2株黑曲霉植酸酶的分离纯化及其酶学性质研究

对黑曲霉A 3214及其诱变株N14所产植酸酶进行分离纯化并研究各种酶学性质,表明A 3214植酸酶和N14植酸酶的最适pH均为2.5,最适温度均为50℃,60℃保温10 min后酶活保留均在80%左右,用胃蛋白酶处理后酶活均保留80%左右,分子量均为47.4 KD,等电点均在4.5到5.0之间,K+,Na+,Ca2+,Mg2+,Fe2+在高浓度时对A3214植酸酶和N 14植酸酶都有抑制作用,而Zn2+,Cu2+,Mn2+却几乎没有抑制作用,A 3214植酸酶对植酸钠的Km值为0.0005 mol/L,N 14植酸酶对植酸钠的Km值为0.0004 mol/L,A 3214植酸酶的比活为135 777.5u/mg,N 14植酸酶的比活为148 447.5u/mg.     

重组酵母E22植酸酶的分离纯化及酶学性质研究

对用黑曲霉植酸酶基因构建的一株重组酵母E22所产植酸酶进行分离纯化并研究各种酶学性质,表明E22植酸酶分别在pH2．5～3．0和pH5．5左右具有2个最适pH峰,有活性pH范围为pH2．0～7．5,pH2．5时的最适温度为45℃左右、对植酸钠的Km值为0．0002mol／L、比活为493328．7u／mg、受Fe^2＋抑制,pH5．5时的最适温度为55℃、对植酸钠的Km值为0．0001mol／L、比活为624376．2u／mg、受Ca^2＋和Zn^2＋抑制,85℃热处理10min酶活性保留70％,pH2．5下用胃蛋白酶、pH5．5下用胰蛋白酶处理6h后酶活均保留90％左右,分子量为61．7KD,等电点在4．5到5．0之间．     

重组酵母E22植酸酶的分离纯化及酶学性质研究

对用黑曲霉植酸酶基因构建的一株重组酵母E22所产植酸酶进行分离纯化并研究各种酶学性质,表明E22植酸酶分别在pH2.5～3.0和pH5.5左右具有2个最适pH峰,有活性pH范围为pH2.0～7.5,pH2.5时的最适温度为45℃左右、对植酸钠的Km值为0.000 2 mol/L、比活为493 328.7 u/mg、受Fe2+抑制,pH5.5时的最适温度为55℃.对植酸钠的Km值为0.000 1 mol/L、比活为624 376.2 u/mg、受Ca2+和Zn2+抑制,85℃热处理10 min酶活性保留70%,pH2.5下用胃蛋白酶、pH5.5下用胰蛋白酶处理6 h后酶活均保留90%左右,分子量为61.7KD,等电点在4.5到5.0之间.     

枯草芽孢杆菌WHNB 02植酸酶的酶学性质研究

从118份样品中分离到1株产植酸酶的枯草芽抱杆菌（Bacillus subtilis WHNB02）,其发酵液经乙醇沉淀、硫酸铵分级沉淀及Sephadex G-100柱层析等步骤后分离纯化了该酶,纯化倍数约为31．5倍,回收率为13．0％。该酶为单体酶,SDS—PAGE测得的分子量约为43KD,以植酸钠为底物的Km值为0．5mmol／L,酶反应的最适温度为60℃,80℃作用10min酶活保存61％,最适pH为7．0,在pH6．0—10．0范围内稳定,酶活性及稳定性都需Ca^2＋存在。EDTA,Mn^2＋,Ba^2＋（5mmol／L）对酶活具有很大的抑制作用。     

米曲霉A-1植酸酶快速纯化及酶学性质

为进一步了解米曲霉A-1植酸酶,利用超滤及Mono Q阴离子纯化柱纯化,分离出米曲霉A-1的植酸酶Phy A1,分子量约为45 kDa,Phy A1在pH5.5时酶活最高,pH4.0～9.0较稳定,最适温度为45℃,在60℃以下内切酶稳定性较好.Mg2+、Mn2+对Phy A1植酸酶活性有较好的激活作用.以植酸钠为底物,应用Lineweaver-Burk双倒数作图法得到米氏常数Km为42 μmol/L.     

底物和产物及其类似物对植酸酶的抑制动力学

本文研究了底物（植酸）、产物类似物（钒酸盐）和产物（磷酸盐）对植酸酶的活力影响。研究发现当植酸的浓度小于0．6mmol／L时,反应速度随着底物浓度的增加而增大;当植酸的浓度在0．6～1．6mmol／L范围内时,反应速度变化不大,维持一个平台期;而当浓度大于1．6mmol／L时,反应速度随着底物浓度的增加而降低,高浓度植酸对植酸酶有明显的抑制作用,动力学分析表明底物抑制常数K’。为2．0mmol／L。分别以植酸和对硝基苯磷酸二钠（pNPP）做底物时研究了钒酸盐对植酸酶的抑制作用,均表现为非竞争性抑制,抑制常数Ki分别为68.29μmol／L和2．42μmol／L。磷酸盐对植酸酶表现为竞争性抑制类型,抑制常数Ki值为1．45mmol／L。     

温度·时间和pH对饲料中植酸酶活力的影响

[目的]研究植酸酶在猪饲料中的应用条件。[方法]采用钒钼酸法测定植酸酶活力,研究植酸酶活力及时间、温度和pH等因素对饲料中植酸酶作用的影响。[结果]各样品溶液的OD平均值分别为0．241、0．245和0．220。总磷量平均值分别为1．6948、1．7229和1．5516μmol／g,酶活平均值分别为5891．78、5743．00和5171．89IU／g。植酸酶的最适温度为55℃。50～65℃下饲料中植酸磷的降解率接近100％,40℃下其降解率为80％。4h后植酸磷的降解率为80％,5～6h后植酸磷基本被完全降解。pH值为2.5和5．5时植酸酶的活性最强;pH值为7．0时,植酸酶的活性很低。在温度为55℃和pH值为5．5的条件下,5h以上植酸酶对植酸钠中植酸磷的降解率为60％-100％;在温度为40℃和pH值为2．5的条件下,4h后其降解率为60％。[结论]该研究为植酸酶在畜禽养殖中的应用提供了理论依据。     

鸭肝碱性磷酸酶的分离纯化及其部分性质研究

经过匀浆、正丁醇除脂、硫酸铵分级分离、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱层析、Sephacryl S-200凝胶过滤等步骤,从鸭肝中分离纯化出电泳纯的碱性磷酸酶,该酶纯化倍数达58．3倍,比活为337．4U／mg．经SDSPAGE和凝胶过滤测得该酶的全分子量为121．0kD,亚基分子量为60．5kD．以磷酸苯二钠为底物,测得该酶的最适pH为9．0,最适温度为40℃．Na^＋、K^＋、Li^＋等一价离子对该酶活性基本无影响,Mg^2＋、Mn^2＋对该酶活性有激活作用,Cd^2＋对该酶活性有抑制作用．米氏常数Km为1．28mmol／L．     

发芽咖啡豆a-半乳糖苷酶的性质研究

[目的]研究发芽咖啡豆a-半乳糖苷酶的酶学性质。[方法]从发芽咖啡豆中提取a-半乳糖苷酶,研究不同温度和pH下的酶活,并确定该酶的最适温度和pH。研究了不同金属离子和不同离子强度（NaC1）对a-半乳糖苷酶酶活的影响。Lineweaver-Burk双倒数作图法测定该酶的Km和Vmu[结果]a-半乳糖苷酶的最适温度和pH分别为45℃、6．0,热稳定温度范围为20～50℃,pH稳定范围为5．0～7．0。Na^＋、K^＋、Mg^2＋和cu^2＋对a-半乳糖苷酶酶活的影响不大,zn^2＋促进酶活,Ba^2＋对酶活稍有抑制,Hg^2＋强烈抑制d．半乳糖苷酶的活性。在0～0．25mol／L离子强度（NaC1）范围内,a-半乳糖苷酶的酶活不受影响。Lineweaver—Burk双倒数作图法测定该酶的k和n。。分别为0．556mmol／L、1．19μmol／min。[结论]该研究为发芽咖啡豆a-半乳糖苷酶的进一步应用提供理论指导。     

枯草芽孢杆菌WHNB 02植酸酶的酶学性质研究

从118份样品中分离到1株产植酸酶的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis WHNB 02),其发酵液经乙醇沉淀、硫酸铵分级沉淀及Sephadex G-100柱层析等步骤后分离纯化了该酶,纯化倍数约为31.5倍,回收率为13.0%.该酶为单体酶,SDS-PAGE测得的分子量约为43 KD,以植酸钠为底物的Km值为0.5 mmol/L,酶反应的最适温度为60℃,80℃作用10 min酶活保存61%,最适pH为7.0,在pH 6.0～10.0范围内稳定,酶活性及稳定性都需Ca2+存在.ED-TA,Mn2+,Ba2+(5 mmol/L)对酶活具有很大的抑制作用.     

黑曲霉培养物急性毒性和微核实验评价

以小白鼠为试验对象 ,对黑曲霉培养物的急性毒性和遗传性毒性进行了研究。结果表明 :黑曲霉培养物的 LD5 0>1 0 g/kg;黑曲霉培养物组与正常饲料组所引起的小鼠骨髓细胞微核率无显著差异。因此初步认为黑曲霉培养物是一种比较安全的饲料原料。     

黑曲霉9813X8株的选育及其固态发酵条件的优化研究

从自然界中分离出的黑曲霉９８１３株经诱变处理,获得一株高产纤维素酶的９８１３Ｘ８突变株。对９８１３Ｘ８株固态发酵产维素酶、半纤维素酶及果胶酶的优化条件进行了研究。通过综合评分的决策方法分析表明,黑曲霉９８１３Ｘ８株的产酶优化条件为：稻草与麸皮的比例１：１,料水比１：２,氮源是１．０％硫酸铵和１．０％豆饼,培养基起始ｐＨ值３．２～３．５,２５０ｍｌ三角瓶中装培养基５～１０ｇ,培养时间４８～６０ｈ;用０．２ｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ４．８的醋酸缓冲液室温下浸提３ｈ,所得粗酶液活性最高。     

灭活黑曲霉与中期啤酒酵母原生质体融合的研究

用ＰＥＧ促融剂使经硫酸二乙酯灭活的黑曲霉ＡＭＳ－１１的原生质体与细胞分裂中期折啤酒酵母ＲａｓｓｅⅫ原生质体融合，在选择性培养基上获得了能利用羧甲纤维素作唯一碳源的杂种酵母菌株ＦＡＳＳ１及ＦＡＳＣ１，经测定其ＤＮＡ量，蛋白质电泳谱带，生长曲线和碳源同化等项目，它们将具有双亲菌株的特征性状。     

两株溶磷黑曲霉的生长特性及对不同难溶性磷酸盐的溶解作用

通过发酵培养实验对ML2、ML4两株溶磷黑曲霉的生长特性及对不同难溶性磷酸盐底物的溶解作用进行了研究。绘制了溶磷曲线,产酸、残糖变化曲线,菌体生长曲线,同时,结果表明：两株曲霉对Ca,（PO4）2、CaHPO4、FePO4、ALPO4,均有较好的溶解作用,说明它们可以适用于不同的土壤。     

钴辐射诱变黑曲霉菌株的初步筛选

用扬州大学饲料营养学教研室筛选并保藏的黑曲霉菌株 ,经6 0 Co照射后 ,最终分离出 3株突变菌株。培养 5d后 ,突变株 A、C、D及野生菌株产生的植酸酶酶活力分别为 883 .52± 1 1 0 .0 8、 70 2 .1 4± 73 .85、 687.0 4± 82 .70、 74 8.1 2± 57.0 5U/ g。突变株 A比野生菌株的产植酸酶能力高 1 8.1 %。此外 ,突变株 A对菜籽饼中硫葡萄糖甙、粗纤维等的降解能力也较强。因此 ,本次筛选出的突变株 A具有较好的实用价值