霸王的原生质体培养及植株再生研究

本研究建立了霸王原生质体再生植株的试验体系。以子叶切块诱导的松软愈伤组织为材料,通过酶法分离出大量有活力的原生质体,原生质体经培养持续分裂形成了愈伤组织,并分化出再生苗。比较了不同培养基和培养密度对原生质体分裂和再生的影响。结果表明,原生质体以2×10⁵个/mL的植板密度,采用液体浅层法培养在附加1.0 mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、0.2 mg/L 6-苄氨基嘌呤(6-BA)、0.2 mg/L激动素(KT)、500 mg/L水解酪蛋白(CH)、2%蔗糖和0.5 mol/L甘露醇的DPD培养基中,可获得最佳效果,其细胞分裂频率达28.4%左右。转移到附加1.0 mg/L 6-BA、0.5 mg/L萘乙酸(NAA)的MS分化培养基上,获得大量的再生苗。     

草地早熟禾新格莱德胚性愈伤组织原生质体培养及植株再生的研究

以草地早熟禾品种——新格莱德成熟种子为供试材料,在含3.0mg/L2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、0.5mg/L6-苄氨基嘌呤(6-BA)的MB₅培养基中进行胚性愈伤组织诱导的培养。并从生长了7～9个月的胚性愈伤组织中分离出原生质体,将该原生质体置于KM₈P培养基(含3.0mg/L2,4-D、0.5mg/L6-BA、100mg/L水解酪蛋白、100mg/L水解乳蛋白、1%蔗糖、0.4mol/L甘露醇)中进行了液体浅层培养。结果表明,新格莱德原生质体在上述KM₈P培养基中培养3d后出现第1次细胞分裂,2～3周后形成小细胞团,此时添加低渗培养液2～3次,小细胞团持续分裂并形成愈伤组织。当愈伤组织块长至3～5mm时,转入固体培养基MS+3.0mg/L2,4-D+0.5mg/L6-BA和MS+0.5mg/L萘乙酸(NAA)+5.0mg/L6-BA上进行培养,使其细胞增殖和分化,且逐步形成完整的植株。     

豆科种间原生质体融合形成愈伤组织

我们对苜蓿和百脉根的原生质体融合及培养进行了研究。用5mM碘乙酰胺处理百脉根原生质体以抑制其细胞分裂,使用在培养早期分裂但未形成细胞群的苜蓿原生质体进行融合,以期望仅有异核的原生质体可以形成愈伤组织。但是,通过聚乙二醇(PEG)处理的原生质体融合仅获得了两块表现有与双亲不同特征的愈伤组织,而多数愈伤组织只表现了百脉根的特征。根据同功酶分析和染色体观察,确认有一块愈伤组织是体细胞杂种,但这块愈伤组织还没有再生出杂种植株。     

野生黄花苜蓿叶肉原生质体培养和植株再生

取野生黄花苜蓿15～20天叶龄的叶片，去掉下表皮，用1％纤维素酶、1％半纤维素酶和0．5％果胶酶的混合液游离原生质体。用改良的MS培养基附加2，4－D、BA和NAA等，在黑暗条件下浅层悬浮培养。培养第4天、第7天和第10天，原生质体分别出现第一次、第二次和多次分裂，在此期间数次加液或换液调节渗透压，直至形成1mm左右的大细胞团，然后转移到附加2，4-D和KT等的MS固体培养基，诱导形成愈伤组织，再经4～5次继代培养，分化成为完整的再生植株。     

草地早熟禾午夜Ⅱ号原生质体培养及植株再生

对草地早熟禾(Poa Pratensis L.)品种-午夜Ⅱ号进行了原生质体培养及其植株再生的研究。以午夜Ⅱ号成熟种子诱导的松软胚性愈伤组织为材料,利用酶解法分离出大量有活力的原生质体。原生质体经培养,持续分裂形成愈伤组织,并分化出再生绿苗和白化苗。研究了不同酶液组成和酶解时间对原生质体游离的影响。结果表明:采用继代培养8-10 d的胚性愈伤组织在1.0%纤维素酶+1.0%离析酶+0.5%果胶酶+0.3%崩溃酶条件下,酶解14-16 h可得到产量和活力较高的原生质体。原生质体以2.0×10⁵-5.0×10⁵个/mL的植板密度,采用液体浅层法在附加1.0 mg/L 2,4-D、0.3 mg/L 6-BA、100 mg/L水解酪蛋白、100 mg/L水解乳蛋白、1.0%蔗糖、0.4 mol/L甘露醇的KM₈P培养基中培养,可形成较小的愈伤组织。愈伤组织经过增殖在分化培养基上(MS+0.5mg/LNAA+2.0 mg/L 6-BA)可诱导芽、根的形成,再生出完整植株。     

苜蓿愈伤组织原生质体游离与培养

对阿尔冈金苜蓿(Medicago sativa L. cv. Algonguin)原生质体游离和培养的最佳条件进行研究,建立其细胞融合原生质体杂交体系。以下胚轴诱导的愈伤组织为材料,研究了愈伤组织继代培养时间、酶液组合、酶解时间及酶液渗透压对原生质体游离的影响,并探讨了愈伤组织原生质体在KM8P培养基上的分裂情况。结果表明:继代12d的愈伤组织游离性最好,最佳酶液组合为2%纤维素酶+0.5%果胶+1%半纤维素酶、最佳酶解时间为12h、最佳酶液渗透压为0.55mol/L;最适宜培养苜蓿愈伤组织原生质体的培养基为KM8P+2.0mg/L2,4-D+1.0mg/LNAA。     

苜蓿组织培养体细胞胚发生体系的建立

采用17个农艺性状优良的苜蓿Medicago sativa丰产品种,诱导体细胞胚发生,结果表明:苜蓿无菌苗子叶在含有2.0 mg/L 2,4-D和0.25 mg/L KT的MS培养基(有机物质有改变)上诱导出愈伤组织;愈伤组织在含有0.05 mg/L NAA和0.5 mg/L 6-BA的MS培养基上形成胚性愈伤组织,并伴随着体细胞胚的发生;发育到子叶期的体细胞胚在不加任何激素的MS培养基上就可以萌发,再生成完整植株。     

桑树原生质体培养再生植株

以桑籽经无菌继代培养的无性繁殖系叶片为材料，酶解分离得到原生质体；在Ｋ８ｐ液体培养基中，进行黑暗、静止、浅层培养，第４天细胞开始分裂，１０天以后形成细胞团；转移到弱光下培养，每隔１０天添加Ｋ８ｐ新鲜低渗培养液，经５－６周培养后形成大小不一的细胞团和小愈伤组织，转到含６－ＢＡ、ＮＡＡ的ＭＳＢ固体培养基上增殖培养，选取其中结构紧密、呈米黄色的愈伤组织在附加６－ＢＡ和ＮＡＡ的ＭＳＢ培养基上进行器管分化；在１／２ＭＳ附加ＩＢＡ的培养基上进行根的诱导，获得桑原生质体再生植株。     

多枝赖草的组织培养

以多枝赖草种子为材料,在MS 3mg/L2,4-D 0.5mg/L激动素 3%蔗糖 0.5%琼脂培养基上暗培养,产生愈伤组织。愈伤组织经多次继代培养后仍可保持分化潜力。在1/2MS 0.5mg/L6-BA 0.5mg/LIBA 3%蔗糖 0.5%琼脂培养基上光照培养后分化出丛生状绿芽,并大量生根,形成再生植株。     

多枝赖草的组织培养

以多枝赖草种子为材料，在MS 3mg／L 2，4-D 0．5mg／L激动素 3％蔗糖 0．5％琼脂培养基上暗培养，产生愈伤组织。愈伤组织经多次继代培养后仍可保持分化潜力。在1／2MS 0．5mg／L 6-BA 0．5mg／L IBA 3％蔗糖 0．5％琼脂培养基上光照培养后分化出丛生状绿芽，并大量生根，形成再生植株。     

2,4-D和BAP对蒙古冰草幼胚愈伤组织诱导及生长的影响

以蒙古冰草为材料。在离体培养条件下对其幼胚的发育进行了研究。结果表明：蒙古冰草的幼胚在不含任何激素的培养基上能直接萌发，幼胚发芽率因培养基而异。N6＋7％蔗糖培养基萌发率最高，达96％；其次为MS＋5％蔗糖培养基。萌发率为90％。当幼胚被培养在减半的N6培养基或减半的MS培养基上时，发芽率均显著降低。以上四种培养基均未发生脱分化现象。相反，在含有2，4-二氯苯氧乙酸（2，4-D）的培养基上，蒙古冰草幼胚不同程度地发生了脱分化，并出现了少量再生芽。在继代培养基中，降低2，4D浓度，附加低浓度6-苄氨基嘌呤（BAP）可以改善蒙古冰草幼胚愈伤组织状态，增加胚性愈伤组织诱导率。从而提高分化率。     

长白山单花橐吾茎尖离体培养研究

以单花橐吾(Ligularia jamesii)茎尖作为外植体进行幼芽诱导,探索单花橐吾的离体快繁途径。结果表明:在MS+6-BA(3.0 mg·L^-1)+NAA(0.3 mg·L^-1)+蔗糖(35 g·L^-1)培养基上的幼芽诱导效果最好,诱导率高达90.1%;增殖培养时在MS+6-BA(2.5 mg·L^-1)+IBA(0.1 mg·L^-1)培养基上的平均增殖系数4.9,幼芽生长健壮,可继代培养6次以上;生根培养采用1/2MS+NAA(0.5 mg·L^-1),生根率达95%,生根白色粗壮,且数量较多。     

黑麦草高效丛生芽的发生及离体开花的初步研究

以一年生和多年生黑麦草优良品种为材料,取无菌种子苗的茎尖生长点部分在加有不同浓度的2,4-D和6-BA的MS诱导培养基上诱导丛生芽发生,然后在加有不同浓度6-BA的增殖培养基上产生大量丛生芽,并长期继代培养.从丛生芽块上剥取单芽转移到生根培养基上诱导根的发生,生根植株移栽成活率达100%.本试验建立了一种诱导频率高、增殖速度快、试验周期短的黑麦草丛生芽离体培养体系.在附加适宜浓度6-BA和ABA的培养基上丛生芽可直接分化出大量花序,40 d后产生花序的芽块频率最高为81%.进而研究了光照、激素和继代培养时间等因素对黑麦草离体开花的影响.     

复序橐吾组培再生体系研究

用复序橐吾(Ligularia jaluensis Kom.)种子获得无菌苗,取其叶片为外植体,以MS培养基为基础,通过添加不同浓度和种类的细胞分裂素及生长素,目的是筛选出叶片组织培养的最适培养基。结果表明:种子较好的灭菌时间为75%酒精30 s+1‰升汞4min;初代培养基为MS+6-BA0.5mg/L+2,4-D1.0mg/L,由此获得的愈伤组织致密、颜色绿,具有很好的诱导效果,其诱导率达到90%;继代增殖的最适培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L,其增殖倍数高达3.9,并且苗生长状况良好;生根最适培养基为:1/2MS+NAA 0.5mg/L,生根率达100%。     

蝴蝶兰幼嫩花梗组织培养和快速繁殖

以蝴蝶兰(Phalaenopsis amabilis)幼嫩花梗获得的无菌苗的茎尖为外植体,通过在MS和1/2 MS培养基中加入不同质量浓度的6-BA、NAA、TDZ和2,4-D来筛选最佳培养基配方,从而初步建立蝴蝶兰的组织培养再生体系.结果表明,花梗用0.1%升汞消毒15 min效果最好.花梗腋芽启动培养基为1/2 M...     

奇岗微繁技术建立及幼苗耐盐性评价

以奇岗茎段作为外植体,确定了最佳取材时期、诱导培养基、生根培养基和分化培养基等,成功建立了奇岗微繁技术体系,并研究了不同浓度NaCl对微繁苗生长速率和生物量的影响。结果表明：腋芽生枝途径微繁体系以5~6叶期茎段为外植体,在75%酒精喷洒表面后,1.0%次氯酸钠浸泡20 min时,污染率为0且出芽诱导率较高（85.2%）。当诱导和继代的MS培养基添加5.0 mg·L^-1 6-苄氨基嘌呤（6-BA）和0.25 mg·L^-1萘乙酸（NAA）时,出芽诱导率为84.0%,繁殖系数最高（320.3%）。生根培养基添加5.0 g·L^-1活性炭适合于生根壮苗培养。将试管苗炼苗后移栽到不同NaCl浓度的培养液中,随着NaCl的浓度增加,微繁苗生长速率呈降低趋势;在低于0.8%NaCl条件下奇岗能正常成活,表明微繁苗具有较高的耐盐性。为奇岗快繁、遗传转化体系构建和在盐渍化土地推广应用提供了理论和技术支持。     

羊草幼穗离体培养诱导植株再生的研究

采用离体培养方法首次获得羊草体细胞再生植株。其方法要点是:取羊草幼穗为外植体,经0.1%HgCl₂溶液表面消毒后,接种到含2mg/L2,4-D的MS培养基上,置于恒温25℃条件下诱导愈伤组织。在加有1mg/L2,4-DMS培养基上继代2次后,转移到含1.0mg/LKT和0.5mg/LNAA的MS培养基上分化培养得到再生芽。在无激素的基本培养基上获得了生根的试管苗,试管苗移栽到温室后生长正常。研究结果还表明,尽管从羊草叶片、幼穗和成熟胚在同样培养条件下均能诱导出愈伤组织,但只有幼穗愈伤组织能够继续分化出再生植株。羊草试管苗的分化因基因型和外源激素的不同而异。     

外源诱导物对百里香植株再生过程中脂氧合酶活性的影响

以1/2 MS为基本培养基,分别用不同浓度梯度的蔗糖、NO3-/NH4+、丙氨酸、谷氨酸和丙酮酸处理百里香（Thymus vulgaris)再生植株30 d后,测定其对脂氧合酶(LOX)活性的影响。另外,培养百里香20、30和 40 d 后分别用茉莉酸甲酯、水杨酸和壳聚糖等外源因子对百里香进行处理,在不同的处理时间下测定LOX活性,探讨外源因素对增殖百里香中LOX活性的影响。结果表明,碳氮源调控30 d百里香,蔗糖浓度为4%、NO3-/NH4+比例为2∶1时最高;前体调控添加0.6 mmol·L-1苯丙氨酸和0.4 mmol·L-1谷氨酸诱导LOX活性达到最大值,丙酮酸对LOX酶活几乎无影响;20 d百里香经1.0 mmol·L-1 MeJA喷施诱导48 h后LOX活性为对照的655.4％,经150 mg·L-1 SA诱导12 h后LOX活性为对照的503.8％,经200 mg·L-1壳聚糖诱导24 h后LOX的活性为对照的429.1％。30 d百里香经0.5 mmol·L-1 MeJA诱导48 h后LOX的活性为对照的688.1％,经150 mg·L-1 SA诱导12 h后LOX的活性为对照的383.8％,经200 mg·L-1壳聚糖诱导24 h后LOX的活性为对照的360.8％。40 d百里香在外源处理因素作用下对LOX活性作用不明显。可见,在不同时期用不同处理因素对百里香再生植株进行处理能显著调节LOX的活性。     

多年生黑麦草组织培养与植株再生研究

对多年生黑麦草种子为外植体的植株再生过程进行系统研究,结果表明,在改良的MS培养基(MSM),以MS无机盐+9.9mg/L维生素B₁+9.5mg/L维生素B₆+4.5mg/L尼克酸+1mg/LCH+30g/L蔗糖+琼脂8g/L为基本成分,附加5mg/L2,4-D和0.05mg/LKT时,适合种子的愈伤组织诱导;继代培养基附加2mg/L2,4-D和0.1mg/LKT;分化培养基附加1mg/L2,4-D和1mg/LKT;生根培养基为无激素的MS培养基。完成植株再生约需12周,愈伤组织分化率为70%。