显著负相关,S2011的差异片段与钠离子含量显著负相关;将特异性条带测序结果进行BLAST分析,表明S275和S2011两条随机引物可用于耐热性能优良奶牛的RAPD筛选。     

娟姗牛产奶量性状RAPD标记的研究与生物学分析

为了筛选出高产娟姗牛的分子遗传标记,并应用这些分子标记进行高产娟姗牛的选育,笔者选用250条10碱基随机引物在由20头高产(305 d产奶量4000 kg)和20头低产(305 d产奶量3200 kg)娟姗牛所组成的2个DNA池间进行RAPD-PCR扩分子标记筛选。用筛选到的200条引物对所有个体进行PCR检测,得到了3个与奶牛产奶量性状相关的RAPD标记,并对它们进行了克隆测序以及生物信息学分析。试验结果表明,S11、S1110和S120 3个DNA片段与产奶量有关,其中S11与产奶量性状正相关关系,S1110和S120与产奶量性状呈负相关关系。     

荷斯坦奶牛耐热性标记的检测

通过对67头中国荷斯坦奶牛在热应激条件下产奶量下降幅度的分析,得出其个体差异较大。并以产奶量下降幅度大小为依据,按胎次、分娩日期、产奶量相近原则分为耐热组和不耐热组,每组6头,测定两组牛在非热应激期的日平均直肠温度、血红蛋白值和红细胞钾浓度。结果表明:红细胞钾浓度在两组牛中存在显著差异(p<0.05),可作为中国荷斯坦奶牛耐热性的评定标记。     

红细胞钾作为南方中国荷斯坦牛耐热性遗传标记的研究

为探讨建立奶牛耐热性评定指标,本研究以湖南省奶牛原种场及某企业牛场饲养的144头荷斯坦奶牛为研究对象,于2005年9月从牛尾采集血液样品,分析测定了红细胞中的钾含量及钾含量的遗传力。结果参试牛群红细胞钾含量在牛群中呈正态分布,平均为636．35±141．53 mg／L。红细胞钾含量主要受遗传控制,其遗传力为0．318,表明红细胞钾含量可以作为奶牛耐热性选择指标,通过对该指标的测定和分析有助于建立奶牛高产耐热品系。     

8个牛品种的大理石花纹评分相关基因变异的微卫星DNA池分析

本研究以8个牛品种为研究对象,利用与大理石花纹评分基因相关的7个微卫星位点结合DNA池分析技术,探讨微卫星DNA多态性与8个牛品种大理石花纹评分间的关系,并根据性状同质性原理预测品种组合,以加快生产出高端"雪花"牛肉。结果表明:日本和牛与荷斯坦牛、安格斯牛、渤海黑牛的相似性系数均超过0.8,而日本和牛与其他牛品种的的相似性系数均小于0.8。利用MEGA4软件采用邻接法进行聚类,利木赞牛与西门塔尔牛先聚合在一起,再与草原红牛聚合;渤海黑牛与鲁西黄牛2个地方良种聚合在一起,以上5个品种聚为第1大类。荷斯坦牛与日本和牛聚合,再与安格斯牛聚在一起,它们聚为第2大类。根据本研究结果和国外肉牛杂交生产实践,从牛肉大理石花纹性状的同质性出发,建议利用日本和牛、荷斯坦牛为亲本,杂交生产高档"雪花"牛肉,以解决我国的肉牛牛源短缺问题。     

欧洲不同良种肉牛杂交利用青海黄牛后代生长发育试验研究

为了研究青海省肉牛杂交改良效果,筛选适应高寒地区肉牛最佳杂交组合,从而为今后开展肉牛杂交工作提供有力的依据,通过6年的试验研究,测定分析了蓝本、皮本、利本、夏本、德本F1牛和青海黄牛的初生,3月龄,6月龄,12月龄,18月龄体重及体尺指标及杂交后代对青海高原高寒气候的适应性观察。结果显示:五个杂交组合F1代不同年龄的生长速度和体尺指标均明显优于青海黄牛(P<0.01)说明良种肉牛改良效果显著,在不同杂交组合后代的比较中,蓝本F1牛生长发育最快,各阶段体重及体尺指标显著高于青海黄牛,比皮本、利本、夏本、德本F1牛也有明显提高。     

Genomic polymorphism in Uruguayan Creole cattle using RAPD and microsatellite markers

Uruguayan Creole cattle inhabit areas that cannot sustain conventional farming. They have adapted to fragile environments and are influenced only by natural selection. In this study, random amplified polymorphic DNA (RAPD) and microsatellite (MS) markers were used to analyse Creole cattle genome polymorphism. A comparative analysis using the RAPD technique was performed in pooled DNA of three cattle breeds (Holstein Friesian, Creole and Hereford) in order to evaluate their amplification patterns. A primary screening of RAPD primers allowed us to select and use those with higher percentage of GC base composition. A total of 215 loci ranging between 300 and 2500 bp were amplified. Bandsharing frequency (BSF) among breeds showed that less related fingerprints were observed between Creole and Hereford cattle (0.77), while the highest similarity frequency corresponded to Holstein Friesian compared to Hereford (0.81). Specific RAPD bands were identified in the three DNA pools and they were tested in every individual of each breed. It may be possible to isolate and sequence these bands to create breed-specific molecular markers. The identification of multiple alleles of the MSCYP 21 in Creole cattle with an heterozygosity of He = 0.846 supported the variability of this genetic resource. The use of molecular markers such as RAPD s and microsatellites is proposed to establish genetic distance among American Creole cattle and possibly related ancestral Iberian breeds.     

奶牛性别鉴定的研究与应用

选取牛雄性性别决定基因SRY (sex region of Y chromosome),根据基因序列设计特异引物,应用PCR技术对5头荷斯坦奶牛DNA样品进行扩增,鉴定其性别;并对设计的引物灵敏度进行检测;对已有的公、母各20头荷斯坦奶牛DNA样品进行PCR盲检,获取奶牛高灵敏度特异性引物,用于奶牛性别鉴定。结果表明,4头公牛DNA样品可以扩增出目标条带(66 bp),1头母牛DNA样品无法扩增出条带,阴性对照扩增无条带;最佳引物灵敏度为1.6 pg/μL,可以很好地满足性别鉴定需要。40头个体中,20头个体DNA样品可以扩增出条带,其余20头个体DNA样品无法扩增出条带,检测结果与实际性别对比准确率为100%。试验结果表明,设计的引物灵敏度比较好,能够满足奶牛性别鉴定的需要。     

郏县红牛的分子育种研究与高效选育

本文围绕郏县红牛肉用性状的高效选育,分析了郏县红牛种质资源特性与现状,综述了郏县红牛分子育种研究进展与成就,在此基础上,提出了郏县红牛高效选育的实施和措施。首先必须坚持进行郏县红牛的本品种选育,其次是利用已取得的在分子育种方面的研究成果,开展高效选育。在选育和扩群的基础上提出了郏县红牛遗传利用的原则和方法。     

颗粒饲料对不同品种生长期牛育肥效果的比较研究

本文主要研究和比较不同品种育肥牛使用颗粒饲料其消化率和饲料报酬的不同。试验选择3个品种处在生长期的育肥牛,利用颗粒料进行饲喂,比较其消化率及饲料效率。试验结果表明,使用颗粒饲料,生长期西门塔尔牛、黑白花奶牛和蒙古草原黄牛在钙、磷消化率方面的差异显著(P<0.05),以黑白花牛最高。但粗纤维、粗蛋白、有机物的消化率以及料肉比等指标间的差异不显著(P>0.05)。总之,在试验期内,使用颗粒饲料,不同品种生长期育肥牛其部分养分的消化率有所不同,但不同品种其饲料报酬的差异并不显著。     

荷斯坦牛中性粒细胞β-防御素基因克隆及其原核表达质粒的构建

根据已发表的牛β-防御素基因序列设计引物,从具有临床乳腺炎症状的荷斯坦奶牛血液中性粒细胞中提取RNA,克隆牛β-防御素基因并插入到原核表达载体pQE-30中,构建了原核表达质粒pQE-30/β-defesion。测序结果表明,克隆的目的基因长189bp,编码1个氨基酸,与已报道的牛β-防御素氨基酸序列同源性达95.6%。本研究为牛乳腺防御素的表达及功能、活性的研究奠定了一定的基础。     

Bovine leukocyte adhesion deficiency (BLAD): a review

Bovine leukocyte adhesion deficiency (BLAD) in Holstein cattle is an autosomal recessive congenital disease characterized by recurrent bacterial infections, delayed wound healing and stunted growth, and is also associated with persistent marked neutrophilia. The molecular basis of BLAD is a single point mutation (adenine to guanine) at position 383 of the CD18 gene, which caused an aspartic acid to glycine substitution at amino acid 128 (D128G) in the adhesion molecule CD18. Neutrophils from BLAD cattle have impaired expression of the beta2 integrin (CD11a,b,c/CD18) of the leukocyte adhesion molecule. Abnormalities in a wide spectrum of adherence dependent functions of leukocytes have been fully characterized. Cattle affected with BLAD have severe ulcers on oral mucous membranes, severe periodontitis, loss of teeth, chronic pneumonia and recurrent or chronic diarrhea. Affected cattle die at an early age due to the infectious complications. Holstein bulls, including carrier sires that had a mutant BLAD gene in heterozygote were controlled from dairy cattle for a decade. The control of BLAD in Holstein cattle by publishing the genotypes and avoiding the mating between BLAD carriers was found to be successful. This paper provides an overview of the genetic disease BLAD with reference to the disease in Holstein cattle.     

牛MC1R基因——新的SNP

本实验克隆测序了中国荷斯坦牛、鲁西黄牛和渤海黑牛三个品种的MC1R基因。运用Blastn工具对本实验得到的序列及所有发表的牛MC1R基因序列进行比对分析，发现牛MC1R基因编码区725bp处存在一新的单核苷酸多态性（SNP）。基于此SNP我们对现发表的所有牛MC1R基因做了总结。