利用大白菜小孢子胚状体获得抗除草剂转基因植株

大白菜小孢子培养获得的子叶期胚状体,经粉碎的玻璃碴摩擦后,与农杆菌共培养,在加筛选剂Ｂａｓｔａ（和ｐｈｏｓｐｈｉｎｏｔｈｒｉｃｉｎ ５ｍｇ／Ｌ）的培养基上,再生出数株绿苗。自交留种后,对其后代苗期进行的Ｂａｓｔａ抗性鉴定显示,有４株抗此除草剂。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果显示,抗性植株的基因组中各有一个ｂａｒ基因插入位点。对转化株的小孢子进行再培养,后代小孢子植株对Ｂａｓｔａ抗性的分离比显示,此转基因     

影响油菜游离小孢子培养再生因素的研究进展

游离小孢子培养已经成为油菜遗传育种和生物工程的重要内容。由于影响游离小孢子形态发生的因素较多，尤其是生长在大田环境下的植株，小孢子发育不一致，游离小孢子形态发生产生频率低，因此形态发生诱导率低仍然是限制该技术广泛应用的一个问题。为此，深入和全面了解影响小孢子形态发生能力及再生体系的各种因素，掌握这一领域的研究动态和今后发展的方向，有助于优化油菜小孢子的再生体系、促进油菜育种。本文总结了油菜游离小孢子形态发生的研究进展，并认为应用分子技术克服小孢子离体形态发生障碍有极大的发展潜力。     

环境条件对白菜小孢子培养的影响

以“ＨｏＭｅｉ”和“东京笋”两个白菜品种为材料，探讨了植株栽培的环境条件对白菜小孢子培养的胚状体发生和植株再生的影响。结果表明，对胚状体发生能力较强的ＨｏＭｅｉ品种，环境条件对小孢子培养有一定的影响，生长在长日照（１４－１８ｈ）和１５－２０℃温度条件下的植株，胚状体发生数及植株再生率显著高于短日照（１２Ｈ）、产高温度下（２５℃）生长的植株。对胚状体发生能力较弱的东京笋品种，环境条件对小孢子培养影响     

基因型和供体植株生长环境对大白菜游离小孢子胚胎发生的影响

１７个用于大白菜常规育种的基因型在ＮＬＮ－１３液体培养基中进行游离小孢子培养，结果有１６个基因型经由小孢子胚胎发生途径获得小孢子胚。这些基因型包括从早熟晚熟的各种类型。各基因之间在小孢子胚胎发生频率方面存在很大差异，产量最高的两个基因型Ｔ１１和ＣＣ１１，平均每百花蕾分别达３５９２８和３４１３２个胚。供体植株生长环境对小孢子胚胎发生具有明显影响；在１０／２０℃（液／昼）的部分控温温室生长的供体植株，     

茄子组织培养与基因工程研究进展

本文综述了茄子组织培养与基因工程技术所取得的进展,并对茄子基因工程的发展进行了展望。迄今已利用茄子幼苗子叶、胚轴、叶片、胚、茎等外植体获得再生植株,是茄子离体再生研究最多的一个领域。其再生的关键取决于材料基因型、外植体类型、培养基类型等因素,不同基因型材料的再生能力差异很大,也影响再生的途径。原生质体是比较理想的进行遗传操作的受体,所以在其来源、培养液组成和成苗途径方面都有研究。花药和小孢子离体培养可以获得单倍体植株,节省获得纯系的时间,并有利于获得重组家系,为生产商用F1杂种开辟了一条重要途径。通过幼苗外植体器官再生、花粉(花药)培养、原生质体和小孢子培养已成功地建立了茄子受体再生系统。茄子基因工程技术在提高现有品质和创新种质方面发挥了积极的作用,农杆菌介化法是茄子转基因常用方法,已在外植体选择及再生、选择压筛选、农杆菌株系和转化浓度、预培养和共培养时间等影响因子方面做了大量的优化工作。转基因技术主要应用于茄子抗虫和单性结实基因工程方面并分别获得了一系列成果。在其他领域如抗病、抗逆等方面应用还很不足。因此作者认为未来的研究工作应集中于：目的基因的标记与克隆、高效受体再生系统的探索、更有效遗传转化方法的应用、扩大遗传转化范围,以提高实际应用水平。     

细胞穿透肽介导的小黑麦小孢子遗传转化研究

本研究选用小黑麦小孢子作为供试材料,进行细胞穿透肽介导的植物单倍体细胞遗传转化可行性研究。提取单核靠边期的小黑麦小孢子进行悬浮培养,将细胞穿透肽与报告基因GFP的表达框复合物对小孢子进行转化。转化植株进行了PCR分子检测,并在荧光体视显微镜下观察外源GFP基因的表达情况。共获得21株候选转基因植株,其中染色体自然加倍植株为10株。T1代加倍植株的PCR检测结果显示,加倍的转基因株系中有3个株系的PCR检测结果呈阳性。通过荧光体视显微镜可在转基因植株的幼胚部位观测到GFP蛋白的荧光。以上结果表明外源GFP基因已经整合到小黑麦基因组上并且得到表达并稳定遗传。因此,由细胞穿透肽介导的植物单细胞转化是一种有效、可行的植物单细胞转基因方法。     

青麻叶大白菜小孢子培养及新品种选育

对影响青麻叶大白菜游离小孢子培养的因素进行了研究。结果表明：供体植株的基因型与小孢子胚胎发生密切相关;33℃,24h高温处理有助于小孢子转化成胚状体,每蕾成胚数比25℃恒温培养提高4．5倍;在培养基中加入外源激素和多种氨基酸可以提高胚状体的诱导效率,平均比对照增加59．64％;培养基的琼脂含量增加到12g／L能显著提高小孢子胚的成苗率,比含琼脂8g／L的高出40．5个百分点。通过对青麻叶大白菜小孢子胚的培养,获得二倍性的双单倍体植株,从中选出性状优良的纯系进行杂交组合的选配,培育出青麻叶大白菜的新品系。     

玉米小孢子高频再生培养技术程序研究

以大田种植的玉米供体植株为实验材料,以提高游离小孢子存活率及成胚率为重点进行了技术优化研究。摸索出了一些行之有效的技术措施,提高了游离小孢子的离体培养反应,获得了一批再生植株。通过技术优化,建立玉米小孢子离体培养高频再生技术程序,在此基础上构建了玉米DH育种技术平台。应用这一技术平台,可以在当年获得玉米DH纯系的种子,第二年即可安排大田纯系鉴定。     

菜心小孢子胚再生体系优化及植株倍性鉴定

为进一步优化菜心游离小孢子胚再生技术体系,本研究以3份不同基因型的菜心小孢子胚状体为试验材料,研究不同培养基类型、培养基中不同琼脂浓度和不同胚龄对胚再生的影响,并对再生植株进行倍性鉴定。结果表明,使用B5培养基时各基因型的成苗率均高于MS培养基,褐化率低于MS培养基,B5培养基是菜心小孢子胚状体再生的适宜培养基;培养基中添加适宜浓度的琼脂可提高再生植株的成苗率,随着琼脂浓度的增加,出苗率呈先升后降的趋势,琼脂浓度为1.0%时,各基因型的出苗率达到最高;胚状体再生的最佳胚龄是25～29 d,胚龄时间过长或过短均不利于胚状体出苗,其中40 d以上胚龄的胚状体几乎不出苗;倍性鉴定发现菜心小孢子再生植株中同时存在单倍体、二倍体和多倍体,3个基因型的二倍体自然加倍率在62.22%～71.11%之间;75 mg/L秋水仙素处理可提高菜心再生株系的二倍体率。本研究为菜心游离小孢子胚再生体系优化及再生植株倍性鉴定提供了技术基础。     

植物游离小孢子及其培养所获得的组织在遗传转化中的应用

植物游离小孢子及其培养所获得的组织是植物基因工程中优良的受体,它们具有单倍性和较高胚胎发生能力的特性。因此,以它们为受体构建遗传转化体系可以快速获得纯合的转基因植株。通过综述植物游离小孢子及其培养所获得的胚状体、愈伤组织作为转化受体在根癌农杆菌介导法、基因枪轰击法、激光微孔穿刺法、显微注射法、电激法、PEG介导法等转化技术中的应用研究进展,对目前游离小孢子作为转化受体存在的问题及发展前景进行了探讨。     

Cytology of Phleum sp. affin. P. montanum C. Koch

Diploid, tetraploid, and hexaploid plants occurred in foreign plant introductions of P. sp. affin. P. montanum from Turkey and Iran. Within-progeny variations in polyploid levels indicate that divergent races occurred as interspersed but natural populations. One to six B-chromosomes of varying sizes in addition to the normal chromosome complement were present in some plants. Their behaviours appeared essentially similar to those recorded for other species. Certain of the plants examined exhibited cytological features similar to those observed in known hybrids. These included prophase pycnosis, stickiness, split metaphase I plates, unoriented chromosomes at M-1, and low levels of pollen stainability. These features were absent in microsporocytes of other plants. Low open-pollination seed set characterized all plants examined. This may be due to hybridity or possibly to response to ecological conditions of the new environment.Results of co-operative work of the Crops Research Division, A.R.S., U.S. Department of Agriculture, and the Wisconsin Agricultural Experiment Station, Madison, Wisconsin.Former Graduate Student, Department of Agronomy, Wisconsin Agricultural Experiment Station, and Geneticist, Crops Research Division, Agricultural Research Service, U.S. Department of Agriculture.     

紫花醉鱼草(Buddleja fallowiana Balf.f.et W.W.Smith)种子萌发条件的研究

紫花醉鱼草是主要分布于云南西北部海拔 2 70 0～ 380 0 m的一种野生观赏灌木 ,其种子长圆形 ,褐色 ,周围有翅 ,大小约 0 .5 mm× 0 .5 mm,千粒重 0 .0 5 5 g。在 2 0℃及 2 5℃的发芽温度下第 15 d的发芽率分别为 94%和 98% :在抑制紫花醉鱼草种子发芽的 30℃的温度下 ,180 0 lx～ 30 0 0 lx的人工光照和每日光照 16～ 2 0 h能促进种子萌发。在 2 5℃的发芽适温下 ,照光能使紫花醉鱼草种子萌发提前 1～ 3d。低温高海拔的生境和其种子萌发对高温与光照的需求 ,可能是紫花醉鱼草在自然环境中不能自然繁殖成为蔓延性杂草的原因之一。     

金铁锁总皂苷提取工艺研究

采用正交设计,以齐墩果酸为对照品,采用5%香草醛冰醋酸-高氯酸显色剂,以总皂苷提取率为指标来确定金铁锁的最佳提取工艺。结果表明,最佳提取工艺如下：提取温度为70℃、乙醇浓度为80%、提取时间90 min、料液比1:8,该方法成本低、结果稳定、重复性好。     

谢君魔芋染色体数目的观察研究

（云南农业大学魔芋研究所,云南昆明 650201）     

Avena fatua L. subsp. fatua v. glabrata Peterm. subv. pseudo-basifixa Thell. as a source of crown rust resistance genes

Summary An accession of Avena fatua L. subsp. fatua v. glabrata Peterm. subv. pseudo-basifixa Thell. (A. fatua L. CS Sel. No. 1), collected in Czechoslovakia in 1971, was found to be resistant to a wide range of crown rust races. Analyses of crosses of this oat with cvs. Weikuss, Leanda, Mona, Rodney A, Rodney B, Rodney M, Dodge and K 316 indicated that the resistance of A. fatua CS Sel. No. 1 is conditioned by one recessive gene which is in interaction with one partially dominant gene with additive effect. The expression of rust reaction was affected by temperature. The crown rust resistance genes of A. fatua L. CS Sel. No. 1 were non-allelic with stem rust resistance genes Pg-2 (A) and Pg-4(B).     

PEG模拟水分胁迫对地枫皮和八角种子萌发的影响

为明确岩溶山顶植物地枫皮种子萌发对水分胁迫的适应性,研究了不同浓度聚乙二醇(PEG)模拟水分胁迫条件下,地枫皮与同属广布种八角的种子萌发特性.结果表明,地枫皮和八角种子发芽率和发芽势均随PEG浓度的增大而显著降低,发芽最低水势为-0.86 mg/L,地枫皮各PEG浓度的发芽率和发芽势均显著高于八角.水分胁迫下,2种植物均表现出开始发芽时间滞后的特点,但种子发芽持续时间差异不大.复水后,地枫皮与八角种子均能够恢复发芽,且发芽率均达到对照水平.总体而言,地枫皮种子萌发适应水分胁迫的能力很强.